En nuestro pais el Laboratorio Iglesias/Haramburu es el primero en incorporar dicha tecnología

Transcripción

1 La siguiente información pertenece a los laboratorios ORGENTEC DIAGNOSTIKA de Alemania. Dicho Laboratorio se ha especializado en autoinmunidad, utilizan fundamentalmente el enzimoinmunoensayo para la búsqueda de los distintos antígenos que los obtienen como antígenos recombinantes o por alta purificación de antígenos humanos, obtenidos del núcleo o del protoplama de la célula. Los kits de ORGENTEC tienen un amplio prestigio en el mundo científico, fundamantalmente referido a los fenómenos autoinmunitarios.en base a los equipos de ELISA que ya existían previamente ORGENTEC diseñó un autoanalizador en el que volcó todas las técnicas previamente desarrolladas. En dicho intrumento perfeccionó los procedimientos estandarizandolos,como controlar la temperatura de reacción, utilizar un patrón o testigo individual para cada determinación, un código de barras para identificar el tipo de reacción a realizar etc. Dicho procedimiento lo denominan SMC (calibración sensotrónica memorizada) que cumplen con las normas de las Directivas Europeas para el Diagnóstico in vitro(ivdd) Han desarrolado más de 100 determinaciones para dicho instrumento que ha permitido que en forma inmediata se puedan realizar individualmente técnicas que por su baja tasa de uso era necesario agrupar postergando los resultados. En nuestro pais el Laboratorio Iglesias/Haramburu es el primero en incorporar dicha tecnología A continuación, se agrega un resumen de la traducción de las distintas técnicas aplicadas en inmunologia Anti Jo 1 REUMATOLOGIA El anti-jo-1 ELISA detecta autoanticuerpos (clase IgG) contra el antígeno Jo-1. Estos autoanticuerpos son un marcador conocido y altamente específico para la miositis idiopática. Jo-1 (histidil-arnt-sintetasa) es una enzima citoplasmática que cataliza la unión del

2 aminoácido histidina al ARN de transferencia (ARNt) durante la biosíntesis de proteínas. La sensibilidad diagnóstica de anti-jo-1 para la detección de miositis idiopática es hasta un 30% en los adultos, y en polimiositis es hasta 46%. En contraste, en la forma juvenil de la miositis, anticuerpos contra Jo-1 se encuentran con menos frecuencia. Su especificidad de diagnóstico para la miositis autoinmune es casi 100%. Ellos están completamente ausentes en la enfermedad neuromuscular sin miositis. En pacientes con miositis con un Jo-1 positivo, alrededor del 60% de los casos se trata de síndrome de antisintetasa con participación intersticial de los pulmones (fibrosis pulmonar, alveolitis). Los pacientes afectados tendran una evolución difícil de la enfermedad con numerosos ataques, el pronóstico no es bueno. Anti-histona Hasta 80% de los pacientes que sufren de lupus eritematoso sistémico (LES), y hasta el 95% de los pacientes con lupus eritematoso inducido por fármacos (DIL) tienen autoanticuerpos contra las proteínas histonas en su perfil de anticuerpos. El ELISA antihistona es una prueba sensible que permite la detección cuantitativa de estos autoanticuerpos (clase IgG). Los anticuerpos anti histona no son específicos de una sola enfermedad. Aparte de LES y DIL, están presentes en numerosos trastornos reumáticos, por ejemplo, en la artritis reumatoide, la artritis cronica juvenil y la esclerodermia. También, los anticuerpos histonas son detectables en un máximo de 90% de colagenosis indiferenciadas ANApositivos. Altos títulos de anticuerpos histonas son casi sin excepción, un signo de lupus eritematoso sistémico o - en ausencia de antígenos marcadores LES - del lupus eritematoso inducido por fármacos. En la realización del ELISA anti-histona, pruebas paralelas para dsdna y anticuerpos Sm (Anti-dsDNA y anti-sm ) también se llevarán a cabo con el fin de descartar la presencia de estas dos especies de anticuerpos para el diagnóstico del lupus eritematoso inducido por fármacos.. Anti-dsDNA IgM,IgG o IgA Los ELISA anti-dsdna son tests cuantitativos de anticuerpos anti-dna de doble cadena (dsdna). Los ensayos se utilizan para el diagnóstico inicial de lupus eritematoso sistémico (LES) y para el diagnóstico diferencial de las enfermedades autoinmunes

