DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (VC) - Italy LIAISON Toxo IgM (REF )

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1 DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (VC) - Italy Modificaciones: - Supresiones: 4; LIAISON Toxo IgM (REF ) 1. FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Toxo IgM emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para la determinación cuantitativa de anticuerpos específicos de clase IgM dirigidos contra el Toxoplasma gondii en muestras de suero o plasma humano. El ensayo debe realizarse en el LIAISON Analyzer. 2. SUMARIO Y EXPLICACIÓN DEL TEST La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa de gran difusión causada por el parásito protozoario endocelular Toxoplasma gondii. La infección, que afecta tanto a los hombres como a los animales homeotermos, se puede contraer a través de la ingestión de alimentos infectados o contaminados con oocistos, por contagio directo de animales domésticos o por transmisión transplacentaria. En la literatura se habla también de la transmisión del Toxoplasma como consecuencia de transfusiones o trasplante de órganos. En el individuo adulto normal, la toxoplasmosis casi siempre tiene un proceso benigno: puede ser asintomática, con sintomatología modesta (dolor de cabeza, dolor de garganta, astenia) o, en algunos casos, con la aparición de linfadenopatía. Sólo excepcionalmente se manifiestan molestias más serias, tales como miocarditis, hepatitis, pneumonía, meningoencefalitis y retinocoroiditis. La prevalencia de respuesta positiva a los test serológicos aumenta con la edad de la población considerada e indica que el sujeto ha estado expuesto al Toxoplasma en el pasado. La protección de esta infección parasitaria depende generalmente de la inmunidad mediada por células. Por consiguiente, es más frecuente observar un proceso sintomático en los pacientes sometidos a terapia inmunosupresiva, tanto para prevenir el rechazo del órgano trasplantado, que como tratamiento antitumoral. La encefalitis por Toxoplasma se ha demostrado una importante causa de muerte en los pacientes afectados por el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Si se adquiere durante la gestación, la toxoplasmosis puede causar graves consecuencias, tales como el aborto espontáneo, parto prematuro y mortalidad del feto, dado que el agente patógeno puede transmitirse al feto por vía transplacentaria. El feto cuya madre ha contraído la infección por Toxoplasma durante el primer trimestre de embarazo desarrolla graves lesiones en el sistema nervioso central que provocan casi siempre la muerte del feto. Si la infección se verifica durante el segundo trimestre de embarazo, el feto está expuesto a riesgos tales como la hidrocefalia, retardo mental o psicomotor, ceguera y calcificaciones cerebrales. Sin embargo la toxoplasmosis es común sobre todo en el tercer trimestre de embarazo, cuando causa retinocoroiditis y otras lesiones oculares, lesiones al sistema nervioso central e infección asintomática latente que puede dar origen a la enfermedad declarada. La IgM anti-toxoplasma aparece en circulación entre dos y cuatro semanas después de la aparición de la sintomatología clínica. Posteriormente disminuye gradualmente y desaparece después de tres-nueve meses. La presencia de anticuerpos de la clase IgM e IgA en ausencia o en presencia de pequeñas cantidades de anticuerpos de la clase IgG representa por consiguiente una indicación importante de toxoplasmosis aguda. Por el contrario, la presencia de anticuerpos de la clase IgM en presencia de niveles de IgG constantes o en decadencia indica toxoplasmosis subaguda. El diagnóstico diferencial de toxoplasmosis aguda obtenido a través del ensayo sérico de la IgM específica permite la adopción de medidas terapéuticas que reducen el riesgo de la enfermedad tanto en sujetos inmunocomprometidos, como en las mujeres embarazadas. Los niveles de la IgG anti-toxoplasma aumentan gradualmente y alcanzan un máximo entre dos y cinco meses después de que aparezca la sintomatología clínica. Por lo tanto, el ensayo sérico de la IgG es útil para diferenciar a la población que ha contraído la enfermedad de la no inmune. Esto es particularmente importante para la adopción de medidas profilácticas adecuadas en las mujeres fértiles susceptibles. 