ANTECEDENTES. Generalidades de Helicobacter pylori

Transcripción

1 ANTECEDENTES Generalidades de Helicobacter pylori Helicobacter pylori se caracteriza por ser espiral o curvo, sin embargo, existen algunas cepas que se presentan en forma de barras cortas. En condiciones óptimas, este bacilo presenta forma de S, mide 0.5 x 5 µm de longitud y posee de 5 a 7 flagelos polares envainados. Esta morfología corresponde a la requerida por el bacilo para obtener una máxima motilidad dentro de la mucosa del tracto gastrointestinal del huésped. Este bacilo consta de pared celular, membrana plasmática interna y externa, citoplasma, membrana polar, gránulos intracelulares y agregados citoplásmicos, entre otros (Hazell y col., 2001). La infección por H. pylori afecta a aproximadamente el 50% de la población mundial, siendo una de las infecciones con mayor prevalencia. En México, los estudios obtenidos de análisis serológicos indican que la infección se encuentra en un 64% de la población. Se ha asociado la infección de H. pylori con factores socioeconómicos, con la edad del individuo, y en poblaciones con escaso suministro de agua potable, así como en condiciones de hacinamiento y de insuficientes regulaciones sanitarias (Rodríguez-Magallán y col., 2009). Algunos factores de riesgo que se han asociado con infecciones causadas por H. pylori son el consumo de tabaco y/o alcohol, antecedentes familiares de padecimientos gástricos y exposiciones ocupacionales (Brown, 2000; Ford y Axon, 2010). Actualmente se consideran dos posibles vías de transmisión para la adquisición de una infección por H. pylori: oral-oral y fecal-oral. En ambos casos, la transmisión es de persona a persona (Brown, 2000). La ruta oral-oral es considerada como la vía más común en países desarrollados. Sin embargo, la detección de H. pylori en la cavidad oral puede ser un fenómeno intermitente o constante, por lo cual se discute su viabilidad como ruta de transmisión. Además, existen otros microorganismos con actividad de ureasa, por lo cual la prueba de ureasa quedaría descartada como método de diagnóstico, considerándose únicamente el cultivo de H. pylori como un protocolo estándar para la detección de este bacilo (Brown, 2000). 3

2 En cuanto a la ruta fecal-oral, H. pylori se ha detectado en heces diarreicas de pacientes infectados; sin embargo, no se observa en muestras fecales normales. Otra ruta posible es la gastro-oral, ya sea por reflujo gastroesofágico o por regurgitación del contenido estomacal (Brown, 2000). Helicobacter pylori y el sistema inmune del huésped El estómago del ser humano posee diversos mecanismos de defensa contra la colonización por agentes patógenos. Entre ellos se encuentran el ph estomacal, productos antibacterianos producidos por la mucosa gástrica (lactoferrina, β-defensinas, lisozima, entre otros) así como receptores tipo Toll en la superficie de las células epiteliales gástricas. No obstante, H. pylori posee varias estrategias para evadir el sistema inmune del huésped y efectuar una colonización exitosa en el medio ambiente estomacal (Algood y Cover, 2006). Uno de los mecanismos de evasión del sistema inmune del huésped por H. pylori es la atenuación de la respuesta innata, la cual se realiza con la producción de arginasa, CagA y VacA. Otra estrategia de H. pylori es modular la reacción inflamatoria mediante el escaso reconocimiento de flagelinas y de su lipopolisacárido por los receptores tipo Toll. H. pylori tiene la capacidad de evadir la respuesta inmune adquirida mediante la imitación de antígenos del huésped, la generación de diversidad génica por mutaciones puntuales y recombinaciones, así como la regulación corriente abajo de la activación de células del sistema inmune (Agarwal y Agarwal, 2008; Chui y col., 2005). De acuerdo a lo anterior, se han realizado diversos estudios para analizar la respuesta inmune del huésped y su relación con la erradicación de H. pylori en el medio ambiente estomacal. Aunque H. pylori estimula tanto la respuesta inmune innata como la adquirida, se ha constatado que en seres humanos la inmunidad innata por sí misma es insuficiente para eliminar la bacteria (Chui y col., 2005). En ensayos murinos se ha demostrado que las infecciones persistentes con este bacilo inducen a una respuesta polarizada Th1 (Algood y Cover, 2006). Incluso se ha vinculado a las células T reguladoras con la obstaculización de la erradicación de H. pylori, puesto que se ha observado su expansión en casos de infección 4