3 sistémicas. Además de los altos títulos de anticuerpos antinucleares (ANA), la detección de autoanticuerpos contra ADN de doble cadena es uno de los criterios de la ACR para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). Los anticuerpos contra el ADN de doble cadena se observaron predominantemente en las fases activas de la enfermedad y actuan como un marcador de actividad de LES. es un marcador pronóstico que indica una enfermedad grave, multisistémica. La concentración de anticuerpo también puede ser usado para monitorear el éxito terapéutico y para predecir renovados episodios de la enfermedad. Todos los ensayos anti-dsdna se realizan con ADN de doble cadena humana recombinante,altamente purificado como antígeno Anti-centrómero B La detección de autoanticuerpos contra la proteína centrómero B es de gran importancia diagnóstica y pronóstica para la esclerodermia sistémica progresiva (PSS). El anti-centrómero B por ELISA es una herramienta excelente para este propósito. La prueba también es óptima para la caracterización serológica del síndrome CREST y el diagnóstico diferencial del síndrome de Raynaud. La proteína B del centromero es una proteína-adn asociada que, junto con otras proteínas, forma los cinetocoros de los cromosomas. Centrómero B es el antígeno diana en más del 95% de los pacientes con esclerodermia o fenómeno de Raynaud. Debido a que los anticuerpos contra las proteínas de centrómero aparecen a veces años antes de brote de la enfermedad, la detección de anticuerpos anti-centrómero B puede ser un indicador significativo para la aparición de la esclerodermia. El síndrome de CREST, una forma limitada de esclerodermia con un pronóstico más favorable, se puede detectar serológicamente en una etapa temprana con el uso de la prueba anti-centrómero B. Anti-CCP hs (alta sensibilidad) La prueba anti-ccp (alta sensibilidad) " detecta cuantitativamente anticuerpos

4 contra epítopos específicos de MCV" (mutado citrullinated vimentina). Es por lo tanto una prueba de laboratorio altamente sensible y muy específica para el diagnóstico de la artritis reumatoide. El material de la muestra es suero o plasma humano. Anti-CCP hs (alta sensibilidad) " se basa en epítopos peptídicos seleccionados y optimizados" de la propia proteína MCV del cuerpo. Debido a su perfil de antígeno a medida, este ELISA alcanza la más alta sensibilidad al tiempo que se mantiene una alta especificidad. De este modo, se posiciona como la prueba serológica más eficaz para el diagnóstico de rutina rápido y preciso de sospecha de la artritis reumatoide, así como para el diagnóstico de la artritis reumatoide temprana. Junto con el factor reumatoide,los anticuerpos contra antígenos citrulinados (ACPA) se han incluido como factores determinantes en los actuales criterios del ACR para la clasificación de la artritis reumatoide. La introducción de anti-ccp hs (alta sensibilidad) pone a disposición una prueba de ACPA que permite el diagnóstico de la AR con al menos una sensibilidad comparable y significativamente mayor especificidad y poder pronóstico que con factores reumatoides convencionales. Anti-C1q El ELISA anti-c1q es una prueba para la detección cuantitativa de anticuerpos de la clase IgG contra el factor de complemento C1q. Anti-C1q es una excelente herramienta para el seguimiento de la progresión de la enfermedad y la terapia en casos de lupus eritematoso sistémico (LES), así como para la detección de la afectación renal en la enfermedad. el Anti-C1q ELISA también ayuda a confirmar el diagnóstico de síndrome de hipocomplementémico- urticaria vasculitis (HUVs), donde se encuentran los anticuerpos C1q en el 100% de los casos. Ellos pueden ser detectados en el 88% de los casos de glomerulonefritis membranoproliferativa (GNMP). Los autoanticuerpos contra C1q se encuentran en numerosos trastornos reumáticos. En particular, pueden ser detectadas en pacientes con LES, para los cuales existe una correlación inequívoca entre el título de anticuerpos, progresión de la enfermedad, y la implicación del riñón. Anticuerpos C1q suelen aparecer unas semanas, y hasta 6 meses antes del inicio de la nefritis. En los pacientes con LES, por lo tanto se recomienda la monitorización continua del estado de los anticuerpos con anti-c1q s.

