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1 DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN EE.UU. Tel Fax Preste atención a los cambios! LIAISON Calcitonin II-Gen (310650) 1. INDICACIONES El ensayo DiaSorin LIAISON Calcitonin II-Gen es un inmunoanálisis por quimioluminiscencia (CLIA) de tipo sándwich de un solo paso indicado para la determinación cuantitativa de calcitonina en suero humano. Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos y de laboratorio para ayudar en el diagnóstico y tratamiento de estados que denoten exceso o deficiencia de calcitonina. El ensayo debe realizarse en la serie de instrumentos LIAISON. 2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL ENSAYO La calcitonina (CT) es una hormona peptídica de 32 aminoácidos secretada por las células C del tiroides. Se regula en función de las concentraciones de calcio y se metaboliza en el riñón y el hígado. La molécula de CT se separa de una prohormona más grande. Contiene un único enlace disulfuro, que hace que el término amino adquiera la forma de anillo. (1) La calcitonina participa en el metabolismo del calcio y el fósforo. La principal fuente de CT son las células parafoliculares o células C de la glándula tiroides, pero también se puede sintetizar en otros muchos tipos de tejidos, incluidos los pulmones y el tracto intestinal. La calcitonina circula en varias formas distintas, con pesos moleculares que van de a dalton. Su concentración suele ser elevada en niños de ambos sexos, pero es más alta en varones que en mujeres. El CT en suero es el marcador más específico y sensible del carcinoma medular de tiroides (CMT), tanto en el diagnóstico inicial como en el seguimiento posterior a la cirugía (2). El carcinoma medular de tiroides (CMT) es un tumor de las células C productoras de CT y, aunque es poco frecuente, puede encontrarse en un patrón familiar como parte del síndrome de neoplasia endocrina múltiple (NEM) de tipo II. La calcitonina se produce en concentraciones anormalmente altas en casi el 100% de los CMT metastásicos y primarios (2). Los pacientes con formaciones micro o macro de CMT (formación familiar o esporádica) tienen altos niveles de CT que se corresponden con la masa tumoral (3). En un porcentaje reducido de pacientes con CMT no hay distinción entre la concentración basal de la hormona y la concentración normal. Muchos de estos sujetos presentan las etapas iniciales de neoplasia o hiperplasia de las células C, más aptas para tratamiento quirúrgico. Para identificar a estos pacientes con la enfermedad incipiente, se han desarrollado pruebas de estimulación de la secreción de CT (prueba de pentagastrina o de estimulación de carcitonina). El seguimiento postoperatorio de CMT debe realizarse inmediatamente antes y 6 meses después de la cirugía. La primera medición postoperatoria de CT no debe realizarse hasta 2 semanas después de la cirugía (3). Además de en CMT y en tumores neuroendocrinos, es posible observar niveles elevados de CT en otras patologías. La liberación aumentada de CT se produce con enfermedades autoinmunes de la tiroides (tiroiditis de Hashimoto o enfermedad de Graves). Las condiciones no tiroidales donde se han observado niveles elevados de CT son insuficiencia renal grave, hipercalcemia, hipergastrinemia e inflamación pulmonar aguda (3). La calcitonina inhibe la resorción ósea y se administra como medicamento con este fin en casos de osteoporosis, osteítis deformante e hipercalcemia maligna (1). El metabolismo es un proceso complejo y la calcitonina desaparece del plasma de forma multiexponencial que incluye una semivida temprana de unos minutos. 3. PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El método de determinación cuantitativa de calcitonina es un inmunoanálisis directo por quimioluminiscencia (CLIA) de tipo sándwich realizado en dos lugares. El anticuerpo de ratón purificado por afinidad de la calcitonina humana sintética está recubierto hasta la fase sólida. El segundo anticuerpo de ratón purificado por afinidad se conjuga con un derivado de isoluminol. Durante la incubación, la calcitonina se une a la fase sólida y posteriormente se produce la fijación del anticuerpo conjugado con isoluminol. Tras la incubación, el material libre se elimina en un ciclo de lavado. A continuación se agregan los reactivos iniciadores y tiene lugar una reacción quimioluminiscente rápida. La señal luminosa se mide en unidades lumínicas relativas con un fotomultiplicador y es proporcional a la concentración de la calcitonina presente en calibradores, controles o muestras. es310650; /12 1