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El método para la determinación cuantitativa de IgM específica anti-toxoplasma gondii es un ensayo con captura de anticuerpos basado en el principio de la quimioluminiscencia (CLIA). Una IgG monoclonal de ratón anti-igm humana se emplea para recubrir las partículas magnéticas (fase sólida) y un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra el antígeno mayor de superficie (SAG1) de Toxoplasma gondii está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado anticuerpoisoluminol). Durante la primera incubación, los anticuerpos IgM presentes en los calibradores, en las muestras o en los controles enlazan la fase sólida. Durante la segunda incubación, el anticuerpo conjugado reacciona con el antígeno de Toxoplasma gondii añadido antes y el complejo inmune que se ha formado de este modo reacciona con la IgM ya enlazada a la fase sólida. Después de cada incubación, se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado. A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz (RLU, relative light units) e indica la concentración de IgM anti-toxoplasma gondii presente en los calibradores, en las muestras o en los controles. 35 / 43 ES - 200/ ,

2 4. MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Partículas magnéticas (2,3 ml) Calibrador 1 (1,5 ml) Calibrador 2 (1,5 ml) Antígeno (2,3 ml) Diluyente de muestras (28 ml) Conjugado (21 ml) Partículas magnéticas recubiertas con IgG monoclonal de ratón anti-igm humana, albúmina sérica bovina, tampón PBS, < 0,1% azida sódica. Suero/plasma humano que contiene niveles bajos de IgM anti-toxoplasma gondii, albúmina sérica bovina, tampón PBS, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Las concentraciones de los calibradores (UA/mL) son calibradas contra una preparación interna de anticuerpos. Suero/plasma humano que contiene niveles altos de IgM anti-toxoplasma gondii, albúmina sérica bovina, tampón PBS, 0,2% ProClin 300 y un colorante azul inactivo. Las concentraciones de los calibradores (UA/mL) son calibradas contra una preparación interna de anticuerpos. Toxoplasma gondii inactivado (cepa RH), obtenido de trofozoítos sometidos a fragmentación y a extracción con detergentes, tampón PBS, 0,2% ProClin 300, conservantes. Albúmina sérica bovina, tampón PBS, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Anticuerpos monoclonales de ratón dirigidos contra el antígeno mayor de superficie (SAG1) de Toxoplasma gondii conjugados con un derivado del isoluminol, IgG de ratón policlonal no específica, suero bovino fetal, albúmina sérica bovina, tampón PBS, 0,2% ProClin 300, conservantes y un colorante rojo inactivo. Número de ensayos 100 Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos. Materiales requeridos, pero no suministrados Otros materiales requeridos LIAISON Module (REF ). Controles LIAISON Toxo IgM (negativo y positivo) LIAISON Starter Kit (REF ). (REF ). LIAISON Light Check (REF ). LIAISON Cleaning Kit (REF ). LIAISON Wash/System Liquid (REF ). LIAISON Waste Bags (REF ). 5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico in vitro. Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas para la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv-1 y anti-hiv-2. Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal. 6. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. El material desechable deberá ser incinerado; los residuos líquidos deberán ser descontaminados con una solución de hipoclorito sódico a una concentración final del 5% durante media hora como mínimo. Cualquier material que pueda ser reutilizado deberá ser tratado en autoclave con un tratamiento de exceso (overkill) (USP 24, 2000, p. 2143). Generalmente se considera que una hora a 121 C es un tiempo de esterilización adecuado; sin embargo se recomienda a cada usuario que verifique la eficacia del ciclo de descontaminación mediante una validación inicial y el uso rutinario de indicadores biológicos. Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables: R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S 24 - Evítese el contacto con la piel. S 37 - Úsense guantes adecuados. S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. 36 / 43 ES - 200/ ,

