Garantía de Calidad de Medicamentos Área Análisis de Medicamentos - FCByF-UNR Tema: Sustancias de Referencia Preparado por la Dra. Patricia M. Castellano ~ Año 2015~ CÓMO OBTENER UN BUEN RESULTADO? Muestrear y pesar correctamente la muestra Equipos calificados Operadores calificados Métodos validados Procedimiento calificado para la obtención de datos Uso de estándares exactos o sustancias de referencia certificados
USOS DE LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIAS Asegurar la exactitud de un resultado para un método específico Verificar la perfomance de un equipo Verificar la perfomance de un procedimiento Verificar la perfomance de un operador BUENAS PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN Y CONTROL DE LA FA VII Las sustancias de referencia pueden estar disponibles en forma de sustancias de referencias oficiales Las preparadas por el fabricante deben ser analizadas, autorizadas, rotuladas y almacenadas como sustancias de referencia Se deben mantener en un área segura bajo la responsabilidad de una persona designada al efecto Las sustancias de referencia oficiales deben utilizarse solo para el propósito descrito en la monografía correspondiente Pueden establecerse patrones secundarios o de trabajo mediante el empleo de pruebas y controles adecuados a intervalos regulares, para garantizar la normalización Toda sustancia de referencia preparada en la fábrica debe ser chequeada frente a una sustancia de referencia oficial, siempre que este disponible Debe almacenarse y emplearse de tal forma que no se vea afectada su calidad
PROBLEMAS O DIFICULTADES Dificultad para tener sustancias de referencias para todos los compuestos Se puede disponer del compuesto pero en otra matriz Concentración diferente Tiempo de vida limitada Trazabilidad no es siempre posible PREGUNTAS MÁS FRECUENTES Cuál es la diferencia entre una sustancia de referencia y una sustancia de referencia certificada? Cuándo se necesita una sustancia de referencia certificada? Qué dicen las guías? Qué se hace cuando no se dispone de sustancias de referencia certificada? Cómo preparar un estándar de trabajo en mi laboratorio?
TERMINOLOGÍA REQUERIMIENTOS Y REGULACIONES PROGRAMAS OFICIALES DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA SUSTANCIAS DE REFERENCIA CERTIFICADAS TRAZABILIDAD NACIONAL E INTERNACIONAL DE ESTÁNDARES DISPONIBILIDAD PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES DE TRABAJO DEFINICIONES (Según Guía ISO 30-1992) Sustancia de referencia (RM): Material o sustancia en la cual se han determinado perfectamente una o más propiedades para ser usado para calibrar un aparato, evaluar un método o asignar un valor a un material Sustancia de referencia certificado (CRM): Sustancia de referencia acompañado de un certificado, donde las propiedades están certificadas por un procedimiento, en donde cada valor certificado está acompañado por su incerteza
DEFINICIONES (Según Instituto Nacional de Estándares y Tecnología-NIST) Material certificado de referencia estándar (SRM): Material de referencia Material de referencia externo (ERM): Provisto por algún organismo distinto del NIST Material de referencia interno (IRM): Desarrollado por el laboratorio también denominado Material estándar de laboratorio (LSM) o Estándar de trabajo (WS) DEFINICIONES (Según IUPAC- Sección de Química Analítica) Estándar primario: Producto disponible comercialmente con una pureza del 100 ± 0,02% Estándar de trabajo: Producto disponible comercialmente con una pureza del 100 ± 0,05% Estándar secundario: Sustancia de baja pureza estandarizada frente a un estándar primario
TIPOS DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA Soluciones puras para la calibración de un único componente Soluciones con más de un componente para la calibración de multicomponentes Sólidos con uno o más componentes y matrices lo más parecidas al producto que se quiere controlar USOS DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA CERTIFICADAS Validación o revalidación de un método Para demostrar equivalencia entre un método propio y uno estándar Para transferir métodos analíticos a otros laboratorios Para calibrar equipos Calificación operacional del equipamiento analítico Para controlar la perfomance de un procedimiento analítico Para chequear a un nuevo analista Ensayo interlaboratorio para asegurar la perfomance de un método o la capacidad de un dado laboratorio