5 Anti-alfa-fodrina IgG / IgA La prueba anti-alfa-fodrina para la detección cuantitativa de autoanticuerpos IgG e IgA contra alfa-fodrina. Estos anticuerpos se detectan específicamente en el suero de pacientes con el síndrome de Sjorgren primario o secundario con síntomas sicca. Los anticuerpos Alfa-fodrina se pueden detectar muy temprano, a veces antes de la aparición de SS-A (Ro) o anticuerpos SS-B (La). Así pues, los anticuerpos alfa-fodrin han demostrado ser un marcador sensible y específico para esta condición, particularmente en las primeras etapas de desarrollo. Además, los autoanticuerpos contra alfa-fodrina también se pueden detectar en un máximo de 40% de los pacientes con artritis reumatoide y el 20% de los pacientes con LES. La detección de rutina para los anticuerpos alfa-fodrina por lo tanto facilita el diagnóstico de síndrome de Sjörgen, la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico y confirma el hallazgo. Anti-MCV El anti-mcv ELISA detecta anticuerpos contra vimentina citrulinada mutada (MCV), y es una prueba serológica eficiente y confiable para la artritis reumatoide. Anti-MCV detecta la enfermedad en una etapa muy temprana, incluso en los pacientes que dan negativo para el factor reumatoide, aun antes de la aparición de los síntomas clínicos específicos. Los autoanticuerpos contra vimentina citulinada mutada son marcadores altamente específicos y muy sensibles para la artritis reumatoide (especificidad 97%, sensibilidad> 82%).Los autoanticuerpos anti-mcv son un indicador de lesión avanzada para las articulaciones y la progresión agresiva de la enfermedad. En contraste con la detección de anticuerpos contra péptidos citrulinados cíclicos sintéticos, los cambios en la concentración de anti-mcv corresponden a los cambios de los parámetros clínicos. Además de permitir un diagnóstico inequívoco, el anti-mcv ELISA, también permite controlar el progreso terapéutico.

6 ANTICUERPOS ANTI CCP vs ANTICUERPOS ANTIVIMETINA CITRULINADA MUTADA La citrulinacion es la perdida del grupo amino de muchas proteinas por accion de las deaminasas que transforman la L arginina en L citrulina, esto ocurre con la vimetina que es citrulinada por las deaminasas del liquido sinovial. En 1994 se descubrio que los anticuerpos contra la vimetina citrulinada(ccp) eran altamente especificos para el diagnostico de la AR. Posteriormente por biotecnologia se consiguio obtener formas mutadas de la vimetina citrulinada,(mcv mutada) lo cual mejoro el antigeno respecto al original logrando una mayor sensibilidad y especificidad con los anticuerpos anti MCV mutada, respecto a los CCP Al igual que los CCP permite diferenciar formas agresivas de formas leves de la AR y permite seguir la evolucion terapeutica ANA Detect ANA Detect es una prueba de tamizaje para la detección cualitativa de anticuerpos (IgG) contra los componentes del núcleo de la célula y del citoplasma. Se utiliza para el diagnóstico de enfermedades reumáticas inflamatorias del tejido conectivo. Los anticuerpos antinucleares (ANA) se encuentran en las enfermedades autoinmunes sistémicas, como el lupus eritematoso sistémico (LES), el síndrome de Sjögren, síndrome agudo (enfermedad mixta del tejido conectivo), polimiositis / dermatomiositis y esclerodermia sistémica progresiva (PSS) con el síndrome de CREST. Por lo tanto los ANA actuan como marcadores para las enfermedades individuales del tejido conectivo. La combinación de 26 antígenos humanos nativos y recombinantes altamente purificados en ANA Detect garantiza una excelente especificidad diagnóstica en conjunción con alta sensibilidad clínica. Un fácil manejo y un rendimiento excepcional hacen de este ELISA la prueba de cribado de elección cuando se sospecha de una enfermedad autoinmune sistémica. Anti-nucleosoma

