Prácticas habituales de los laboratorios.

Transcripción

1 Prácticas habituales de los laboratorios. Ana María Bielsa Masdeu. Especialista en Inmunología y Medicina Interna. Servicio de Medicina Interna. Hospital de Cruces. Barakaldo. 17/05/2010

2 Estudio de los ANA IFI Detecta todos los ANA salvo anti-jo1 y anti Ro a veces. Título: a mayor título mayor probabilidad de EAS Patrón: orienta a especificidad / diagnóstico ELISA ANA SCREENING ADN Sm U1RNP Ro La Scl70 Jo-1

3 Estudio de los ANA porqué algunos laboratorios no utilizan la IFI? IFI Requiere personal entrenado Subjetiva: patrón, título. ELISA ANA SCREENING Lector de ELISA Objetivo Rápido Económico

4 ANA IFI - + Anti-DNA Anti-ENA (Sm, U1RNP, Ro, La)

5 Protocolo de estudio anti-ena habitual Anti-ENA screening + U1 RNP Sm SS-A SS-B Scl-70 Jo-1 POSITIVO IB

6 Protocolo de estudio anti-ena habitual Anti-ENA screening U1 RNP Sm SS-A SS-B Scl-70 Jo-1 Ag conocidos fuera de screening

7 Protocolo de estudio anti-ena habitual IB Ag conocidos fuera de IB

8 Protocolo de estudio anti-ena habitual ELISA + IB ANA positivo por IFI Anti-ENA negativo ELISA negativo IB negativo Ag conocidos no detectables por ELISA ni IB Puede ser cualquiera de estos positivo, no están presentes en la tira de IB normalmente ni en el ELISA de cribado.

9 Ag conocidos fuera de IB y ELISA habituales ANA y enfermedad ANA y enfermedad Gp 210 Sp 100 RNA pol III ES U3 RNP Th/To Ku Nor 90 CBP CBP ES ES ES ES Mi-2 P 155 SRP pronóstico PL 7 PL12 OJ EJ KS DM DM + cáncer PM + mal PM PM PM PM PM

10 Ag conocidos fuera de IB y ELISA habituales ANA y enfermedad ANA y enfermedad Gp 210 CBP Sp 100 CBBP RNA pol III ES U3 RNP ES Th/To ES Ku ES Nor 90 ES Mi-2 P 155 SRP PL 7 PL12 OJ EJ KS DM DM + cáncer PM + mal pronóstico PM PM PM PM PM

11 Ag conocidos fuera de IB y ELISA habituales ANA y enfermedad ANA y enfermedad Gp 210 CBP Mi-2 DM Sp 100 SOLO CBBP SE SOSPECHARÁN P 155 DM SI + SE cáncer RNA pol III ES SRP PM + mal U3 RNP Th/To Ku Nor 90 REALIZA pronóstico INMUNOFLUORESCENCIA ES PL 7 PM INDIRECTA ES SOBRE CÉLULAS O PL12 PM ES TEJIDOS OJ PM ES EJ PM KS PM

12 Informe de resultado adecuado Buena práctica: informar de los antígenos incluidos en el ENA Screening. No hay acuerdo acerca de que los resultados de ANA sean significativos solamente a partir de un título de 1/160. Normalmente se consideran positivos y está indicado proseguir el estudio en busca de la especificidad a partir de 1/40-1/50.

13 Informe de resultado inadecuado aunque habitual No consta con que técnica se han estudiado los ANA (IFI o ELISA) No especifican que anti-ena han estudiado

14 Informe de resultado inadecuado aunque habitual No consta con que técnica se han estudiado los ANA (IFI o ELISA) sabemos que es ELISA porque dan el resultado en unidades IFI en título: ejemplo 1/40, nunca con decimales, siempre múltiplos de 10. ELISA en unidades: ejemplo 5 UL/ml

15 Resultados contradictorios del mismo paciente al ser estudiado por diferentes laboratorios por utilizar técnicas diferentes de cribado. ANA + en laboratorio A (IFI) ANA en laboratorio B (ELISA)

16 ANA/ENA variabilidad de kits

17 Anti-ENA: diferente combinación de antígenos estudiados por el mismo laboratorio Evolutivo de los resultados de Ac anti-ena de un mismo paciente.

18 ENA: variabilidad de resultados en el mismo paciente según el kit con el que se estudia Ambos resultados son del mismo paciente En este análisis los ENA no incluyen centrómero, histonas ni ribosomal pero no lo describen.