NORMATIVA PARA LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA Necesidad de materiales de referencia para la calibración Trazabilidad de los estándares reconocidos nacionales e internacionales siempre que sea posible Deben estar rotulados correctamente con: fecha de expiración, condiciones de almacenamiento, fecha de recibido y fecha en que es usado por primera vez Programas calificados para estándares Preparación según procedimientos escritos Preparación a partir de químicos de pureza y composición conocida Certificación de ISO 9001 o equivalente TRAZABILIDAD DE ESTÁNDARES NACIONALES E INTERNACIONALES Estándar primario: certificado por institutos reconocidos nacionales o internacionales (FA VII, NIST, BCR, NIME) Estándar secundario certificado: trazabilidad desde un estándar primario o por métodos independientes con certificado de manufactura Estándar de trabajo: preparado desde estándar primario o secundario o por métodos independientes
NORMATIVA PARA LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA CERTIFICADAS Los compuestos y la concentración deben ser similares a la muestra desconocida La matriz de la muestra de referencia debe ser similar a la matriz de la muestra desconocida La sustancia de referencia debe ser homogénea Si hubiera algún inconveniente en el transporte el material debería ser rehomogeneizado según procedimiento adjunto Las propiedades certificadas de la sustancia de referencia y de la matriz deben ser estables Los errores de los valores deben ser estimados en las sustancias de referencia certificadas PREPARACIÓN, PRUEBAS Y ENSAYO DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA CERTIFICADAS Método definitivo: debe poseer alta precisión y error sistemático cero. La certificación es realizada en un laboratorio Métodos de medida independiente: dos o más métodos deben ser usados. La certificación es realizada en un laboratorio Método consensuado entre laboratorios: un número de laboratorios analiza el material caracterizado. El valor consensuado es tomado como valor medio Materiales al azar son estructuralmente verificados por espectrometría de masas, espectroscopia infrarroja e índice cromatográfico Muchos estándares son preparados gravimétricamente en concentraciones con una precisión ± 0,5% utilizando balanzas electrónicas calibradas por estándares provistos por el NIST A los componentes de una solución se les determina identidad, pureza y concentración por dos métodos
PREPARACIÓN, PRUEBAS Y ENSAYO DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA CERTIFICADAS La homogeneidad de una serie de producción es analizada tomando muestras al azar, tres del comienzo, tres del medio y tres del final La estabilidad se establece comparando muestras de un lote a 0, 90 y 360 días, seguidas de ensayos a 2, 4 y 8 años La concentración es acreditada por un laboratorio de referencia independiente el cual ha sido calificado para este fin y no debe diferir en un ±10% USO CORRECTO DE LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA Propósito definido en el laboratorio Período de validez antes y después del primer uso Condiciones de almacenamiento Instrucciones para su uso Especificaciones para validar la propiedades certificadas Incerteza
PROGRAMA DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD PARA LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA Norma sobre cuando se requiere un material de referencia certificado La certificación del proveedor, certificación ISO 9001 es conveniente Frecuencia y tipos de ensayos del material, deben incluir verificación de identidad, pureza, estabilidad y control de stock mediante un procedimiento definido Registro del material en una base de datos Manipulación y almacenamiento del material Preparación de materiales de trabajo a partir del material adquirido Rótulo con fecha de expiración, condiciones de almacenamiento y toxicidad Acciones a tomar en caso que un criterio de aceptación no se encuentre Pruebas y ensayos a realizar cuando un material ha sido entregado desde otras filiales de la compañía Forma de descarte del material DISPONIBILIDAD DE SUSTANCIAS DE REFERENCIA NIST (Estados Unidos) EU Standards, Measurements & Testing Programme (BCR, Bélgica) National Research Council (NCR, Canadá) Natioanl Research Center for Certified Reference Materials (China) National Institute for Environmental Studies (NIES, Japón) Laborattoire National d Essais (LNE, Francia) International Atomic Energy Agency (IAEA, Austria)