7 El ELISA anti-nucleosoma detecta anticuerpos contra partes del nucleosoma, un componente estructural de la cromatina. Esta prueba serológica sensible y específica ayuda en el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES) y el lupus inducido por fármacos (DIL). La detección de anticuerpos anti-nucleosoma es más sensible que la prueba de anticuerpos dsdna. En LES activo, los anticuerpos anti-nucleosoma son detectables en hasta el 100% de los casos, y se encuentran en aproximadamente el 62% de los casos inactivos. Varios estudios también han demostrado una mayor especificidad de diagnóstico de este ensayo en comparación con dsdna ELISA. Además, los anticuerpos anti-nucleosoma son detectables antes de anticuerpos dsdna. De este modo, proporcionan un indicador valioso para el diagnóstico precoz del LES emergente en los casos en que se sospecha LES, pero en los cuales los anticuerpos dsdna aún no se detectan. Anti-Rib-P La detección de anticuerpos contra un epítopo común de las fosfoproteínas de la subunidad 60S del complejo ribosómico, las P-proteínas ribosomales,son de gran importancia en el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). La prueba adecuada para esto es el anti-rib-p por ELISA, que detecta cuantitativamente anticuerpos IgG contra las proteínas ribosomales P. Los autoanticuerpos contra las proteínas ribosomales P son un marcador altamente específico para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico. Estos se detecta hasta en un 20% de los pacientes con LES.Solo muy rara vez se encuentran en los casos de otras enfermedades autoinmunes, y son detectables en los casos de infección. La concentración de anticuerpos Rib-P se correlaciona bien con el estado de la enfermedad, también se ha considerado una asociación con la depresión y psicosis severa. Se recomienda la detección de anticuerpos anti-rib-p cuando se sospecha de LES y los anticuerpos contra los antígenos Sm y el ADN de doble cadena están ausentes. el uso de la anti- Rib-P ELISA también se pide ante la sospecha de la psicosis inducida por lupus. Anti-RNP-70

8 El anti-rnp-70 ELISAse utiliza cuando se sospecha el síndrome de Sharp, la esclerodermia o lupus eritematoso sistémico, entre otros, Esta prueba detecta autoanticuerpos IgG contra la proteína de RNP-70 en el núcleo de la célula con alta especificidad y sensibilidad. Los autoanticuerpos contra RNP-70, la proteína de 70 kda del complejo U1-snRNP, son conocidos marcadores para la detección serológica del síndrome de Sharp (enfermedad mixta del tejido conectivo, EMTC). La sensibilidad de diagnóstico del marcador es 100%, la ausencia de la RNP-70 excluye por completo EMTC. Para el lupus eritematoso sistémico (LES), los anticuerpos contra RNP-70 son detectables en un máximo de 32% de los casos; en la esclerodermia sistémica que se encuentran en hasta el 10% de los casos. Los pacientes cuyo único anticuerpos antinucleares (ANA) son frente a la proteína RNP-70 tienen la presentación clásica de la EMTC. Si se encuentran autoanticuerpos SLE-típicos adicionales (anti-dsdna, anti-sm, anti-histona), se indica transición al LES. Anti-RNP/Sm El metodo Anti-RNP/Sm ELISA detecta autoanticuerpos contra el complejo de ribonucleoproteína RNP / Sm. Se evalúa cuantitativamente estos anticuerpos y apoya el diagnóstico de trastorno mixto del tejido conjuntivo (, síndrome de Sharp EMTC) y enfermedades autoinmunes relacionadas. El complejo RNP / Sm es un complejo formado por tres multienzimas ribonucleoproteínas U1- específicas (U1-A, U1-C, U1-70 kda) y nueve proteínas del núcleo Sm diferentes. Los anticuerpos contra la proteína de 70 kda del complejo son marcadores muy específicos para el síndrome de Sharp. Casi todos los pacientes afectados tienen anticuerpos contra este antígeno diana. Las proteínas Sm y ribonucleoproteínas A y C son reconocidos por anticuerpos que se producen en los casos de la enfermedad mixta del tejido conectivo, así como el lupus eritematoso sistémico. Sin embargo, en relación con los pacientes de MCTD, las personas con LES tienen generalmente títulos inferiores de la proteína de 70 kda. Anti-Scl-70