3 7. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS INTEGRAL DE REACTIVOS Antes de quitar la protección de los contenedores, es esencial agitar horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado. Evite la formación de espuma. Elimine la protección de los contenedores y gire hacia adelante y hacia atrás la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte una coloración morena. Este procedimiento da inicio a la resuspensión de las partículas magnéticas. Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual. Coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. CONTROLES Hágase referencia a las instrucciones del juego de controles LIAISON Toxo IgM para preparar y manipular los controles. 8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS Sellado: Estable a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Abierto en el instrumento o a 2-8 C: Estabilidad mínima cuatro semanas. Después de este intervalo de tiempo, se puede seguir usando el integral de reactivos, siempre que los controles permanezcan dentro de los límites esperados. Use siempre el mismo LIAISON Analyzer para un integral de reactivos ya abierto. Use las gradillas suministradas con el LIAISON Analyzer para la conservación del integral de reactivos en posición vertical. No congele. Mantenga el integral de reactivos en posición vertical durante la conservación para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas. Mantenga protegido de la luz directa. 9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano. Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato, el EDTA y la heparina. Recoja la sangre mediante punción venosa, déjela coagular y separe el suero del coágulo lo antes posible. Clarifique por filtración o centrifugación antes del ensayo las muestras que presenten material en suspensión, opalescencia, lipemia o residuos eritrocitarios. No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que presenten material suspendido o evidente contaminación microbiana. Elimine las eventuales burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo. Si el ensayo se lleva a cabo dentro de los siete días sucesivos a la recogida, las muestras se pueden conservar a 2-8 C. En caso contrario, se deben subdividir en alícuotas congeladas a 20 C o a temperaturas inferiores. Si las muestras han sido descongeladas, agítelas con cuidado antes de realizar el ensayo. Dieciséis muestras de diferente reactividad se han conservado durante siete días a 2-8 C y se han sometido a cuatro ciclos de congelación y descongelación. Los resultados no han presentado diferencias significativas. El volumen mínimo de muestra necesario es 170 μl (20 μl de muestra μl de volumen muerto). 10. CALIBRACIÓN El ensayo de los calibradores contenidos en el integral de reactivos permite ajustar la curva predefinida memorizada por el fabricante (curva patrón) en el instrumento como se indica en los códigos de barras que aparecen en la etiqueta del integral de reactivos. Con una solución de los calibradores es posible realizar cuatro calibraciones. El instrumento se debe calibrar en triplicado cada vez que se verifique una de las siguientes condiciones: Se usa un nuevo lote de reactivos starter. La calibración anterior fue realizada más de cuatro semanas antes. Se usa un nuevo lote de integral de reactivos. El instrumento ha sufrido una intervención de asistencia técnica. Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados. 11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO Para obtener unas prestaciones analíticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del instrumento. Cada parámetro del test es identificado mediante el código de barras en la etiqueta del integral de reactivos. En caso de que el lector del código de barras no funcione correctamente, se deberán introducir manualmente los datos convenientes. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. El instrumento realiza las operaciones siguientes: 10 μl Controles o muestras. 100 μl Calibradores. +20μL Partículas magnéticas recubiertas μl Partículas magnéticas recubiertas. +220μL Diluyente de muestras μl Diluyente de muestras. Incubación seguida por un ciclo de lavado. +180μL Conjugado. +20μL Antígeno. Incubación seguida por un ciclo de lavado. Medición. 37 / 43 ES - 200/ ,