2 4. MATERIAL SUMINISTRADO Integrador de reactivos Partículas magnéticas (2,4 ml) Conjugado (7 ml) [SORB] [CONJ] Tampón de ensayo (7 ml) Número de ensayos 100 Partículas magnéticas recubiertas con anticuerpos monoclonales de ratón anticalcitonina, ASB al 0,1%, tampón de fosfato, surfactante y ProClin 300 al 0,1%. El anticuerpo anticalcitonina se conjuga con un derivado de isoluminol en tampón de fosfato y ASB al 0,05% con surfactante, EDTA y NaN3 al 0,09%. [BUF AS] Tampón de fosfato con surfactante, IgG murina y NaN3 al 0,09%. Todos los reactivos suministrados están listos para su uso. Incluidos con el integrador (2 viales cada uno) Calibrador 1 (liofilizado) Calibrador 2 (liofilizado) [CAL 1] [CAL 2] ProClin 300 es una marca registrada de Rohm and Haas Co. 10 etiquetas de código de barras para cada nivel de calibrador. Tampón de fostato, surfactantes, EDTA, ASB al 3,2%, ProClin 300 al 0,2% y calcitonina. Reconstituya en 2 ml de agua destilada o desionizada. Guarde y divida en partes el calibrador reconstituido a -20 C. Tampón de fostato, surfactantes, EDTA, ASB al 3,2%, ProClin 300 al 0,2% y calcitonina. Reconstituya en 2 ml de agua destilada o desionizada. Guarde y divida en partes el calibrador reconstituido a -20 C. Materiales requeridos, pero no suministrados (relacionados con el sistema) LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON XL Waste Bags (REF X0025) LIAISON Waste Bags (REF ) LIAISON XL Cuvettes (REF X0016) LIAISON Module (REF ) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Starter Kit (REF ) LIAISON XL Disposable Tips (REF X0015) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON XL Disposable Tips (REF X0015) LIAISON Cleaning Kit (REF ) LIAISON Light Check (REF ) Materiales adicionales requeridos Juego de control LIAISON Calcitonin II-Gen (310651) Material adicional recomendado Diluyente de muestras LIAISON Calcitonin II-Gen (310652) -3 ml/vial 5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES SOLO PARA UTILIZAR EN DIAGNÓSTICOS IN VITRO: No debe utilizarse interna o externamente en seres humanos ni animales. SEGURIDAD GENERAL: Todas las muestras, los reactivos biológicos y los materiales utilizados en el ensayo deben ser considerados como transmisores potenciales de agentes infecciosos. Evite el contacto con la piel, los ojos y las membranas mucosas. El ensayo debe realizarse respetando escrupulosamente las buenas prácticas higiénicas industriales. Absténgase de comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos en el laboratorio de ensayos. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con todos los materiales potencialmente infecciosos; para ello se aconseja utilizar batas de laboratorio, mascarillas y protectores oculares, además de guantes desechables. Lávese las manos a fondo después de cada ensayo. Evite las salpicaduras o la formación de aerosoles cuando manipule, diluya o transfiera muestras o reactivos. Los reactivos derramados deben lavarse con una solución de lejía al 10% (que contenga hipoclorito sódico al 0,5%) y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso. La eliminación de los residuos debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicción sobre el laboratorio, y con las leyes vigentes en cada país. No utilice ningún kit o componente después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. es310650; /12 2

3 RIESGO QUÍMICO E INFORMACIÓN DE SEGURIDAD: Los reactivos de este kit se han clasificado de conformidad con lo establecido en la Norma de Comunicación de Riesgos (Hazard Communication Standard) de OSHA en Estados Unidos, las leyes de derecho a la información (Right-to-Know) estatales de Estados Unidos, las normas reguladoras de Productos Controlados, Seguridad y Salud Ocupacional (Occupational Health and Safety Controlled Products) centrales canadienses y las directivas de la Unión Europea que sean aplicables en cada caso (consulte las fichas de datos de seguridad del material para obtener información adicional). Los reactivos que contienen ProClin /548/CEE / 1999/45/CE / 2001/60/CE CE N.º 1272/2008 CLASIFICACIÓN DE SUSTANCIA: PALABRA INDICADORA: SÍMBOLOS / PICTOGRAMAS: Irritante Sensibilización cutánea, Categoría 1 NA Advertencia! PRECAUCIONES / INDICACIONES DE SEGURIDAD: Xi - Irritante R43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S24 Evítese el contacto con la piel. S37 Úsense guantes adecuados. S60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. GHS07 Signo de exclamación H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel. P261 Evite inhalar o pulverizar el producto. P272 La ropa de trabajo contaminada no debe utilizarse fuera del lugar de trabajo. P280 Lleve puestos guantes y vestuario de protección, además de protectores oculares. P264 Lávese las manos a fondo después de manipular el producto. P270 No coma, beba ni fume mientras utiliza este producto. REACTIVOS QUE CONTIENEN MATERIAL DE ORIGEN HUMANO: Atenciόn, trátense como potencialmente infecciosos. Todas las unidades de suero/plasma de donantes usadas en la preparación de este producto se han comprobado mediante un método aprobado por la FDA estadounidense y han resultado negativas para anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2 (VIH 1/2), antígenos de superficie de la hepatitis B (VHB) y anticuerpos de la hepatitis C (VHC). Aunque estos métodos son altamente precisos, no garantizan