9 El anti-scl-70 es un ELISA para la detección de autoanticuerpos contra el antígeno Scl-70, ADN topoisomerasa I. Con una especificidad cercana al 100%, estos anticuerpos son un marcador reconocido y altamente específico para el diagnostico de la esclerodermia sistémica, en pacientes sanos o con enfermedades no autoinmunes, estos autoanticuerpos contra la topoisomerasa son extremadamente raros. Además del diagnóstico serológico de la esclerodermia sistémica, anti-scl-70 también es útil en el diagnóstico diferencial del fenómeno de Raynaud. Como marcadores de pronóstico, los autoanticuerpos contra toposiomeras también son un indicador de un mayor desarrollo de la esclerosis sistémica: los pacientes con anti-topoisomerasa I tienen una mayor tendencia hacia las manifestaciones cutáneas y manifestaciones internas de la enfermedad con afectación de los pulmones, el corazón o los riñones que pacientes que no cuentan con estos anticuerpos. Anti-Sm La detección de autoanticuerpos contra las proteínas Sm es uno de los criterios de la ACR para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). El anti-sm ELISA facilita la detección fiable y altamente específica de los autoanticuerpos tipo IgG contra estos antígenos. Debido a la muy alta especificidad (99%) de este marcador para el LES, la detección fiable de autoanticuerpos Sm basta como criterio diagnóstico de la enfermedad cuando se hayan cumplido al menos tres criterios de la ACR clínicos. Sin embargo, un resultado negativo no descarta la LES. La detección de anticuerpos anti-sm es un marcador pronóstico de la enfermedad. Parece que hay una relación entre los anticuerpos anti-sm y la manifestación orgánica grave de la enfermedad en SNC, de riñón y la piel, manifestaciones mucosas mas la presencia de anticuerpos contra el ADN de doble cadena. Anti-SS-A Anti-SS-A de es un ELISA para la detección cuantitativa simultánea de autoanticuerpos IgG

10 contra SS-A 52 y SS-A 60. El ELISA es útil para el diagnóstico diferencial y el control de las enfermedades reumáticas sistémicas inflamatorias autoinmunes. Las proteínas SS-A 52 y SS-A 60 se unen a los ARN más pequeñas y las partículas de ribonucleoproteína en el núcleo de la célula y en el citoplasma y son por lo tanto un componente del complejo de ribonucleoproteína citoplasmática humana. Los autoanticuerpos contra estos dos antígenos se encuentran principalmente en colagenosis, en particular el síndrome de Sjögren y diversas formas de lupus eritematoso. Anti-SS-A 52 Anti-SS-A 52 es un ELISA para la detección cuantitativa de autoanticuerpos IgG contra la proteína de SS-A 52, una ligasa que es un componente del complejo de ribonucleoproteína citoplasmática. Esta prueba se utiliza para el diagnóstico diferencial y el control de las enfermedades autoinmunes inflamatorias reumáticas sistémicas. Los autoanticuerpos contra SS-A 52 se encuentran predominantemente en colagenosis, especialmente el síndrome de Sjögren y diversas formas de lupus eritematoso. Los autoanticuerpos contra la proteína A SS-52 son específicos para el síndrome de Sjögren, pero menos específica que la SS-A 60. Se producen en los casos de miositis, junto con otros anticuerpos específicos de miositis como anti-srp, anti-pm-scl, o anticuerpos contra aminoacil-trna-sintetasa, aunque en estos pacientes no hay ninguna relación con el síndrome de Sjögren. La participación de las SS-A 52 en la patogenia de bloqueo cardíaco congénito y varias formas de lupus eritematoso parece probable. Anti-SS-A 60 El anti-ss-a-60 por ELISA detecta cuantitativamente anticuerpos de tipo IgG contra el SS-A 60. Esta prueba se utiliza para el diagnóstico diferencial y el control de las enfermedades autoinmunes inflamatorias reumáticas sistémicas. Al igual que la A-SS proteína de 52, SS-A 60 se une al ARN más pequeñas y las partículas de ribonucleoproteína en el núcleo de la célula y en el citoplasma, y es un componente del complejo de ribonucleoproteína citoplasmática humana. Los autoanticuerpos contra SS-A 60 se encuentran sobre todo en los casos de síndrome de Sjögren y el lupus eritematoso. SS-A 60