3 crónica (Aebischer y col., 2010). Sin embargo, el papel de la respuesta humoral en la eliminación de la colonización bacteriana es controversial, ya que en modelos murinos se ha observado una protección contra H. pylori en ausencia de anticuerpos, mientras que la infección con este bacilo puede persistir a pesar de una alta producción de anticuerpos IgA e IgG específicos. Se ha sugerido en modelos murinos que las respuestas inmunes polarizadas Th2 son esenciales para otorgar protección contra infecciones por H. pylori (Agarwal y Agarwal, 2008). Mecanismos de Patogenicidad Helicobacter pylori posee diversas estrategias para asegurar su supervivencia en el epitelio de la mucosa gástrica, para lo cual hace uso de diversos factores de virulencia tales como las adhesinas, las proteínas CagA y VacA, así como la producción de ureasa y la inducción de citocinas (Kuipers y col., 2006). Para sobrevivir en el medio ácido estomacal, H. pylori posee la enzima ureasa, la cual se encarga de catalizar la conversión de urea a carbonato y amonio (Hazell y col., 2001). Este último producto es una molécula tóxica para las células epiteliales, además promueve el aumento del ph estomacal para propiciar la colonización bacteriana, particularmente en el antro estomacal (Baldwin y col., 2007). Además, H. pylori produce la proteína CagA, la cual es codificada por el gen caga. Sin embargo, no todas las cepas poseen dicho gen, encontrándose en un 50-70% de las cepas de H. pylori, siendo un indicador de la activación de la isla de patogenicidad PAI. Esta última consta de Kb y contiene genes que codifican para el sistema de secreción tipo IV (Kuipers y col., 2006). Por medio de este sistema, es posible translocar proteína CagA fosforilada al interior citoplasmático de las células epiteliales de la mucosa gástrica, y de este modo, interactuar con las principales vías de señalización y transducción de estas células para promover caminos anti-apoptóticos. Debido a lo anterior, caga auxilia en la persistencia de H. pylori en la mucosa gástrica (Atherton y Blaser, 2004). 5

4 La proteína VacA, a diferencia de CagA, se encuentra en todas las cepas de H. pylori y ejerce un papel pro-inflamatorio y colabora en la persistencia del bacilo formando poros en las membranas de las células epiteliales. Ocurre un egreso de aniones y de urea, induciendo la pérdida de enlaces fuertes en el epitelio para permitir el cruce de nutrientes desde la mucosa gástrica hacia el nicho de H. pylori (Atherton y Blaser, 2004). H. pylori también cuenta con un mecanismo de colonización primario mediante la utilización de adhesinas, las cuales son proteínas, glicoconjugados o lípidos que intervienen en las primeras etapas de colonización mediante la regulación de la bacteria y de la superficie celular bacteriana. Las adhesinas promueven la infiltración de células inflamatorias al micronicho de H. pylori en la mucosa estomacal, contribuyen a su persistencia e inducen cascadas de transducción por señalización (Hazell y col., 2001). De acuerdo con lo anterior, se dice que la colonización de la mucosa estomacal por H. pylori es un mecanismo multifactorial, ya que además de los elementos proporcionados por este bacilo, el modo de infección se ve afectado por factores genéticos del huésped. Esto se observa con la heterogeneidad en la respuesta inmune y con el polimorfismo de citocinas en las células epiteliales (Atherton y Blaser, 2004). Distintas patologías pueden ser observadas dependiendo no solamente del genotipo predominante de la cepa colonizadora de H. pylori, sino también de la variabilidad en los receptores potenciales para la unión con este bacilo (Odenbreit y col., 1999). Aunque se manifiesten diversas patologías, el mecanismo general de colonización por H. pylori consta de una pro-inflamación inducida por la expresión de citocinas al detectar la presencia de este bacilo en la mucosa estomacal. Posteriormente, las células D ubicadas en el antro estomacal reducen su nivel de producción de somatostatina, fenómeno observado principalmente en la gastritis. Además, las células G incrementan su producción de gastrina, cuyos efectos dependen de la distribución de H. pylori en el estómago. Si la ubicación es en el antro gástrico, los elevados niveles de gastrina conducen a un aumento en la secreción ácida por parte de las células parietales, posibilitando el desarrollo de una ulceración duodenal. En cambio, si dicha colonización ocurre en el corpus estomacal, se 6