la detección de todas las unidades infectadas. Este producto también puede contener otras enfermedades de origen humano para las cuales no existe prueba homologada. Dado que ningún método de prueba conocido puede garantizar plenamente la ausencia de VIH, VHB y VHC, u otros agentes infecciosos, todos los productos que contienen material de origen humano se deben manipular con precaución y de conformidad con prácticas de laboratorio correctas, como se describe en los centros para el Control de enfermedades y el manual actual de los institutos nacionales de salud, el protocolo de bioseguridad de los laboratorios de biotecnología y biomédica (BMBL) o la edición actual del Manual de bioseguridad en el laboratorio la Organización Mundial de la salud. REACTIVOS QUE CONTIENEN AZIDA SÓDICA: Algunos reactivos de este equipo contienen azida sódica. La azida sódica puede reaccionar con las cañerías de plomo y cobre y formar azidas metálicas altamente explosivas. Al desecharlo, enjuague con abundante agua para evitar que se acumule la azida. Para obtener información adicional, consulte Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts en el manual Guide-Safety Management Nº CDC-22, publicado por los centros de control y prevención de enfermedades (Centers for Disease Control and Prevention), Atlanta, GA, PREPARACIÓN DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS Observe escrupulosamente las siguientes precauciones importantes para manipular los reactivos: Resuspensión de las partículas magnéticas Las partículas magnéticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento. Siga los pasos indicados a continuación para garantizar la suspensión completa de las partículas: Antes de quitar la protección de los contenedores, gire hacia adelante y hacia atrás la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte una coloración morena. Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para favorecer la suspensión de las partículas magnéticas (evite la formación de espuma). Controle visualmente el fondo del contenedor de las partículas magnéticas para cerciorarse de que no hayan quedado partículas magnéticas sedimentadas. Si es necesario, repita el procedimiento hasta la completa resuspensión de las partículas magnéticas. Después de quitar la protección, seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual si fuera necesario. Puede utilizar el Xcelerator LIAISON (Nº de catálogo A0090) para facilitar la resuspensión de las partículas. es310650; /12 3

4 Formación de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral, se recomienda evitar la formación de espuma en los reactivos. Observe las recomendaciones siguientes para evitarla: Antes de usar el integral, controle visualmente los reactivos para excluir la presencia de espuma. Si se observa la presencia de espuma después de la resuspensión de las partículas magnéticas, coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma. El integral está listo para el uso cuando se ha dejado descansar en el instrumento, las partículas magnéticas han sido mantenidas en agitación automática y se ha disuelto la espuma. Cargar el integral en el área de los reactivos del instrumento LIAISON Analyzer Coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. LIAISON XL Analyzer El instrumento LIAISON XL Analyzer está dotado de un dispositivo magnético interno, en estado sólido, que favorece la dispersión de las micropartículas antes de colocar un integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para los detalles técnicos. Coloque el integral de reactivos en la ranura específica. Deje descansar el integral de reactivos en el dispositivo magnético en estado sólido por al menos 30 segundos (hasta varios minutos). Si es necesario, repita la operación. Luego coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta situada a la izquierda y déjelo agitar durante 15 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. 7. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS Tras su recepción, almacene el integrador de reactivos boca arriba para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas. Si el integrador se almacena sin abrir, los reactivos permanecen estables entre 2 y 8 C hasta la fecha de caducidad. No lo congele. El integrador de reactivos no debe utilizarse después de la fecha de caducidad indicada en el equipo y en las etiquetas correspondientes. Después de su uso, el integrador de reactivos debe almacenarse en el analizador LIAISON o guardarse de nuevo a una temperatura de entre 2 y 8 C. Una vez abierto o a una temperatura de entre 2 y 8 C mantiene la estabilidad mínima durante seis semanas. Posteriormente, el integrador puede seguir utilizándose siempre que los controles permanezcan en los rangos previstos. 8. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS Debe utilizarse suero humano. Es recomendable tomar la muestra en ayunas, pero no es imprescindible. La sangre debe extraerse asépticamente por punción venosa y dejarse coagular; el suero ha de separarse del coágulo lo antes posible. Para mantener la integridad de la muestra no se requieren aditivos ni conservantes. Las muestras que presenten partículas, turbidez, lipemia o detritus de eritrocitos pueden necesitar clarificación por filtración o centrifugación antes de la prueba. No deben analizarse las muestras muy hemolizadas o lipémicas, ni las que contengan partículas o presenten una evidente contaminación microbiana. Antes del ensayo, compruebe si hay burbujas de aire y elimínelas. Las muestras son estables durante 19 horas a 2 y 8 C, o durante 2 horas a temperatura ambiente en el instrumento; en caso contrario se aconseja congelarlas (-20 C o menos). Las muestras pueden almacenarse en viales de vidrio o plástico. El volumen mínimo requerido es de 400 µl. Si las muestras se guardan congeladas, mézclelas bien antes del ensayo cuando las descongele. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación. Para el envío, utilice contenedores estériles y empaquete las muestras siguiendo las normas gubernamentales relativas al transporte de agentes etiológicos. Asegúrese de que las muestras llegan a su destino conforme a las normas siguientes: 1) El suero separado del coágulo se puede congelar a -20 C o menos y enviar en hielo seco. 2) El nivel de temperatura durante todo el proceso de envío no debe ser más alto (más caliente) de -20 C. 9. CALIBRACIÓN Cada integrador de reactivos de calcitonina II-Gen tiene una etiqueta de código de barras con información específica sobre la calibración del lote de integrador de que se trate. El análisis de los calibradores específicos para el ensayo permite ajustar a la curva maestra asignada los valores RLU detectados. Cada solución de calibración permite realizar 2 calibraciones. La recalibración por triplicado es obligatoria siempre que se dé al menos una de las siguientes situaciones: Con cada nuevo lote de reactivos (integrador de reactivos o reactivos iniciadores). Cada veintiún días. Después de una tarea de reparación o mantenimiento del analizador LIAISON. Si los resultados del control de calidad quedan fuera del rango aceptable. es310650; /12 4

5 Rango de medida. El ensayo de calcitonina DiaSorin LIAISON II-Gen mide entre 1 pg/ml y pg/ml. El valor mínimo que puede determinarse es 1 pg/ml. Los valores inferiores a 1 pg/ml deben expresarse como < 1 pg/ml. El valor más alto notificable sin dilución es pg/ml. Las muestras que superen el rango presentable deben diluirse usando el diluyente de muestras LIAISON Calcitonin II- Gen de DiaSorin (310652) y someterse de nuevo a análisis y cálculo. Véase el apartado CALIBRADORES DE NIVEL 1 y 2 Los calibradores de LIAISON Calcitonin II-Gen se suministran liofilizados. Reconstituya cada vial con 2,0 ml de agua destilada o desionizada. Deje reposar los viales durante 5 minutos a temperatura ambiente y mezcle suavemente por inversión. Transfiera un mínimo de 800 µl (calibradores triplicados) a un tubo de vidrio o plástico para muestras. Adhiera al tubo la etiqueta de código de barras que corresponda y colóquelo en el analizador LIAISON. Calibre el análisis como se describe en el manual de LIAISON. La calcitonina es un péptido inestable y los calibradores deberían colocarse en hielo después de la reconstitución si el análisis no se realiza inmediatamente. Se ha demostrado que los controles de calcitonina son estables durante 24 horas cuando se almacenan a entre 2 y 8 C o en hielo, u 8 horas si se guardan a temperatura ambiente. Los calibradores reconstituidos que no se utilicen deberían dividirse en partes de 800 µl como mínimo y congelarse inmediatamente, ya que permanecen estables durante un máximo de 6 semanas y se pueden utilizar tras un ciclo de congelación y descongelación. Una vez mezclados los calibradores, destápelos y colóquelos en la gradilla de muestras del analizador LIAISON con el código de barras hacia afuera y deslice la gradilla hasta la zona de muestras del analizador LIAISON. Siga las instrucciones del manual del analizador para cargar las muestras e iniciar el ensayo. El número de lote de los calibradores y del integral de reactivos corresponde a un lote específico. No utilice calibradores asociados con un lote de reactivos diferente en el mismo ensayo. 11. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener unas prestaciones analíticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del instrumento. LIAISON Analyzer: Cada parámetro del test es identificado mediante el código de barras en la etiqueta del integral de reactivos. Si el lector del código de barras no funciona correctamente, el integral no puede ser usado y debe descartarse. LIAISON XL Analyzer: Cada parámetro del test es identificado mediante informaciones codificadas en el Tag para identificación de radiofrecuencia (Radio Frequency IDentification transponder, RFID Tag) en el integral de reactivos. Si el RFID Tag no funciona correctamente, el integral no puede ser usado y debe descartarse. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. Si no es posible leer los códigos de barras externos del calibrador, es posible introducir manualmente en el instrumento de la serie LIAISON Analyzer los datos que figuran en las etiquetas externas del calibrador (debajo del código de barras). Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. Las operaciones del analizador son las siguientes: LIAISON Analyzer: 1. Dispensar el tampón de ensayo y las partículas magnéticas en el módulo de reacción. 2. Dispensar la muestra, el calibrador o el control en el módulo de reacción. 3. Incubar durante 10 minutos. 4. Dispensar el conjugado en el módulo de reacción. 5. Incubar durante 20 minutos. 6. Lavar con líquido de lavado/sistema. 7. Agregar los reactivos iniciadores y medir la emisión de luz. LIAISON XL Analyzer: 1. Dispensar el tampón de ensayo y las partículas magnéticas. 2. Dispensar la muestra, el calibrador o el control en el módulo de reacción. 3. Incubar durante 7 minutos. 4. Dispensar el conjugado en el módulo de reacción. 5. Incubar durante 14 minutos. 6. Lavar con líquido de lavado/sistema. 7. Agregar los reactivos iniciadores y medir la emisión de luz. 12. CONTROL DE CALIDAD Es necesario realizar el control de calidad cada día de trabajo o conforme a lo estipulado en las normas y requisitos de los reglamentos locales o de entidades acreditadas. Se recomienda consultar la documentación C24-A2 de CLSI y 42 CFR (c) para conocer las prácticas de control de calidad adecuadas. El juego de control LIAISON Calcitonin II-Gen (número de catálogo ) es muy apropiado para la determinación de los requisitos de control de calidad de este ensayo. es310650; /12 5

6 Los controles LIAISON permiten detectar cualquier síntoma importante de deterioro del reactivo. Los controles LIAISON se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. Si los valores de control entran en los rangos previstos en el certificado de análisis, la prueba es válida. Si los valores de control quedan fuera de los rangos previstos, la prueba no es válida y los resultados de las pruebas clínicas no pueden publicarse. El ensayo tiene que calibrarse si se observa un fallo del control, en cuyo caso deben repetirse los controles y las muestras del paciente. Antes de utilizar otros controles, es preciso evaluar su efectividad para comprobar su compatibilidad con este ensayo. Deberán establecerse rangos de valores apropiados para todos los materiales de control de calidad utilizados. Siempre que los resultados de control estén fuera de los rangos previstos, será necesario repetir la calibración y volver a analizar los controles. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. 13. ESTANDARIZACIÓN El ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen aparece en la norma internacional de la Organización Mundial de la Salud con la referencia Calcitonin (OMS 89/620). El analizador LIAISON calcula automáticamente la concentración de calcitonina presente en la muestra. Esta concentración se expresa en pg/ml (1 pg/ml = 1 ng/l SI = 0,19 μiu 2 º IS 89/620). Si fuera necesaria una conversión a pmol/l, deberá utilizarse el factor de conversión siguiente: 1 pg/ml = 0,29 pmol/l Los calibradores y los controles pueden dar resultados de RLU (unidades relativas de luz) y de dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL, pero los resultados con respecto al paciente son equivalentes. 14. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Para obtener resultados fiables son imprescindibles una técnica experta y el estricto cumplimiento de las instrucciones. La contaminación bacteriana de las muestras o los ciclos repetidos de congelación y descongelación pueden afectar a los resultados del ensayo. Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos y de laboratorio para ayudar al médico a decidir qué tratamiento aplicar a cada paciente. Los integrales no se deben intercambiar entre diferentes tipos de analizadores (LIAISON y LIAISON XL). Después de introducir un integral en uno de los instrumentos, deberá usarse siempre en él hasta que se haya acabado. Debido a los problemas de trazabilidad resultantes de la indicación anterior, los seguimientos del paciente no podrán efectuarse entre diferentes tipos de analizadores. Estos deben realizarse en un analizador en concreto (LIAISON o LIAISON XL). 15. VALORES ESPERADOS Con el procedimiento de LIAISON Calcitonin II-Gen se han analizado muestras de suero de 267 sujetos aparentemente sanos con valores normales de tirotropina, ft4 y antitg.esta población incluía 145 muestras de sujetos varones y 122 muestras de sujetos mujeres. Por cada población se calculó una concentración media y un intervalo central del 95%, según un método no paramétrico conforme con el documento C28A de CLSI. Las muestras de varones presentaron una concentración media de 2,9 pg/ml con un intervalo <1,0 pg/ml - 11,8 pg/ml, mientras que la concentración media en las muestras de mujeres fue de <1,0 pg/ml con un intervalo de referencia de <1,0 pg/ml - 4,8 pg/ml. De la población total analizada, el 91% de todos los valores obtenidos estuvo por debajo de 5,0 pg/ml y el 98% de todos los valores obtenidos fue inferior a 10 pg/ml. Los resultados se indican en la tabla siguiente: Porcentaje de muestras Inferior a la Población (N) concentración indicada Concentración de las muestras Todas las muestras (267) 91% (244/267) 5,0 pg/ml 98% (262/267) 10,0 pg/ml Estos límites deben considerarse meramente orientativos. Cada laboratorio debería establecer sus propios intervalos de referencia. 16. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DEL RESULTADO 16.1 Sensibilidad analítica: Siguiendo un método adaptado basado en el documento EP17 de CLSI, la sensibilidad analítica del ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen, definida como la dosis mínima detectable y distinguible de cero por 2 desviaciones estándar, es 1,0 pg/ml Sensibilidad funcional: Siguiendo un método adaptado basado en el documento EP17 de CLSI, la sensibilidad funcional del ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen se define como la concentración a la que el coeficiente de variación (CV) entre ensayos es superior al 20%. La sensibilidad funcional derivada del análisis de regresión del perfil de precisión es de 3,0 pg/ml. es310650; /12 6

7 16.3 Precisión con el LIAISON Analyzer: La precisión del resultado del ensayo se ha establecido en DiaSorin siguiendo el protocolo descrito en la documentación EP5 de CLSI. DiaSorin preparó un panel codificado de 11 muestras congeladas del repositorio que se analizaron en el ensayo LIAISON Calcitonin II Gen. El panel con las muestras se preparó para determinar el rango del ensayo. Las muestras del panel se dividieron en partes alícuotas y se almacenaron congeladas hasta el momento de la prueba. Tanto los controles del juego (número de referencia ) como el panel codificado se probaron en dos repeticiones por serie, hasta completar un total de veinte series, en dos analizadores LIAISON con un lote de reactivo. Los resultados se resumen en la tabla siguiente. Los datos son ejemplos representativos del resultado del ensayo. Precisión a los 20 días: dos analizadores LIAISON ; un lote de reactivo Repetibilidad Muestra KC1 KC * 6* 7 8 9* Número de determinaciones Media 15, ,39 7,90 17,9 29,8 30,7 54,2 91, (pg/ml) Desviación 0,51 9,01 0,37 0,61 0,65 0,87 1,18 2,96 0,94 7,26 16,6 19,4 33,2 estándar (pg/ml) Coeficiente de 3% 3% 8% 8% 4% 3% 4% 5% 1% 3% 4% 1% 2% variación (%) Reproducibilidad Muestra KC1 KC * 6* 7 8 9* Número de determinaciones Media (pg/ml) 15, ,39 7,90 17,9 29,8 30,7 54,2 91, Desviación estándar (pg/ml) 0,69 19,0 0,59 0,92 0,91 1,18 1,68 5,23 1,96 16,4 28,0 50,1 94,9 Coeficiente de variación (%) 5% 3% 13% 12% 5% 4% 6% 10% 2% 5% 7% 4% 5% * Antes de cada serie, las muestras se diluyeron con diluyente de muestras al 1: Precisión con el LIAISON XL Analyzer: La precisión del resultado del ensayo se ha establecido en DiaSorin siguiendo el protocolo descrito en la documentación EP5 de CLSI. DiaSorin preparó un panel codificado de 11 muestras congeladas del repositorio que se analizaron en el ensayo LIAISON Calcitonin II Gen. El panel con las muestras se preparó para determinar el rango del ensayo. Las muestras del panel se dividieron en partes alícuotas y se almacenaron congeladas hasta el momento de la prueba. Tanto los controles del juego (número de referencia ) como el panel codificado se probaron en dos repeticiones por serie, hasta completar un total de veinte series, en dos analizadores LIAISON con un lote de reactivo. Los resultados se resumen en la tabla siguiente. Los datos son ejemplos representativos del resultado del ensayo. Precisión a los 20 días: dos analizadores LIAISON XL; un lote de reactivo Repetibilidad Muestra KC1 KC * 10* 11* Número de determinaciones Media (pg/ml) Desviación estándar (pg/ml) Coeficiente de variación (%) , ,22 6,32 23,5 31,3 91, ,6 53, ,40 5,0 0,21 0,22 0,48 0,54 1,06 5,74 17,2 23,6 0,66 1,17 6,6 2,9% 1,1% 4,0% 3,4% 2,1% 1,7% 1,2% 1,6% 1,0% 1,0% 2,0% 2,2% 1,6% es310650; /12 7

8 Reproducibilidad Muestra KC1 KC * 10* 11* Número de determinaciones Media (pg/ml) 12, ,22 6,32 23,5 31,3 91, ,6 53,8 422 Desviación estándar (pg/ml) 0,58 13,8 0,33 0,36 1,31 0,97 1,88 10,6 64,1 84,9 2,39 3,62 23,2 Coeficiente de variación (%) 4,6% 3,1% 6,3% 5,7% 5,6% 3,1% 2,0% 3,0% 3,9% 3,7% 7,3% 6,7% 5,5% * Antes de cada serie, las muestras se diluyeron con diluyente de muestras al 1:100. En la tabla siguiente se resume la precisión que cabe esperar cuando la prueba se realiza en menos series y/o con menos instrumentos. Nivel Repetibilidad esperada Reproducibilidad esperada > 20 pg/ml 8% 10% pg/ml 9% 11% 9 - <11 pg/ml 10% 12% 4 - <9 pg/ml 15% 18% 16.5 Correlación de pacientes: Se analizó un total de 130 muestras de suero con LIAISON Calcitonin II-Gen y con otro método automatizado basado en el documento EP7 de CLSI, y se obtuvo la comparación siguiente: LIAISON Calcitonin II-Gen = 0,97 (método de referencia) + 3,2; R = 0, Patient Correlation: LIAISON Calcitonin II-Gen assay to Reference Method (n=130) LIAISON Calcitonin II-Gen (pg/ml) LIAISON = 0,97(Reference Method) + 3,2 R=0, Reference Method (pg/ml) es310650; /12 8