FUENTES DE INFORMACIÓN SOBRE SUSTANCIAS DE REFERENCIA ISO Council on Reference Material (REMCO) publica un directorio para materiales de referencia IUPAC publica un catálogo The Reference Materials Advisory Service (REMAS) de la ORM (Oficina de Material de Referencia) da información sobre especificaciones, aplicación y disponibilidad en el mundo COMAR (Code d Indexation des Materiaux de Reference) su base de datos tiene 8000 sustancias de referencia e incluye la siguiente información: nombre y descripción general del producto, nombre y dirección del proveedor, forma del material, propiedades certificadas, incertezas, fechas de certificación y campos de aplicación
Garantía de Calidad de Medicamentos Área Análisis de Medicamentos - FCByF-UNR Tema: Guía para Preparar Sustancias de Referencia de Trabajo Preparado por la Dra. Patricia M. Castellano ~ Año 2015~ INTRODUCCIÓN-GENERALIDADES Sustancia de referencia de trabajo debe ser usada en el control de calidad del día a día Nunca debe ser usada en reemplazo de una sustancia de referencia certificada Las sustancias de referencia de trabajo deben ser calibradas frente a una sustancia de referencia certificada. Cuando se prepara un nuevo batch debe ser chequeado con el anterior Se debe tener un procedimiento escrito en el cual conste: intenciones de uso de la sustancia, nivel de homogeneidad, estabilidad, detalle del método por el cual será controlada y frecuencia de los análisis
SELECCIÓN DEL MATERIAL PREPARACIÓN DEL MATERIAL PRUEBA DE HOMOGENEIDAD ESTÁ DISPONIBLE EL MATERIAL SI NO SE ESTABLECIÓ LA HOMOGENEIDAD? SI NO SE DETERMINÓ LA ESTABILIDAD? NO SI PRUEBA DE ESTABILIDAD SE NECESITA MEDIR EL VALOR DE REFERENCIA? MEDICIÓN DEL VALOR DE REFERENCIA SI NO DOCUMENTACIÓN POST-PRODUCCIÓN 1-PREPARACIÓN DE LA SUSTANCIA DE REFERENCIA Operaciones más comunes: secado, molienda, tamizado, filtrado, mezclado, purificación, esterilización, submuestreo, recipientes adecuados para la conservación, etc. Se deben tomar precauciones en todos los pasos mencionados anteriormente para evitar la contaminación y degradación del producto, por ejemplo: Si el material debe ser secado se necesitan conocer las condiciones para el mismo con o sin temperatura, a presión reducida, etc. El mezclado puede introducir impurezas especialmente cuando se utilizan equipos mecánicos, deben ser limpiados meticulosamente Recipientes adecuados para su conservación: matrices líquidas que deben ser almacenadas a -20 C no se pueden guardar en recipientes de vidrio
1-PREPARACIÓN DE LA SUSTANCIA DE REFERENCIA RÓTULO Un nombre o número de referencia único Número de batch y muestra Valor de referencia Volumen o peso del contenido Signos sobre cualquier peligro o precaución Condiciones de almacenamiento Fecha de vencimiento o de re-ensayo 1-PREPARACIÓN DE LA SUSTANCIA DE REFERENCIA RÓTULO Ejemplo: SM: 999 Tintura de pescado Concentración de mercurio: 5mg /Kg Batch N 001 Muestra N 001 Contenido: 5 g Guardar a 4 C Fecha de vencimiento: 14 de Abril 2015
2-PRUEBA DE HOMOGENEIDAD La sustancia de referencia debe ser homogénea El objetivo de la prueba de homogeneidad es determinar la distribución en un nivel constante de cualquier impureza, por ejemplo: humedad, disolución incompleta, etc. La homogeneidad depende de la cantidad de muestra Parámetros a considerar 2-PRUEBA DE HOMOGENEIDAD Elección de la prueba de homogeneidad: lo más importante a considerar en la elección del método es la precisión, la exactitud es de menor significancia. El método utilizado debe ser lo suficientemente relevante para detectar inhomogeneidad. Las medidas de todas las muestras deben ser realizadas por el mismo operador, con los mismos calibradores y con el mismo equipo. Ejemplo: en la preparación de un compuesto orgánico como sustancia de referencia la homogeneidad puede ser asegurada determinando la pureza por CLAE, CG o DSC. Sin embargo tales técnicas no determinan los contenidos de las mezclas y tal vez la determinación de agua por el método de Karl-Fischer podría asegurar homogeneidad.
