Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos. Montserrat Gutiérrez Bustillo. Profesora Titular de Botánica. Universidad Complutensee de Madrid.

Transcripción

1 Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos Normalización de los métodos de muestreo y análisis s aeropalinológicos. Montserrat Gutiérrez Bustillo. Profesora Titular de Botánica. Universidad Complutensee de Madrid.

2 Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos En Europa y también en España, el análisis polínico atmosférico como control rutinario del polen en el aire, viene utilizándose desde 1990 aproximadamente. Los métodos de ensayo utilizados en la toma de muestras y en su posterior análisis generalmente siguen las normas dadas por la International Association for Aerobiology (IAA). En España, las estaciones integradas en la Red Española de Aerobiología (REA), siguen en sus procedimientos de muestreo y análisis su Manual de Calidadd y Gestión Galán Soldevilla, C., Cariñanos González, P., Alcázar Teno, P. & Domínguez Vilches, E Manual de calidad y gestión de la Red Española de Aerobiología. 61 pags. + CD. Servicio de Publicaciones. Universidad de Córdoba. ISBN

3 Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos Hasta el momento son muy pocos los intentos realizados para aplicar la normativa internacional de calidad a estos ensayos. En España: El Laboratorio Municipal de Aranjuez implantó un Sistema de gestión de Calidad, en base a la Norma UNE-EN ISO 9001, obteniendo la Certificación ISO 9001:2000, nº ES05/1709 para El recuento e identificación de polen en la atmósfera El Laboratorio Normativo de Salud Pública de Bilbao solicitó a ENAC en 2006 y obtuvo la Acreditación, según la Norma UNE-EN ISO/IEC 17025:2005 para el ensayo Identificación y recuento de tipos polínicos en aire ambiente

4 Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos En relación a la normalización de la metodología, el análisis polínico atmosférico puede considerarse un Ensayo de Laboratorio en el Sector medioambiental. Ensayos en el sector medioambiental. Incluye ensayos físico- biológicos, toma de muestras químicos, microbiológicos, ecotoxicidad, que se llevan a cabo sobre aguas, lixiviados, suelos, lodos, sedimentos, residuos, foliares, biota, así como emisiones atmosféricas, aire ambiente y atmósfera laborales, junto con sus correspondientes soportes de muestreo. ALCANCE DE ACREDITACIÓN: Norma de referencia/reference standars: UNE-EN ISO/IEC 17025: 2005 Título/Title: Identificación y recuento de tipos polínicos en aire ambiente ÁREA: CALIDAD DEL AIRE CATEGORÍA: Categoría 0 (Ensayos en Laboratorio Permanente) Producto o material a ensayar: Describir el producto o matriz a ensayar, definiéndolo tanto como sea preciso

5 Cómo se muestrea y analiza el polen atmosférico? Las muestras diarias son preparaciones microscópicas, que un técnico analiza al microscopio óptico (M.O.), identificando y contando los granos de polen presentes en la muestra. Se trabaja a 400 aumentos (Ocular 10x; Objetivo 40x) Granos de polen

6 Es un análisis cualitativo y cuantitativo La identificación se basa en la morfología de estas partículas, que es específica para determinados grupos de plantas u hongos productores Como resultado del análisis de cada muestra obtenemos una relación de tipos morfológicos de polen (espectro diario) cuantificados mediante el valor medio diario de estas partículas por metro cúbico de aire.

7 Informe de resultados

8 ALCANCE DE ACREDITACIÓN: Detallar el parámetro o parámetros a ensayar En nuestro caso los tipos polínicos a identificar y contar ACER Acer ALNU Alnus ARTE Artemisia BETU Betula CAST Castanea COMP Compositae CORY Corylus CUPR Cupress/Tax CHEN Chenop/Amarant ERIC Ericaceae EUCA Eucaliptus FRAX Fraxinus LIGU Ligustrum MORA Moraceae OLEA Olea PINU Pinaceae PLAN Plantago PLAT Platanus POAC Poaceae POPU Populus QUER Quercus RUME Rumex SALI Salix ULMU Ulmus URTI Urticaceae OTROS: No identificados TOTALES:

9 Definición y delimitación del tipo polínico BROU Brousonetia ssp. MORA Moraceae MORU Morus ssp. A la familia Moraceae pertenecen los géneros Morus y Brousonetia, con algunas especies utilizadas como ornamentales (M. nigra, M. alba y B. papirifera principalmente). El polen es di-trizonoporado, isopolar y de tamaño pequeño (Broussonetia micras) a mediano (Morus micras). Broussonetia Morus

10 Definición y delimitación del tipo polínico TIPO POLÍNICO TÁXON CEDR Cedrus ssp. (Pinaceae Pinaceae) PINA Pinaceae PINU Pinus ssp. (Pinaceae Pinaceae) Polen de Cedrus, muy grande de micras el de Pinus algo mas pequeño (50-80 (50 micras)

11 Análisis culitativo y cuantitativo Indicar los límites de detección en los ensayos cualitativos y el rango de medida en los ensayos cuantitativos, de acuerdo a los siguientes criterios: Límite de detección. Para únicamente este límite los análisis cualitativos indicar Rango de medida. Para análisis cuantitativos indicar siempre el límite Inferior del rango de medida (límite de cuantificación). Además, incluir el límite superior cuando existan limitaciones técnicas debidas a equipos, materiales de referencia o patrones que utiliza el laboratorio En el caso particular de ensayos microbiológicos y biológicos no será necesario incluir el rango de medida.