5 suprime la secreción ácida indirectamente por inhibición de células semejantes a enterocromafines productoras de histamina, con lo que se estimula la proliferación de células epiteliales gástricas que pueden conducir al desarrollo de úlceras gástricas y adenocarcinomas no gástricos (Borenshtein y col., 2008; Kuipers y col., 2006). Proteínas con afinidad a heparán sulfato (HSBP) Existen diversos tipos de adhesinas involucradas en las primeras etapas de colonización por H. pylori, motivo por el que no se considera la existencia de una adhesina primordial para la realización de este proceso (Hazell y col., 2001). Sin embargo, se ha observado la presencia de proteínas de unión a heparina en la superficie celular de H. pylori, las cuales presentan interacciones de alta afinidad con heparina y heparán sulfato (Kd = 9 x 10-9 M) que son producidas, a su vez, por mastocitos y células mesenquimales y epiteliales del huésped. Dichas interacciones amplifican el potencial patogénico y adaptativo de H. pylori (Dubreuil y col., 2004). Estudios previos han demostrado que una pre-incubación de H. pylori con heparán sulfato y otros polisacáridos sulfatados incrementan los factores de unión para el crecimiento fibroblástico. Esta unión es reversible y saturable y no puede ser inhibida por otros glicosaminoglicanos de tamaño semejante, tales como condroitín sulfato y dermatán sulfato, o por glicoproteínas altamente glicosiladas como mucina gástrica y fetuina. La unión, no obstante, puede reducirse in vitro mediante tratamiento con calor (80 C, 10 min) y exposición de la bacteria a protonasa E, proteinasa K, tripsina y quimiotripsina (Ascencio y col., 1993). Por este motivo, se ha estudiado el papel de las proteínas de unión a heparán sulfato de H. pylori en la adherencia a células huésped. Se ha observado la promoción de la adhesión bacteriana in vitro a células HeLa y Kato III por la proteína extracelular HSBP de 71.5 kda. Ello propone un reconocimiento por parte de H. pylori hacia receptores celulares glicoconjugados, glicolípidos sulfatados, sulfomucinas y glicosaminoglicanos sulfatados. 7

6 La alta afinidad presentada por H. pylori hacia este tipo de moléculas sugiere que la superficie celular y el heparán sulfato de la matriz extracelular son blancos para su adhesión durante las primeras etapas de colonización de la mucosa gástrica (Guzmán-Murillo y col., 2001). El Genoma de Helicobacter pylori Helicobacter pylori es genéticamente más diverso que otras bacterias gramnegativas, cuyo cromosoma puede organizarse en distintas formas en un número limitado de regiones discretas (Achtman y col., 1999). Sin embargo, independientemente de la cepa, el orden génico en el cromosoma de H. pylori conserva el mismo patrón (Alm y col., 2000). El genoma de H. pylori consta de una región central, que contiene un total de 1111 genes presentes en todas las cepas, por lo que se infiere que estos genes son determinantes en las características propias de la especie (Dong y col., 2009). Por ello, el genoma central de H. pylori codifica principalmente proteínas que intervienen en la colonización y persistencia de este bacilo en el estómago del huésped (Baldwin y col., 2007). Además del genoma central, existen genes auxiliares que codifican las propiedades biológicas únicas para cada cepa. Estos genes se encuentran en una región hipervariable denominada zona de plasticidad y representan un 6-7% del genoma total de H. pylori (Boneca y col., 2003; Dong y col., 2009). Los genes auxiliares codifican diversas proteínas pertenecientes a la isla de patogenicidad cag, proteínas de membrana externa, proteínas del sistema de restricción-modificación y proteínas con funcionalidad desconocida (Dong y col., 2009). La diversidad genética entre cepas de H. pylori puede originarse por transferencia horizontal (Gressmann y col., 2005; Janssen y col., 2001) y aunque el establecimiento de este bacilo en el huésped no requiera de una alteración en el genoma, existen diversas condiciones en el microambiente estomacal que pueden afectar el contenido genómico de H. pylori (Dong y col., 2009). Ejemplos de lo anterior son la liberación de ácido gástrico, 8