4 12. CONTROL DE CALIDAD El control de calidad se debe realizar analizando los controles LIAISON Toxo IgM (a) por lo menos una vez por cada día de trabajo, (b) cuando se usa un nuevo integral de reactivos, (c) cuando se calibra el kit, (d) cuando se usa un nuevo lote de reactivos starter, (e) cuando se determina la adecuación de las prestaciones del integral de reactivos abierto con más de cuatro semanas de anterioridad, o según las disposiciones legislativas y las reglamentaciones vigentes en cada país. Atención: Los controles LIAISON se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. Los valores de los controles tienen que estar comprendidos entre los rangos esperados: cada vez que uno o ambos valores estén fuera de los rangos esperados habrá que volver a efectuar la calibración y probar de nuevo los controles. Si los valores experimentales de los controles estén de nuevo fuera de los rangos predefinidos después de la calibración, habrá que repetir el test usando un frasco de control no abierto. Si los valores de los controles estén fuera de los rangos esperados, los resultados de las muestras no deben ser notificados. Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este test antes del uso. Por lo tanto es indispensable establecer los intervalos de los valores de los materiales usados para el control de calidad. 13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El instrumento calcula automáticamente las concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii expresadas en UA/mL y clasifica los resultados. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. Intervalo de ensayo UA/mL de IgM anti-toxoplasma gondii. Por lo general se reconoce que los ensayos que utilizan el método de captura de IgM pueden presentar test de dilución que dependen de la muestra (K. Hansen et al., J. Clin. Microbiol., 29 (1) : , 1991). Por lo tanto, los resultados de las muestras que son mayores que el intervalo de ensayo deben ser considerados y clasificados como superiores a 160 UA/mL. Los resultados de las muestras deben ser interpretados como sigue: Las muestras con concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii por debajo de 6 UA/mL se deben clasificar negativas. Las muestras con concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii entre 6 y 8 UA/mL se deben clasificar dudosas. La detección de otros marcadores de Toxoplasma gondii puede aportar informaciones útiles para la interpretación de los resultados. Las muestras con concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii iguales o por encima de 8 UA/mL se deben clasificar positivas. Un resultado positivo indica la presencia de IgM tras una infección aguda o una infección pasada con persistencia de IgM. Sin embargo, un resultado negativo no excluye con seguridad una toxoplasmosis aguda. Si se sospecha que el paciente ha estado expuesto al Toxoplasma gondii aunque el ensayo de IgM sea negativo, habrá que recoger y ensayar una segunda muestra por lo menos una o dos semanas más tarde. Los resultados del test se muestran de manera cuantitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos IgM anti-toxoplasma gondii. Sin embargo, el diagnóstico de una enfermedad infecciosa no se debe formular en base al resultado de un solo ensayo, sino que éste se debe validar con otras pruebas clínicas, procedimientos diagnósticos y con la opinión del médico. Nota - El kit LIAISON Toxo IgM mide la concentración de IgM anti-toxoplasma gondii con altísima sensibilidad y por consiguiente permite una detección muy precoz de los anticuerpos al inicio de la infección aguda. Para interpretar correctamente el significado de la reactividad para IgM, los laboratorios deben adoptar otros procedimientos diagnósticos (por ejemplo, determinación de la avidez de IgG y/o varios test para IgM) porque la IgM anti-toxoplasma puede persistir en el tiempo y las muestras que contienen bajos niveles de IgM persistente son positivas al test. Los laboratorios pueden