EXPERIENCIAS REGIONALES SOBRE EL DIAGNOSTICO DEL VTC CON LA TÉCNICA SEROLOGICA ELISA-INMUNOIMPRESIÓN

Transcripción

1 EXPERIENCIAS REGIONALES SOBRE EL DIAGNOSTICO DEL VTC CON LA TÉCNICA SEROLOGICA ELISA-INMUNOIMPRESIÓN MC. Reyna Xóchitl Loredo Salazar MC Sergio Alberto Curti Díaz Dra. María de los Ángeles Peña del Río Dr Mariano Cambra IVIA Noviembre

2 Justificación Los altos costos que implica la Campaña Nacional de monitoreo para el diagnóstico del VTC, requiere de técnicas mas sensibles y económicas para mayor precisión en los resultados emitidos. Foto cortesía Sonia Moreira

3 Objetivo Comparar la sensibilidad para diagnosticar el VTC entre las variantes serológicas DAS e Inmunoimpresión durante el verano.. Conocer la relación que tiene la temperatura y potencial hídrico, en la variación de la concentración y porcentaje de impresiones positivas del virus en los árboles seleccionados.

4 Áreas de estudio Veracruz y Puebla 24 o C 1,100 a 1500 mm

5 Especies y cultivares seleccionados en los dos regiones citrícolas con base al diagnóstico de positividad realizado dentro de la Campaña Nacional de monitoreo del VTC. DGSV, Estado Valencia Naranjo W. Navel Mandarino Fremont Limón Persa Total por estado Veracruz Puebla

6 METODOLOGÍA Muestreo MENSUAL del VTC Toma de potencial hídrico (Bomba de presión) para relacionarlo con grado de sequía

7 TÉCNICAS SEROLÓGICAS COMPARADAS EN EL ESTUDIO ELISA DAS (Agdia) ELISA INMUNOIMPRESIÓN Plant print v E E v Soporte de poliestireno LAB CE GENERAÑ TERAN v Soporte de Nitrocelulosa LAB CE IXTACUACO

8 La interpretación de los datos para cada técnica fue: a) E-INP: ENFERMO 1 = 1-25% 2 = 26-50% 3 = > 50% SANO Sin tinción floema S E b) E-DAS : Lectura a 405 nm: ENFERMO DO de la muestra >3( DO del Sano)

9 DETERMINACION DE LAS DISCREPANCIAS DE RESULTADOS PARA VTC MEDIANTE INDEXADO BIOLOGICO EN LIMÓN MEXICANO

10 RESULTADOS

11 Sensibilidad de dos técnicas para detectar el VTC en Puebla durante el verano (agosto-septiembre) CEIXTA.INFAP No. de árbol ELISA DAS D. O. 3S Z Concentración (Valor de 0 a 3) ELISA-Inmunoimpresión Frecuencia (%) Reacción Indexado biológico / ELISA INM Y

12 Sensibilidad de dos técnicas para detectar el VTC en Puebla durante el verano (agosto-septiembre) CEIXTA-INFAP No. de árbol ELISA DAS D. O. 3S Z Concentración (Valor de 0 a 3) ELISA-Inmunoimpresión Frecuencia (%) Reacción Indexado biológico / ELISA INM

13 Prueba biologica analizada con E-INM como referencia para discriminar árboles positivos de negativos. 2 MESES 19 MESES

14 Concordancia y discrepancia entre la técnica de E-INM con las pruebas IB+E-INM para diagnosticar al VTC en los árboles cítricos. Elisa Inmunoimpresión + - Indexado Biológico / E-INM Concordancia 97.4% Discrepancia

15 Concordancia y discrepancia entre la técnica de E-DAS con las pruebas IB+E-INM para diagnosticar al VTC en los árboles cítricos. Elisa DAS Indexado Biológico / E-INM Concordancia 81.5% Discrepancia

16 Resultados que demuestran la repetibilidad de la técnica ELISA Inmunoimpresión para diagnosticar al virus de la tristeza de los cítricos No. árbol 113 Técnica Resultado A M J J A S O N D E F M A M J J E-INM E-Das E-INM E-Das E-INM E-Das E-INM E-Das Pend 300 E-INM E-Das Pend.

17 Distribución del virus en la copa 90% + Mes colecta Febrero 2006 Abril 2006 Positiva Conc. % Conc. % % Conc. %. 3 84% +

18 Relación de factores climáticos y el porcentaje de muestras positivas al VTC. Veracruz, Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Dic Muestras + (%) P. Hídrico (-bars*10) T Prom.

19 Comportamiento de la concentración del VTC y frecuencia de positividad con relación a las temperaturas máxima semanales CDVTC*10 0 Abr 13, 2005 May 19, 2005 Jun 17, 2005 Jul 19, 2005 Ago 12, 2005 Sep 15, 2005 Oct 18, 2005 Dic 15, 2005 Ene 13, 2006 Feb 23, 2006 Mar 28, 2006 Abr 27, 2006 May 23, 2006 Jun 28, 2006 Jul 26, 2006 Ago 30, 2006 CDVTC 1 Sem Acumulada 4 sem FMP

20 600.0 Temperaturas entre 17 y 27 o C (Cuatro semanas) CDVTC (R2 = 0.13) FMP (R2 = 0.11) Abr 13, 2005 May 19, 2005 Jun 17, 2005 Jul 19, 2005 Ago 12, 2005 Sep 15, 2005 Oct 18, 2005 Dic 15, 2005 Ene 13, 2006 Feb 23, 2006 Mar 28, 2006 Abr 27, 2006 May 23, 2006 Jun 28, 2006 Jul 26, 2006 Ago 30, 2006 Comportamiento de la concentración del VTC y la frecuencia de muestras positivas con relación a las temperaturas favorables para la replicación del virus, acumuladas por mes (CDVTC= Concentración detectable de VTC, FMP = Frecuencia de las muestras positivas a VTC

21 CONCLUSIONES -La técnica E-INM resultó con mayor sensibilidad que E-DAS para la detección del VTC durante el verano. - La frecuencia de muestras positivas y su concentración disminuyen con temperaturas promedio semanales mayores a 25 C y máximas semanales de 38 C. - Así mismo con acumulación arriba de 100 horas durante un mes con temperaturas de 32 C. - Se observó cierta tendencia a disminuir la concentración de tinción floemática a mayor estrés hídrico.