7 alteraciones en los constituyentes y en la cantidad de moco gástrico, cambios en las proteínas de superficie de las células epiteliales gástricas en metaplasia, productos de la inflamación contra H. pylori, así como la infección con otros microorganismos (Dong y col., 2009). Existen diversos mecanismos que utiliza H. pylori para adquirir o perder genes durante la colonización para adaptarse al ambiente gástrico: inserciones y/o deleciones de secuencias codificantes, diferente codón de inicio o término, cambio de cuadro intragénico, pseudogenes, una alta tasa mutacional (4.1 x 10-5 comparable a E. coli) y recombinación mediada por plásmidos o transposones (Janssen y col., 2001; Odenbreit y col., 2009). De este modo, la alta variabilidad genética entre cepas de H. pylori se debe a la microdiversidad a nivel gen, así como a la macrodiversidad a nivel genoma (Odenbreit y col., 2009). Debido a esta diversidad, las cepas de H. pylori contienen genes específicos de cepa que codifican distintas proteínas de membrana externa (Alm y col., 2000). Estas proteínas se producen en tasas que varían del 35 al 73%, indicando su papel en la adaptación al nicho gástrico. La expresión de distintos perfiles de proteínas de membrana externa en cepas individuales es un reflejo de la presión selectiva por la adhesión, que puede diferir entre huéspedes así como en un mismo individuo con el paso del tiempo (Odenbreit y col., 2009). De este modo, la expresión de proteínas de membrana externa y sus alteraciones subsecuentes en la superficie bacteriana pueden tener un papel en la colonización o persistencia de una infección por H. pylori o contribuir a la severidad de una enfermedad asociada con la infección crónica (Alm y col., 2000). En concordancia con lo anterior, la colonización, patogenicidad y la evolución de la infección por H. pylori dependen de la diversidad de cepas y de la interacción huéspedbacteria. Por este motivo, es importante comprender los cambios genéticos en las poblaciones de H. pylori e investigar los genes responsables en el desarrollo de una enfermedad. La identificación de genes específicos de cepa pueden ser útiles para elucidar 9

8 blancos potenciales para el desarrollo de terapias más eficaces contra infecciones provocadas por H. pylori (Janssen y col., 2001). Enfermedades Asociadas Helicobacter pylori es un bacilo que presenta tropismo de huésped, colonizando de forma natural al ser humano, así como tropismo de tejido, ubicándose principalmente en el antro de la mucosa gástrica (Konturek, 2003). Las patologías originadas por este microorganismo son debidas mayoritariamente a su persistencia más que a su toxicidad, pudiendo afectar en distintas modalidades según sea la cepa predominante que colonice el epitelio gástrico del huésped (Dubreuil y col., 2004). De este modo, las cepas CagA positivas presentan una tendencia al desarrollo de adenocarcinoma gástrico, mientras que las CagA negativas desarrollan frecuentemente úlceras pépticas debido a la inflamación y reclutamiento de neutrófilos y monocitos por efecto de la citotoxina vacuolizante VacA (Konturek, 2003). Sin embargo, se ha observado que H. pylori ejerce a su vez, un papel protector contra el desarrollo de patologías concernientes a reflujo gastroesófagico, tales como el esófago de Barrett y el adenocarcinoma esofágico (Konturek, 2003). Métodos de Diagnóstico Existen diversos métodos para la detección de H. pylori, los cuales son clasificados como invasivos, no invasivos o métodos moleculares (Calvet y col., 2010). Dentro de los métodos no invasivos se encuentran las pruebas serológicas, en las cuales se detecta al bacilo por titulación de anticuerpos IgG e IgA en muestras de suero y heces fecales. Las pruebas serológicas tienen una sensibilidad de un 90%, sin embargo, no necesariamente indican la presencia de una infección activa por H. pylori (Rodríguez- Magallán y col., 2009). Otro procedimiento no invasivo es la prueba del aliento, en la cual se detecta urea marcada mediante 13 C o 14 C en el aire exhalado por el paciente previo a un tratamiento con ácido cítrico. También se han identificado varios marcadores clínicos y 10