adoptar también un valor límite más elevado para aumentar la especificidad diagnóstica del kit LIAISON Toxo IgM. Los anticuerpos IgM anti-toxoplasma aumentan rápidamente durante la fase precoz de la infección, mientras que la IgM persistente está presente a nivel inferior antes de desaparecer: la ventana de la positividad para IgM durante el curso de la infección se desplaza hacia la fase precoz. El riesgo de no detectar muestras de pacientes en fase aguda es insignificante y se reduce aún más si se recoge una segunda muestra de los pacientes negativos una o dos semanas más tarde. Si se elige el valor límite más elevado, los resultados de las muestras se deberán interpretar del siguiente modo: Las muestras con concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii por debajo de 10 UA/mL se deben clasificar negativas. Las muestras con concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii iguales o por encima de 10 UA/mL se deben clasificar positivas. La siguiente tabla muestra detalladamente los resultados observados durante la evaluación clínica. Lugar Número de muestras Valor límite Especificidad diagnóstica Toxoplasmosis aguda Sensibilidad diagnóstica IgM anti-toxo persistente Muestras positivas para IgM anti-toxo Pavia, Italia UA/mL 97,3% 99,6% 10 UA/mL 99,1% 91,8% París, Francia UA/mL 94,0% 100% 95,0% 97,3% 10 UA/mL 97,5% 100% 90,0% 94,6% CDC, GA, USA UA/mL 96,9% 100% 100% 10 UA/mL 96,9% 100% 100% Palo Alto, CA, 6-8 UA/mL 100% 100% 100% 100% 200 USA 10 UA/mL 100% 100% 94,0% 97,0% 38 / 43 ES - 200/ ,

5 14. LIMITACIONES DEL ENSAYO Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de utilización y poseer una adecuada técnica manual. La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados del análisis. 15. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT Especificidad analítica La especificidad analítica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, anticoagulantes, hemolisis, efectos de tratamientos de la muestra) o de reacciones cruzadas con anticuerpos potencialmente interferentes. Interferencias. Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no están influenciadas por anticoagulantes (citrato sódico, EDTA, heparina), hemolisis (hasta 1000 mg/dl de hemoglobina), lipemia (hasta 3000 mg/dl de triglicéridos), bilirrubinemia (hasta 20 mg/dl de bilirrubina) o por los ciclos de congelación y descongelación de las muestras. Reacciones cruzadas. Las reacciones cruzadas del ensayo LIAISON Toxo IgM se estudiaron para evaluar las interferencias potenciales por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos que pueden causar síntomas clínicos similares a los de una infección por Toxoplasma (EBV, hcmv, virus de la rubéola, parvovirus B19), por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos vectores de enfermedades infecciosas (Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi, HSV, VZV, virus del sarampión, virus de la parotitis, HIV, HCV), así como también por parte de otras condiciones que derivan de una actividad atípica del sistema inmunitario (anticuerpos anti-nucleares, factor reumatoide, anticuerpos humanos anti-ratón [HAMA, human anti-mouse antibodies]). Las muestras para estos estudios se ensayaron anteriormente con otro ensayo para IgM anti- Toxoplasma comercializado y si resultaron negativas para la presencia de IgM anti-toxoplasma, se utilizaron para estudiar las reacciones cruzadas potenciales. La presencia de potenciales anticuerpos interferentes en las muestras ha sido detectada con ensayos de marca CE. Condición clínica Número de muestras esperadas negativas Resultados positivos o dudosos con LIAISON Anticuerpos IgM + IgG anti-parvovirus B Anticuerpos IgM anti-virus de la rubéola 15 0 Anticuerpos IgM anti-hcmv 17 0 Anticuerpos IgM anti-ebv 8 0 Anticuerpos anti-hcv 10 0 Anticuerpos anti-hiv 36 0 Anticuerpos IgM + IgG anti-hsv-1/ Anticuerpos IgM + IgG anti-borrelia burgdorferi 7 0 Anticuerpos IgM + IgG anti-virus de la parotitis 5 0 Anticuerpos IgM anti-virus del sarampión 5 0 Anticuerpos IgM anti-vzv 11 0 Anticuerpos IgM + IgG anti-treponema pallidum 5 0 Anticuerpos anti-nucleares (ANA/ENA) 12 0 Factor reumatoide (inmunoglobulinas anti-fc) 10 0 Anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) 14 0 Hipergammaglobulinemia 20 0 Total Precisión La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido determinadas utilizando muestras en diferentes concentraciones de analito. Los resultados se refieren a los grupos de pacientes tomados en consideración; no se trata de prestaciones garantizadas porque pueden existir diferencias entre los diferentes laboratorios. Repetibilidad. Para evaluar la repetibilidad se han analizado veinte replicados en la misma sesión analítica en el laboratorio donde se desarrolló el kit. Repetibilidad A B C D E F Media (UA/mL) 6,2 11,7 13,0 28,9 33,4 14,9 Desviación estándar (UA/mL) 0,43 1,29 1,21 3,16 4,24 1,07 Coeficiente de variación (%) 7,0 11,0 9,3 10,9 12,7 7,0 Valor mínimo (UA/mL) 4,9 8,2 10,3 20,6 23,9 12,1 Valor máximo (UA/mL) 6,7 13,0 15,1 32,9 38,4 16,1 39 / 43 ES - 200/ ,

6 Reproducibilidad. Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en días diferentes (una o dos sesiones analíticas al día) utilizando tres lotes diferentes de integral. Los ensayos se realizaron en dos sitios, en el laboratorio donde se desarrolló el kit (sitio 1) y en un laboratorio independiente (sitio 2) utilizando los mismos instrumentos. Reproducibilidad - Sitio 1 A B C D E F LOTE Nr. 01 Media (UA/mL) 6,1 11,0 15,2 30,4 45,8 15,5 Desviación estándar (UA/mL) 0,50 1,41 1,77 3,80 5,52 2,20 Coeficiente de variación (%) 8,2 12,9 11,6 12,5 12,1 14,5 Valor mínimo (UA/mL) 5,2 8,3 11,9 23,0 31,0 12,2 Valor máximo (UA/mL) 6,8 14,0 18,8 36,4 53,3 22,5 LOTE Nr. 02 Media (UA/mL) 7,9 12,7 20,9 36,9 44,2 20,7 Desviación estándar (UA/mL) 0,38 1,42 1,53 4,23 4,61 2,40 Coeficiente de variación (%) 4,8 11,1 7,3 11,4 10,4 11,7 Valor mínimo (UA/mL) 7,3 10,2 17,7 24,6 32,9 17,7 Valor máximo (UA/mL) 8,6 15,5 23,1 44,5 51,2 27,6 LOTE Nr. 03 Media (UA/mL) 6,0 11,0 13,1 29,2 45,9 12,7 Desviación estándar (UA/mL) 0,52 1,23 0,92 3,65 2,95 1,80 Coeficiente de variación (%) 8,7 11,1 7,0 12,5 6,4 14,0 Valor mínimo (UA/mL) 5,1 8,4 11,1 19,5 41,1 10,9 Valor máximo (UA/mL) 6,9 12,5 15,2 35,3 51,8 19,4 Coeficiente de variación inter-lotes (%) 7,2 11,7 8,7 12,1 9,6 13,4 Reproducibilidad - Sitio 2 A B C D E F LOTE Nr. 01 Media (UA/mL) 6,5 10,4 15,3 29,8 36,9 18,3 Desviación estándar (UA/mL) 0,64 0,88 1,99 3,09 5,00 2,00 Coeficiente de variación (%) 9,9 8,5 13,0 10,3 13,5 11,1 Valor mínimo (UA/mL) 5,4 9,0 12,1 24,9 27,4 14,2 Valor máximo (UA/mL) 7,5 12,5 19,2 35,1 46,0 23,2 LOTE Nr. 02 Media (UA/mL) 9,3 15,9 24,1 42,7 46,6 29,0 Desviación estándar (UA/mL) 0,64 1,83 2,57 4,52 5,22 3,60 Coeficiente de variación (%) 6,9 11,5 10,7 10,6 11,2 12,4 Valor mínimo (UA/mL) 8,6 13,5 19,1 35,8 37,6 23,1 Valor máximo (UA/mL) 10,5 19,2 28,6 53,8 54,9 34,0 LOTE Nr. 03 Media (UA/mL) 6,7 11,7 11,8 26,7 27,0 14,6 Desviación estándar (UA/mL) 0,46 1,11 0,84 3,29 3,47 1,70 Coeficiente de variación (%) 6,9 9,5 7,2 12,3 12,9 11,9 Valor mínimo (UA/mL) 5,7 9,5 10,0 18,1 19,7 11,7 Valor máximo (UA/mL) 7,9 14,0 13,1 30,8 32,8 18,4 Coeficiente de variación inter-lotes (%) 7,9 9,8 10,3 11,1 12,5 11, Efecto arrastre El efecto arrastre (carryover) ha sido estudiado analizando una muestra negativa tanto antes como después de cuatro muestras elevadamente positivas. Los resultados obtenidos permiten demostrar que no se verifica el efecto arrastre utilizando el LIAISON Analyzer Efecto saturación con altas concentraciones Cuando se ensayen muestras que contengan unas concentraciones de anticuerpos sumamente elevadas, se pueden obtener unos niveles aparentes de anticuerpo inferiores al nivel real por efecto de la saturación. Sin embargo, un sistema bien optimizado con dos incubaciones excluye que se obtengan resultados subestimados, porque la señal analítica permanece siempre elevada (curva a saturación). La presencia de un efecto saturación ha sido evaluada analizando dos muestras positivas para IgM anti-toxoplasma gondii con alto título. Todas las muestras han presentado unos valores de concentración elevados, como esperado, indicando que la clasificación de las muestras es correcta. 40 / 43 ES - 200/ ,