12 Es un análisis cualitativo y cuantitativo Los granos de polen son partículas tridimensionales de tamaño y forma variable dispersas de forma no homogénea en el aire Durante el muestreo los granos de polen presentes en el aire quedan adheridos a la superficie de la muestra En la muestra de polen atmosférico, el análisis al Microscopio Óptico nos permite conocer el número de granos de polen que han quedado adheridos a una parte, estadísticamente representativa, de la superficie total de la muestra ( análisis cuantitativo ) Por su morfología adscribimos estos granos de polen a un determinado tipo polínico ( análisis cualitativo) Los resultados del análisiss cuantitativo se expresan mediante dos valores numéricos: 1. la concentración media de granos de polen/m3 de aire a lo largo de un día 2. la incertidumbre que está asociada a la dispersión del resultado o intervalo dentro del cual tenemos cierta fiabilidad de que se encuentra el valor verdadero

13 Análisis cuantitativo 1. El límite de cuantificación es de 1 grano de polen/ m 3 de aire 2. No existe ningún procedimiento idóneo para el cálculo de la incertidumbre de medida en el análisis polínico atmosférico Guía para la expresión de la incer rtidumbre en los ensayos cuantitativos (G-ENAC-09/Rev. 1 Julio 2005) En este documento se considera sólo la incertidumbre de medida en los ensayos cuantitativos. La comunidad científica tiene todavía que formular una estrategia para los resultadoss de los ensayos cualitativos. En todos los laboratorios que actualmente realizan análisis polínico atmosférico se utiliza como límit te mínimo de detección un grano de polen/m 3 de aire, y en ningún caso se utiliza un límite superior

14 Análisis cuantitativo Dadas las características del muestreo y el análisis, la probabilidad de detectar en la muestra la presencia de un solo grano de polen/m 3 de aire, es muy alta Es muy frecuente que un tipo polínico alcance niveles de concentración media diaria superiores a los 1000 granos de polen/m 3 Mediante un cálculo matemático muy simple que relaciona: superficie total de captación de la muestra (672 x 10 6 micras 2 ) superficie media de un grano de polen (35x30= 1050 micras 2 ) para que la muestra llegara a estar saturada habría que recoger granos de polen, que aproximadamente equivalen a granos de polen/m 3 de aire/día Los resultados que habitualmen nte se obtienen quedan muy lejos de esas cifras. Por ello, y por la ausencia de legislación al respecto, no parece necesario fijar un nivel máximo de detección. Simplemente debe darse el valor numérico obtenido en el análisis, para cada tipo polínico.

15 Análisis cualitativo El resultado de un análisis cualitativo también se caracteriza por dos valores: 1. el primero corresponde a la respuesta binaria SI/NO, en nuestro caso PRESENCIA/AUSENCIA de un determinado tipo polínico 2. es la probabilidad de error aso ociada a la decisión que hemos tomado. En nuestro caso los parámetros de calidad aplicables, deberían medir el riesgo de identificación errónea, directamente relacionado con la posibilidad de discriminación de los tipos polínicos por su particular morfología (comparación con un patrón). Para que la probabilidad de error sea pequeña es muy importante: 1. La formación específica de los Técnicos de Laboratorio que realizan los análisis. Este requisito es el más importante 2. La comparación con los materiales de referencia (Requisitos de calidad)un patrón

16 Requisitos de calidad del material de referencia Nuestros materiales de referencia, atmosférico van a ser: para la identificación del polen 1. Los pliegos de herbario con las muestras de las plantas que nos han servido para la obtención del polen, debidamente etiquetados. 2. Las preparaciones polínicas para M.O. correspondientes a los tipos polínicos a identificar y que integran la palinoteca. 1. Debe estar a cargo de un profesional calificado responsable de la compra, recepción y distribución. Somos nuestros propios proveedores 1. Se debe mantener un registro central o archivo que contenga toda la información relativa a las propiedades del material de referencia. 2. Se debe verificar la calidad del material de referencia cuando las condiciones hayan sido alteradas y rutinariamente, una vez al año.

17 PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA LA TOMA Y PREPARACIÓN DE MUESTRASS CON EL CAPTADOR VOLUMÉTRICO El captador volumétrico succiona un cierto volumen de aire (10 litros ±1 por minuto) que incide directamente en la superficie de captación. Las esporas y los granos de polen presentes quedan adherid das a la superficie captadora que se desplaza a una velocidad uniforme de 2 mm/hora mediante un mecanismo de relojería. Condiciones para la ubicación del captador Mantenimiento Verificación del flujo de succión Criterios de validación de muestras

18 PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA EL RECUENTO E IDENTIFICACIONN DEL POLEN ATMOSFÉRICO El método de recuento que generalmente se utiliza es el de 4 barridos horizontales continuos a lo largo de toda la preparación a 40x10 aumentos Estos barridos deben ser equidistantes entre si y del borde de la preparación en el caso del primer y último barrido La superficie analizada corresponde al % de superficie total

19 Muchas gracias a todos por su atención!