9 bioquímicos en el suero de pacientes infectados con H. pylori que han desarrollado metaplasia intestinal severa, entre ellos se encuentran anticuerpos contra las proteínas CagA, VacA, HcpC y GroEL. Como métodos moleculares considerados como no invasivos se encuentra la técnica PCR, que auxilia en la detección de H. pylori, así como la espectrometría de masas SELDI-TOF, la cual detecta proteínas específicas de cepa (Calvet y col., 2010). Por otro lado, las pruebas invasivas requieren la escisión de una muestra de tejido dañado por el bacilo, siendo la toma por biopsia de la mucosa gástrica el procedimiento más común. La histología permite el diagnóstico de pacientes con dispepsia, no obstante, existen varias limitantes en esta técnica, como la variabilidad inter-observador en la evaluación de las lesiones, el fondo histológico del paciente y la ubicación especifica de la toma de muestra del tejido gástrico (Calvet y col., 2010). La endoscopía sola, otra prueba invasiva comúnmente utilizada, auxilia en el diagnóstico mediante la visualización de lesiones gástricas y nódulos en el antro estomacal (Rodríguez-Magallán y col., 2009). Otro método invasivo es la prueba rápida de la ureasa, que detecta la presencia de H. pylori en especímenes de biopsias en un intervalo de 5 minutos con una sensibilidad del 90 al 96% y con una especificidad del 100% (Calvet y col., 2010). Tratamiento El objetivo del tratamiento farmacológico consiste en la erradicación total del bacilo de la mucosa gástrica del huésped. Desde la década de los 90, el tratamiento de primera línea había demostrado una eficacia del 90% en la eliminación de la infección por H. pylori (O Connor y col., 2010). En esta terapia de primera línea, los antibióticos empleados pueden ser claritromicina 500 mg c/12 h, amoxicilina 1g c/12 h, tetraciclina 500 mg c/6 h o metronidazol 250 mg c/6 h. Aunado a estos fármacos, se suministra un inhibidor de bomba de protones, siendo los más utilizados el omeprazol, lanzoprazol o pantoprazol 40 a 80 mg c/24 h por 14 días (Mégraud, 2004). No obstante, la eficacia de esta terapéutica farmacológica ha disminuido considerablemente en las últimas décadas, alcanzándose una 11