7 15.5. Especificidad y sensibilidad diagnósticas La especificidad y la sensibilidad diagnósticas han sido evaluadas analizando, en principio, 789 muestras provenientes de diversas poblaciones (sujetos nunca infectados por Toxoplasma gondii, mujeres embarazadas, sujetos afectados por enfermedades autoinmunes, pacientes afectados por otras enfermedades infecciosas de sintomatología similar, pacientes hemodializados, pacientes sometidos a transplante de órgano, pacientes afectados por el SIDA, pacientes afectados por toxoplasmosis primaria, sujetos con toxoplasmosis pasada, pacientes afectados por supuesta toxoplasmosis reactivada, sujetos con persistencia de la IgM anti-toxoplasma gondii). Las muestras han sido examinadas con diferentes métodos de comparación y se ha empleado la regla del consenso general y los datos clínicos y serológicos para establecer los resultados esperados. 51 muestras han sido clasificadas dudosas con los métodos de referencia y por lo tanto han sido excluidas del análisis de los resultados. En la población presumiblemente negativa estudiada 5 muestras han resultado positivas, 4 muestras han resultado dudosas (reactivas) y 586 muestras han resultado negativas - especificidad diagnóstica: 98,49% (intervalo de confianza al 95%: 97,15-99,31%). En la población presumiblemente positiva estudiada ninguna muestra ha resultado negativa y 143 muestras han resultado positivas - sensibilidad diagnóstica: 100% (intervalo de confianza al 95%: 97,45-100%). Si se elige el valor límite más elevado, los resultados cambian del siguiente modo: En la población presumiblemente negativa estudiada 3 muestras han resultado positivas y 592 muestras han resultado negativas - especificidad diagnóstica: 99,50% (intervalo de confianza al 95%: 98,53-99,89%). En la población presumiblemente positiva estudiada 14 muestras han resultado negativas y 129 muestras han resultado positivas - sensibilidad diagnóstica: 90,21% (intervalo de confianza al 95%: 84,12-94,55%). Además de la evaluación clínica se han realizado otros estudios en laboratorios especializados para convalidar la capacidad del test de detectar correctamente la toxoplasmosis aguda. Han sido analizadas 279 muestras seleccionadas de las cuales 149 muestras provenientes de sujetos con toxoplasmosis aguda y 130 muestras provenientes de sujetos con toxoplasmosis pasada y persistencia de la IgM. En la población estudiada de pacientes con toxoplasmosis aguda 149 muestras han resultado por encima de 10 UA/mL - sensibilidad diagnóstica: 100% (intervalo de confianza al 95%: 97,56-100%). En la población estudiada de sujetos con persistencia de la IgM, 4 muestras han resultado por debajo de 6 UA/mL, 3 muestras han resultado comprendidas entre 6 y 8 UA/mL, 4 muestras han resultado comprendidas entre 8 y 10 UA/mL y 119 muestras han resultado por encima de 10 UA/mL - sensibilidad diagnóstica: 91,54% (intervalo de confianza al 95%: 85,37-95,70%). Otros estudios clínicos demostraron prestaciones iguales o mejores. Estudio prospectivo. Se analizaron 370 muestras no seleccionadas con el kit LIAISON Toxo IgM y con otro ensayo para IgM anti-toxoplasma. Estas muestras se recogieron para uso prospectivo y provienen de sujetos examinados con test serológicos anti-toxoplasma. El ensayo LIAISON Toxo IgM proporcionó 358 resultados negativos, tres dudosos y nueve positivos y mostró una concordancia del 97,8% con respecto al test de comparación. Los resultados discordantes se resolvieron utilizando otros ensayos para IgM anti-toxoplasma y un test para la avidez de la IgG. Se aplicó la regla del consenso para definir los resultados esperados. Una vez resueltas las discrepancias, la concordancia resultó del 99,2%. 41 / 43 ES - 200/ ,