11 suelen aparecer junto con anti-ss-b y SS-A 52. En conjunción con el anti-ss-a y los anti-ss-a 52 ELISA, la prueba de anti-ss-a-60 permite la diferenciación exacta de los perfiles de anticuerpos para las enfermedades del espectro reumático. Anti-SS-B Anti-SS-Bs es un ELISA para la identificación cuantitativa de autoanticuerpos (clase IgG) contra el antígeno SS-B. Esta prueba es útil para el diagnóstico diferencial y el control de las enfermedades autoinmunes inflamatorias sistémicas. Los autoanticuerpos frente a la proteína SS-B se encuentran en el síndrome de Sjögren y diversas formas de lupus eritematoso. La sensibilidad de diagnóstico del marcador para el síndrome de Sjorgren primaria es 70%; para el síndrome de Sjögren secundario es 50%. Los anticuerpos SS-B se encuentran sobre todo en conjunto con anti-ss-a. En personas asintomáticas con sospecha de síndrome de Sjögren, anticuerpos SS-B pueden aclarar el panorama completo de la enfermedad. Para el lupus eritematoso sistémico, los anticuerpos SS-B son detectables en hasta el 25% de los pacientes y puede proporcionar alguna indicación de que el pronóstico de la enfermedad. Estos anticuerpos se encuentran en hasta el 70% de los casos de lupus eritematoso neonatal, y en el 80% de los casos con lupus eritematoso cutáneo subagudo. Anti-ssDNA El anti-ssdna ELISA es una prueba cuantitativa de autoanticuerpos de la clase IgG contra ADN de cadena sencilla (ssdna). Este ensayo se utiliza para la detección serológica de lupus eritematoso sistémico (LES) y el lupus inducido por fármacos. Los títulos de anticuerpos se correlacionan con el nivel de actividad de la enfermedad: en el suero de pacientes con LES, los anticuerpos ssdna se encuentran 87% durante los ataques agudos de la enfermedad, pero sólo el 43% durante las fases inactivas. Además de la detección de anticuerpos de histonas, la confirmación de anticuerpos ssdna es útil para el diagnóstico diferencial de lupus inducido por fármacos. ssdna se detectan en más

12 del 50% de estos pacientes. Los anticuerpos contra ssdna se encuentran también en pacientes con otras colagenosis y artritis crónica juvenil (JCA). Factor reumatoide IgA,IgG o IgM La tecnica de factor reumatoide permite la detección fiable de los factores reumatoides (RF). La proyección aislado y cuantitativa de las clases de inmunoglobulina individuales de RF puede llevarse a cabo con Factor reumatoide IgG, IgM e IgA. El factor reumatoide es el marcador diagnóstico más conocido para la artritis reumatoide y es uno de los actuales criterios de clasificación ACR para la enfermedad. Los sistemas de ensayo de ELISA para la diferenciación de las diversas clases de factor reumatoide utilizan fragmentos Fc humanos exclusivamente como antígeno. Por lo tanto, una medición homóloga está disponible tanto para la confirmación de aislado de los isotipos de factor reumatoide individuales y para el cribado para el factor reumatoide.