10 eliminación completa de la infección por H. pylori en un 70 al 80% de los casos (O Connor y col., 2010). Si el tratamiento de primera línea no ha erradicado la infección, se recurre a terapéuticas de segunda línea. Estos tratamientos cuádruples consisten básicamente de un inhibidor de bomba de protones, dos antibióticos (metronidazol y tetraciclina, o levofloxacina y amoxicilina) y bismuto por un período de 7 a 14 días (Gisbert, 2008). Sin embargo, estas terapias de segunda línea han tenido una eficacia del 76% en la erradicación total de la infección (O Connor y col., 2010). De acuerdo con lo anterior, se han elaborado tratamientos de rescate o de tercera línea para el tratamiento contra la infección provocada por H. pylori. Este régimen consta de rifabutina, amoxicilina y de un inhibidor de bomba de protones, aunque también hay terapias basadas en furazolidona por un lapso de tiempo de 10 a 14 días (Gisbert, 2008). El éxito alcanzado con este tratamiento de tercera línea ocurre en un 65% de los casos (O Connor y col., 2010) siendo la resistencia farmacológica un problema creciente tanto en pacientes adultos como en infantes (Mourad-Baars y col., 2010). El incremento de la resistencia antibiótica por H. pylori se ha atribuido a la variabilidad de cepas de este bacilo, a su capacidad de transferencia horizontal para genes de resistencia a fármacos, así como a mutaciones en su cromosoma. La consecuencia es la transmisión de la resistencia en forma vertical, y de este modo, ocurre un incremento progresivo en la resistencia farmacológica. Se han identificado diversos genes sujetos a dichas mutaciones, entre los cuales destaca la mutación A2143G (69.8%), seguida de A2142G (11.7%) y A2142C (2.6%). Dichas mutaciones corresponden al dominio V del 23S rrna, ocasionando cambios en la configuración espacial del ribosoma de H. pylori. Los antibióticos que presentan mayor susceptibilidad a resistencia bacteriana son claritromicina y metronidazol, principalmente en infecciones ocasionadas por cepas caga positivas (Mégraud, 2004). Por lo anterior, es indispensable el desarrollo de una nueva estrategia para la erradicación total de la infección por H. pylori. Aunque anteriormente se creía que la 12

11 inmunización contra este bacilo sería imposible de lograr, actualmente se considera que el diseño de una vacuna contra H. pylori puede ser el único enfoque práctico para la eliminación a gran escala de las infecciones provocadas por este bacilo en poblaciones susceptibles (Agarwal y Agarwal, 2008). Diseño de Vacunas Debido al incremento constante de la resistencia antibiótica por H. pylori, el diseño de una vacuna profiláctica y/o terapéutica otorga un enfoque novedoso para la prevención, tratamiento y eliminación de las infecciones provocadas por este bacilo. Una vacuna eficaz contra este microorganismo tendría el potencial de afectar significativamente la salud a nivel mundial (Chui y col., 2005). Sin embargo, se requieren resolver varios aspectos para el desarrollo de una vacuna contra H. pylori, como los antígenos protectores a utilizar, la ruta de inmunización y el sistema de transporte antigénico (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). Es por ello que se han efectuado diversos estudios para el diseño de una vacuna contra H. pylori con distintos modelos animales (ratones, gerbos, monos Rhesus), así como ensayos fase I en humanos. Estos estudios pueden clasificarse en cuatro categorías: 1) ensayos con vacunas de bacteria muerta, 2) con bacterias atenuadas o virus como transportadores de antígenos, 3) con DNA y finalmente, 4) vacunas con antígenos de H. pylori (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). Dentro de la primera categoría, existen varios estudios que emplean células de H. pylori muertas para la elaboración de una vacuna. Se ha administrado oralmente bacteria muerta con formalina usando toxina termolábil (LT) de E. coli mutante como adyuvante en 23 voluntarios no infectados, habiendo una respuesta inmune sistémica y en mucosas. Sin embargo, no hubo erradicación total de H. pylori, aunado a efectos secundarios como diarrea, fiebre y vómito (Kotloff y col., 2001). También se ha utilizado H. pylori fantasma en modelos murinos con fines profilácticos, confiriendo únicamente una protección parcial contra la infección. 13