9 16.6 Prueba de dilución para veracidad: La veracidad del ensayo se comprobó con la prueba de dilución. Las muestras de cinco pacientes se diluyeron y analizaron con LIAISON Calcitonin II-Gen según el documento EP6 de CLSI. Los resultados se analizaron mediante la regresión lineal de la concentración de calcitonina observada frente a la concentración de calcitonina esperada. La ecuación de regresión resultante es la siguiente: Calcitonina observada = 1,00 (Calcitonina esperada) -13,5; R = 0, Trueness Dilution Test: LIAISON Calcitonin II-Gen Observed Calictonin Concentration (pg/ml) Observed = 1,00(Expected) 13,5 R=0, Expected Calcitonin Concentration (pg/ml) 16.7 Especificidad: Los datos sobre reactividad cruzada del antisuero utilizado en este ensayo se han obtenido añadiendo el posible reactivo cruzado y procediendo a su análisis. La reactividad cruzada observada se indica a continuación. Compuesto Concentración añadida (pg/ml) % de reactividad cruzada ACTH <0,01% Péptido C <0,01% Calcitonina de salmón <0,01% Calcitonina porcina <0,01% Calcitonina de pollo <0,01% Gastrina I <0,01% Paratirina <0,01% Prolactina <0,01% Insulina <0,01% TSH <0,01% HGH <0,01% Gastrina humana grande <0,01% CCK <0,01% Elcatonina <0,01% Péptido relacionado con el gen de la calcitonina <0,01% Péptido II relacionado con el gen de la calcitonina <0,01% Katacalcina <0,01% N-Procalcitonina <0,01% es310650; /12 9

10 16.8 Recuperación: Se analizaron cinco muestras de suero enriquecidas de alta concentración y cinco muestras de suero de baja concentración. Las muestras utilizadas para determinar el porcentaje de recuperación se preparan mezclando proporciones definidas de las muestras de alta y baja concentración y realizando análisis en series de cinco. Concentración definida alta 1 (CA1) 1889 Valor en pg/ml esperado Valor en pg/ml observado % de recuperación 2 CA1 : 1 CB % 1 CA1 : 1 CB % 1 CA1 : 2 CB % baja 1 (CB1) alta 2 (CA2) 1.345,8 2 CA2 : 1 CB % 1 CA2 : 1 CB % 1 CA2 : 2 CB % baja 2 (CB2) 8,31 alta 3 (CA3) CA3 : 1 CB % 1 CA3 : 1 CB % 1 CA3 : 2 CB % baja 3 (CB3) 10,94 alta 4 (CA4) CA4 : 1 CB % 1 CA4 : 1 CB % 1 CA4 : 2 CB4 151,6 138,6 91% baja 4 (CB4) alta 5 (CA5) CA5 : 1 CB5 145,4 144,0 99% 1 CA5 : 1 CB5 111,5 116,0 104% 1 CA5 : 2 CB5 77,7 81,5 105% baja 5 (CB5) 11,88 Promedio de recuperación 101% DE 0, Efecto de gancho a concentraciones altas: No se ha observado efecto de gancho para concentraciones de calcitonina de hasta pg/ml Dilución de la muestra de alta concentración (>2.000 pg/ml): Las muestras que presenten valores mayores de pg/ml deberían diluirse al 1:100 con el diluyente de muestras de calcitonina LIAISON Calcitonin II-Gen. El valor recomendado es 10 μl de muestra μl de diluyente de muestras. Mezcle bien la dilución, repita el análisis y calcule la concentración final multiplicando por el factor de dilución. es310650; /12 10

11 16.11 Sustancias interferentes: Estudios controlados de sustancias potencialmente interferentes realizados con dos niveles de calcitonina, 10 pg/ml y 100 pg/ml, no mostraron interferencias con la concentración más alta de cada una de las sustancias enumeradas a continuación en el ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen. Las pruebas se basaron en el documento EP7 de CLSI. Sustancias interferentes probadas Hemoglobina Bilirrubina Triglicéridos Colesterol Anticuerpos humanos antirratón Concentración probada 200 mg/dl 20 mg/dl mg/dl 500 mg/dl 450 ng/ml DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy es310650; /12 11

12 DiaSorin, Inc 1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN EE.UU. Tel Fax Preste atención a los cambios! Diluyente de muestras LIAISON Calcitonin II-Gen (310652) 1. INDICACIONES El diluyente de muestras LIAISON Calcitonin II-Gen debe utilizarse con el ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen de DiaSorin para diluir muestras con altos niveles de calcitonina (> pg/ml). 2. MATERIAL SUMINISTRADO 4 viales de 3 ml cada uno con suero humano, tampón, surfactantes, ASB y aditivos para proporcionar estabilidad, incluido ProClin 300 al 0,2%. 3. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES SOLO PARA UTILIZAR EN DIAGNÓSTICOS IN VITRO: No debe utilizarse interna o externamente en seres humanos ni animales. SEGURIDAD GENERAL: Todas las muestras, los reactivos biológicos y los materiales utilizados en el ensayo deben ser considerados como transmisores potenciales de agentes infecciosos. Evite el contacto con la piel, los ojos y las membranas mucosas. El ensayo debe realizarse respetando escrupulosamente las buenas prácticas higiénicas industriales. Absténgase de comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos en el laboratorio de ensayos. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con todos los materiales potencialmente infecciosos; para ello se aconseja utilizar batas de laboratorio, mascarillas y protectores oculares, además de guantes desechables. Lávese las manos a fondo después de cada ensayo. Evite las salpicaduras o la formación de aerosoles cuando manipule, diluya o transfiera muestras o reactivos. Los reactivos derramados deben lavarse con una solución de lejía al 10% (que contenga hipoclorito sódico al 0,5%) y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso. La eliminación de los residuos debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicción sobre el laboratorio, y con las leyes vigentes en cada país. No utilice ningún kit o componente después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. RIESGO QUÍMICO E INFORMACIÓN DE SEGURIDAD: Los reactivos de este kit se han clasificado de conformidad con lo establecido en la Norma de Comunicación de Riesgos (Hazard Communication Standard) de OSHA en Estados Unidos, las leyes de derecho a la información (Right-to-Know) estatales de Estados Unidos, las normas reguladoras de Productos Controlados, Seguridad y Salud Ocupacional (Occupational Health and Safety Controlled Products) centrales canadienses y las directivas de la Unión Europea que sean aplicables en cada caso (consulte las fichas de datos de seguridad del material para obtener información adicional). Los reactivos que contienen ProClin 300 CLASIFICACIÓN DE SUSTANCIA: PALABRA INDICADORA: SÍMBOLOS / PICTOGRAMAS: 67/548/CEE / 1999/45/CE / 2001/60/CE CE N.º 1272/2008 Irritante Sensibilización cutánea, Categoría 1 NA Advertencia! Xi - Irritante R43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. GHS07 Signo de exclamación H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel. es310652; /12 1

13 PRECAUCIONES / INDICACIONES DE SEGURIDAD: S24 Evítese el contacto con la piel. S37 Úsense guantes adecuados. S60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. P261 Evite inhalar o pulverizar el producto. P272 La ropa de trabajo contaminada no debe utilizarse fuera del lugar de trabajo. P280 Lleve puestos guantes y vestuario de protección, además de protectores oculares. P264 Lávese las manos a fondo después de manipular el producto. P270 No coma, beba ni fume mientras utiliza este producto. REACTIVOS QUE CONTIENEN MATERIAL DE ORIGEN HUMANO: Atenciόn, trátense como potencialmente infecciosos. Todas las unidades de suero/plasma de donantes usadas en la preparación de este producto se han comprobado mediante un método aprobado por la FDA estadounidense y han resultado negativas para anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2 (VIH 1/2), antígenos de superficie de la hepatitis B (VHB) y anticuerpos de la hepatitis C (VHC). Aunque estos métodos son altamente precisos, no garantizan la detección de todas las unidades infectadas. Este producto también puede contener otras enfermedades de origen humano para las cuales no existe prueba homologada. Dado que ningún método de prueba conocido puede garantizar plenamente la ausencia de VIH, VHB y VHC, u otros agentes infecciosos, todos los productos que contienen material de origen humano se deben manipular con precaución y de conformidad con prácticas de laboratorio correctas, como se describe en los centros para el Control de enfermedades y el manual actual de los institutos nacionales de salud, el protocolo de bioseguridad de los laboratorios de biotecnología y biomédica (BMBL) o la edición actual del Manual de bioseguridad en el laboratorio la Organización Mundial de la salud. 4. PREPARACIÓN Y UTILIZACIÓN El diluyente de muestras se presenta en forma líquida y listo para su uso. La dilución recomendada para las muestras clínicas de concentración elevada es de 1:100. El resultado final de las muestras debe corregirse según el factor de dilución. Ejemplo: 990 μl de diluyente + 10 μl de muestra clínica de concentración elevada. Todos los lotes del diluyente de muestras son intercambiables con todos los lotes del ensayo LIAISON Calcitonin II- Gen. 5. ALMACENAMIENTO Almacene el diluyente de muestras a una temperatura de entre 2 y 8 C en cuanto lo reciba. Si se conserva a esta temperatura (2-8 C), el diluyente de muestras se mantiene estable hasta la fecha de caducidad indicada en los viales. Entre los indicios de posible deterioro se ha observado la presencia de partículas en el líquido o la desviación notable con respecto a resultados anteriores. Una vez abierto, el diluyente de muestras se mantiene estable durante 6 semanas. 6. LIMITACIONES El diluyente de muestras LIAISON Calcitonin II-Gen de DiaSorin ha sido diseñado para su uso con el ensayo LIAISON Calcitonin II-Gen de DiaSorin y la familia de Analizadores LIAISON. Si los reactivos se almacenan incorrectamente o surgen errores técnicos, pueden producirse resultados discordantes. ProClin 300 es una marca registrada de Rohm and Haas Co. DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy es310652; /12 2