2-PRUEBA DE HOMOGENEIDAD Aspectos a considerar Elección de la muestra: la selección de la muestra puede ser sistemática o al azar. Por ejemplo: tierra se aplica muestreo al azar, para vidrio o material orgánico a granel sistemático. Una solución transparente por simple agitación puede resolver el problema pero no se debe descartar la presencia de partículas no visibles. Número de muestras a seleccionar: no existe una regla fija, depende del tipo de material, del proceso de preparación y del uso. En general no menos de 10 unidades. La British Standard recomienda utilizar la siguiente fórmula: 3⅓ n Siendo n el número total de unidades 2-PRUEBA DE HOMOGENEIDAD Aspectos a considerar Tamaño de la muestra: la cantidad de material para asegurar la homogenidad no debe ser mayor a la cantidad que será usada el material de referencia Prueba estadístico a aplicar: Aplicar la prueba estadística F
3-PRUEBA DE ESTABILIDAD El objetivo de la prueba de estabilidad es asegurar que la sustancia de referencia mantiene todas sus propiedades desde su producción hasta el momento de ser usado. Es deseable conocer todos los estudios de estabilidad de la sustancia de referencia que estén disponibles. Aspectos a considerar Elección del método de medida: como la estabilidad puede ser necesario medirla por largos períodos de tiempo es importante elegir un método del cual se puedan obtener medidas precisa en función del tiempo. La precisión del equipo debe ser mayor que la muestra. La reproducibilidad debería ser menor que la repetibilidad. Ejemplo: en un compuesto orgánico podría asegurarse su estabilidad siguiendo su perfil de pureza por CLAE. 3-PRUEBA DE ESTABILIDAD Aspectos a considerar Selección y cantidad de muestra: habiéndose realizado la prueba de homogeneidad la selección de la muestra no es significativa. Se debe tomar cantidad de muestra suficiente para realizar las pruebas por quintuplicado. Condiciones de la prueba: depende de la naturaleza del material y de los datos disponibles. Los aspectos a ser considerados para un correcto almacenamiento son: luz, humedad, calor y tiempo. Si no existen datos iniciales deben llevarse a cabo estudios de estabilidad acelerados a cuatro temperaturas: -20 C (en freezer), 4 C (en heladera), 20 C (temperatura de laboratorio) y a 40 C.
3-PRUEBA DE ESTABILIDAD Aspectos a considerar Frecuencia de la prueba: para los estudios iniciales se recomienda a 0, 1, 2, 3 y 6 meses. Para largo tiempo 0, 3, 6 y 12 meses y luego una vez por año. En todos los casos depende del tiempo en que va a ser usado el material de referencia. Prueba estadístico: se aplica la prueba t. 4-MEDIDA DEL VALOR DE REFERENCIA Aspectos a considerar Selección del método de medida: depende del uso de la sustancia de referencia: Para ser utilizado en el chequeo del control de calidad de una muestra debe ser medido por un método calificado Para ser utilizado para verificar la perfomance de un método debe ser medido frente a una sustancia de referencia certificada Si no se dispone de una sustancia de referencia certificada o de un método calificado debe ser obtenido por un método primario definitivo o por dos o más métodos y por un chequeo interlaboratorio
4-MEDIDA DEL VALOR DE REFERENCIA Aspectos a considerar Selección del método de medida: Ejemplos: Para un compuesto orgánico el valor de referencia de una sustancia de referencia puede ser obtenido desde la medición de su pureza por CLAE, pero no puedo asegurar que todas las impurezas sean detectadas. Podría usarse Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) que se utiliza para alta pureza, pero no detecta impurezas bajo la forma de soluciones sólidas o compuestos quirales. En conclusión, un solo método no puede asegurar el valor de referencia para una sustancia de referencia, debo tener en cuenta la limitación de cada uno. 4-MEDIDA DEL VALOR DE REFERENCIA Aspectos a considerar Selección y número de muestras: la selección no es aquí significativa como en la prueba de homogeneidad. El número de muestras debe permitir 10 ensayos para cuando se aplica un solo método y 5 ensayos para cuando se utiliza más de un método. Frecuencia de la medición: debe ser chequeado de acuerdo a sus características de estabilidad, si ocurriera algún fenómeno inesperado de determinarse nuevamente. Pruebas estadísticos: cuando se calcula frente a una sustancia de referencia certificado se debe informar un valor medio, intervalo de confianza y evaluar la posibilidad de rechazar un resultado. Cuando se calcula utilizando valores inter-laboratorios debe realizarse un análisis de la varianza (ANOVA).
5-DOCUMENTACIÓN Nombre (s)/ Número (s) de referencia/ Número (s) de batch de los materiales a los que corresponde la documentación Origen/fuente del material Detalles sobre las técnicas utilizadas Fecha de todas las mediciones Detalles de los métodos analíticos usados, incluyendo calibradores Datos de las materias primas Razones y fundamentos si se rechazó alguna técnica o dato Resultados de los análisis estadísticos Valores de referencia a usar Nombre de los analistas responsables de la preparación del material, de las mediciones, de los cálculos y del análisis estadístico Detalles sobre homogeneidad, estabilidad, condiciones de almacenamiento e instrucciones sobre el uso correcto del material 6-POST-PRODUCCIÓN Las sustancias de referencia deben ser almacenados correctamente según los estudios de estabilidad Si sólo una parte será utilizada el resto debe conservarse en frío (-20 C) para preservar su tiempo de vida útil Cuando se prepare un nuevo batch debe ser chequeado contra el anterior