19 ANA: estudio de la especificidad según el patrón. El patrón de IFI es muy útil porque orienta a la especificidad pero no es perfecto ni debe ser obstáculo para investigar las especificidades. Ejemplo de dos sueros del mismo paciente estudiado por el mismo laboratorio: Patrón homogéneo en una determinación, homogéneo y nucleolar en otra. Anti-DNA + se corresponde con patrón homogéneo. Anti-SM y anti-rnp se corresponden con patrones moteados (no descritos en estos resultados). El patrón nucleolar no corresponde ni a anti-dna ni anti-sm ni anti-rnp.

20 ANA: estudio de la especificidad según el patrón. Limitaciones El patrón de IFI es muy útil porque orienta a la especificidad pero no es perfecto ni debe ser obstáculo para investigar las especificidades. Los Ac anti-dna dan un patrón homogéneo Resultado con patrón inesperado.

21 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LOS TEST MUY VARIABLES Sueros de 57 pacientes de LES estudiados por 3 casas comerciales diferentes detectan diferentes anticuerpos, pueden ser tanto falsos positivos como falsos negativos. Hay múltiples estudios comparando diferentes casas comerciales con resultados semejantes.

22 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LOS TEST MUY VARIABLES Un mismo laboratorio puede detectar diferentes anticuerpos en un mismo paciente por haber cambiado de kit o de casa comercial. Ambas son analíticas del mismo paciente, arriba anti-ssb y anti-ssa positivos, abajo ambos negativos. Por la diferente representación de Ag sabemos que es diferente kit.

23 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LOS TEST MUY VARIABLES Mismo paciente Diferentes resultados Diferentes laboratorios Diferentes casas comerciales Ac anti-sm + Ac anti-sm -

24 Ana María Bielsa Masdeu. Servio de Medicina Interna. Hospital de Cruces. Barakaldo.

25 S. ANTISINTETASA Mujer de 37 años. Raynaud desde Dx en 2005 Afectación pulmonar predominante. ANA negativos por IFI x 2 (Laboratorio A) no estudian anti-ena. Ac anti-jo1 positivos x 10 Capilaroscopia patológica con capilares en en Laboratatio B (estudian árbol, escasas dilataciones y ausencias. los ANA por ELISA con Jo-1) Los Ac anti-jo1 y anti-ro pueden no detectarse por IFI.

26 S. ANTISINTETASA Mujer de 56 años. 2008Neumonitis intersticial linfocitaria (enero) Raynaud (agosto) Manos de mecánico. 10/06/2009 ANA 1/50 anti-ena negativos 09/12/2009 ANA 1/800 anti-ena negativos Se solicita estudio de anti-ena por IB con más Ag que el ELISA de screening de Ac anti-ena 03/02/2010 anti-ro52 Capilaroscopia patológica con capilares en árbol, escasas dilataciones y ausencias. El ELISA de screening de Ac anti-ena siempre contiene Ro (tal vez no el 52), la discrepancia de resultado puede deberse a diferente sensibilidad de los test.

27 CONCLUSIONES Es fundamental el conocimiento del sistema de estudio utilizado por cada laboratorio. Es imprescindible una buena colaboración del clínico con el laboratorio. La IFI no debe ser sustituida por el ELISA en el estudio de los ANA. Detecta los ANA conocidos y los desconocidos Puede ser negativo para anti-ro y anti-jo1 El patrón de IFI debe servir para orientar en la búsqueda de la especificidad, no para bloquearla.

28 CONCLUSIONES El uso de ELISA con 6-8 antígenos como cribado de Ac anti- ANA/ENA es frecuente porque es económico y rápido. El ELISA o inmunoblot en tira da más información con mayor coste económico (mayor número de Ag estudidados). El laboratorio debería especificar la técnica utilizada y los antígenos estudiados. Debería evitarse el resultado anti-ena negativo. El resultado de un enfermo puede variar por un cambio en su serología un cambio de laboratorio de diagnóstico un cambio del test

29 Estudio de los ANA Antígenos conocidos y detectables ELISA/IB/IP IFI Detecta todos los ANA salvo anti-jo1 y anti Ro a veces. ELISA ANA/ENA SCREENING 1.ADN 2.Sm 3.U1RNP 4.Ro 5.La 6.Scl70 7.Jo-1 VARIABLE ELISA/IB en tira 1.Sm 2.U1RNP 3.Ro 4.La 5.Scl70 6.Jo-1 7.Histonas 8.Nucleosomas 9.PMScl 10.PCNA 11.Centrómero 12.RNPribosmalP