12 En la segunda categoría, se han empleado cepas atenuadas de Salmonella como transportadores de antígenos de H. pylori. Como ejemplo de ello, en un modelo murino se empleó Salmonella como transportador de las subunidades A y B de ureasa de H. pylori, observándose una reducción de la colonización gástrica por este microorganismo (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). En un estudio fase I con voluntarios no infectados, se obtuvo profilaxis parcial utilizando Salmonella enterica sv. Typhi y Typhimurium recombinante con antígenos de H. pylori. Otro ensayo fase I utilizó Salmonella Ty21a expresando ureasa A y B de H. pylori en personas no infectadas, confiriendo una protección parcial (Agarwal y Agarwal, 2008). En cuanto a virus atenuados, se han utilizado virus de polio genéticamente modificados para acarrear UreB de H. pylori (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). Las vacunas de la tercera categoría utilizan con frecuencia plásmidos que contienen genes de ureasa, catalasa o Hsp de H. pylori (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). Un ensayo en modelo murino utilizó pcdna 3.1, que codifica la catalasa de H. pylori, para la inmunización vía intranasal e intracutánea, induciendo una respuesta inmune humoral y suprimiendo la colonización e inflamación de la mucosa gástrica. Otro estudio evaluó la inmunogenicidad de una vacuna oral de DNA con la proteína HP-NAP recombinante de H. pylori en ratones, obteniéndose una respuesta inmune específica contra este bacilo (Sun y col., 2006). Con respecto a la última categoría de vacunas, destacan los ensayos realizados con ureasa de H. pylori. Se ha suministrado S. typhi Ty800 con ureasa A y B de H. pylori oralmente a 8 individuos no infectados, no produciéndose respuesta inmune humoral ni en mucosa. También se ha empleado S. typhimurium con ureasa de H. pylori en 6 voluntarios no infectados, obteniéndose una respuesta con anticuerpos IgA (Agarwal y Agarwal, 2008). En un modelo con monos Rhesus, se administró oralmente ureasa recombinante (rure) con E. coli LT, mostrando una reducción modesta en la colonización gástrica por H. pylori (Lee, 2001). 14

13 Otros antígenos utilizados comúnmente para la elaboración de vacunas son las proteínas CagA y VacA de H. pylori. La proteína CagA ha sido incluida en varios prototipos de vacunas, aunque su uso práctico ha sido cuestionado debido al alto polimorfismo que presenta. En cuanto a la proteína VacA, los prototipos que la incluyen presentan la desventaja de la variación en los niveles de expresión del gen que la codifica. Por ello, para la elaboración de una vacuna experimental se ha propuesto incluir proteínas abundantes de H. pylori que se encuentren conservadas, que sean altamente inmunogénicas y cuya ubicación sea en la superficie bacteriana (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). De acuerdo a lo anterior, se han incluido distintas proteínas de superficie de H. pylori en el diseño de prototipos de vacunas. Un ejemplo de ello es Tipα, una proteína de 19 kda ubicada en la membrana bacteriana de las cepas ATCC 26695, ATCC y SS1 que induce la producción de TNF-α por células epiteliales gástricas in vitro. En un ensayo profiláctico con un modelo murino C57BL/6 se administró vía intranasal Tipα con CpG contra la infección por H. pylori, obteniéndose una respuesta inmune efectiva Th1 (Inoue y col., 2009). Otro enfoque novedoso para el diseño de una vacuna contra H. pylori consiste en el empleo de adhesinas con afinidad a heparán sulfato (HSBP). En estudios previos, se ha demostrado la inhibición de la adherencia bacteriana in vitro en células HeLa y Kato III mediante la inducción de anticuerpos policlonales de conejo contra la proteína extracelular HSBP de 71.5 kda (Guzmán-Murillo y col., 2001) y que en animales oralmente inmunizados con HSBP, la infectividad del patógeno se reduce significativamente (Ruiz- Bustos y col., 2000). Se observó también que los anticuerpos monoclonales generados contra Le a y Le b no inhiben la adherencia de H. pylori, por lo cual se sugiere la elaboración de una vacuna basada en proteínas HSBP para la protección y erradicación de las patologías provocadas por este bacilo (Ruiz-Bustos y col., 2001). En concordancia con los estudios anteriormente descritos, el desarrollo de una vacuna sigue siendo una opción deseable para controlar la infección por H. pylori (Aebischer y col., 2010). Una vacuna profiláctica y terapéutica efectiva contra este bacilo podría reducir 15

14 la incidencia de complicaciones tardías relacionadas con la infección, incluyendo el desarrollo de cáncer gástrico. No obstante, actualmente es difícil alcanzar respuestas inmunes protectoras eficaces contra H. pylori en mucosas (Chui y col., 2005). Es por ello que el diseño exitoso de una vacuna necesita de una mayor comprensión de los mecanismos de protección y de la inducción de post-inmunización en la gastritis observada en el modelo murino (Jagusztyn-Krynicka y Godlewska, 2008). 16