8 Modificaciones: - Supresiones: - LIAISON Control Toxo IgM (REF ) 1. FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON Toxo IgM (negativo y positivo) deben ser usados en los ensayos de quimioluminiscencia (CLIA) LIAISON para verificar la fiabilidad de los ensayos. No se han establecido las prestaciones metodológicas de los controles LIAISON Toxo IgM en relación con otros ensayos o plataformas de instrumentos distintos de LIAISON y LIAISON XL. LIAISON analyzers. En el certificado de análisis se proporciona información específica sobre el lote de los controles, que debe introducirse manualmente en el software del analizador antes de colocar los frascos de los controles. Para obtener información detallada, consulte el manual del analizador. LIAISON XL analyzers. Los códigos de barras del certificado de análisis contienen información específica sobre el lote de los controles. Esta información debe leerse con el lector manual de código de barras del LIAISON XL Analyzer antes de introducir los frascos de los controles. Para obtener información detallada, consulte el manual del analizador. 2. MATERIALES SUMINISTRADOS Control negativo (2 x 0,7 ml) Suero/plasma humano no reactivo para IgM anti-toxoplasma gondii, estabilizado en tampón PBS, albúmina sérica bovina y 0,2% ProClin 300. Control positivo (2 x 0,7 ml) Suero/plasma humano reactivo para IgM anti-toxoplasma gondii, estabilizado en tampón PBS, albúmina sérica bovina, 0,2% ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo. Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. Cada laboratorio es responsable de adoptar límites diferentes para cumplir exigencias específicas. 3. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico in vitro. Los controles no son específicos para lote de kit. Se pueden intercambiar también con lotes diferentes de integral de reactivos. Todos los materiales utilizados para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivos para la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv-1 y anti-hiv-2. Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal. Observe las precauciones necesarias para la manipulación de los reactivos de laboratorio. Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentación local. 4. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables: R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S 24 - Evítese el contacto con la piel. S 37 - Úsense guantes adecuados. S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. 5. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD En el momento de su llegada, los controles se deben mantener a 2-8 C en posición vertical para evitar el contacto de la solución con la tapa del frasco. No congele. Si los controles se conservan sellados y en posición vertical, ellos son estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Después de la apertura, los controles son estables durante ocho semanas si se conservan refrigerados a 2-8 C entre dos usos sucesivos. Evite la contaminación bacteriana de los controles. Los controles no se deben usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos. 6. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del LIAISON Analyzer. Con una solución de control es posible realizar por lo menos 24 test. El volumen mínimo de control necesario es 420 μl (20 μl de control μl de volumen muerto). En el momento del uso, acondicione los controles a temperatura ambiente (20-25 C) antes de la apertura de los frascos y déjelos en el área de las muestras del instrumento sólo durante el tiempo requerido para realizar el test de control de calidad. Después del uso, tape los frascos lo antes posible y manténgalos a 2-8 C en posición vertical. Durante la manipulación de los controles, adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminación microbiana. Toxo-m-es.fm LIAISON Control Toxo IgM (REF ) 42 / 43 ES - 200/ ,

9 7. MANIPULACIÓN Asegúrese de que no se coloquen uno tras otro en las gradillas del instrumento ni que se analizan en secuencia dos controles idénticos (negativos o positivos). Hágase referencia al manual operativo del instrumento LIAISON para una información más detallada. 8. VALORES ESPERADOS Los intervalos de las concentraciones de IgM anti-toxoplasma gondii de los controles están indicados en el certificado de análisis. Estos se han establecido considerando la variabilidad de las sesiones analíticas respecto a la curva predefinida memorizada por el fabricante, a fines de garantizar la precisión de los resultados analíticos y obtener indicaciones sobre la estabilidad y el deterioro de los reactivos. Si los valores experimentales de los controles están repetidamente fuera de los intervalos predefinidos, con mucha probabilidad, el ensayo se ha llevado a cabo de forma incorrecta. Toxo-m-es.fm LIAISON Control Toxo IgM (REF ) 43 / 43 ES - 200/ ,