Instituto Nacional de Semillas Serie de Divulgación Técnica. Descripción de variedades de trigo

Transcripción

1 Instituto Nacional de Semillas Serie de Divulgación Técnica Descripción de variedades de trigo

2 Instituto Nacional de Semillas Título Descripción de variedades de trigo Equipo de trabajo Evaluación y Registro de Cultivares Autora: Ing. Agr. (M.Sc.) Virginia Olivieri volivieri@inase.org.uy Ing. Agr. (M.Sc.) Gerardo Camps Gerente gcamps@inase.org.uy Ing. Agr. Federico Boschi Ing. Agr. (M.Sc.) Mariela Ibarra Ing. Agr. Susana Cassou Ing. Agr. Sebastián Moure Ing. Agr. Elisa Sotelo Unidad de Apoyo Téc. Agr. Jorge Mendoza Sr. Jorge Bo Sr. Daniel Fabró Sr. Ricardo Andrada Gtor. Agr. Raúl Armand Ugón Diseño: Unidad de Comunicación Mag. María Inés Fornos Serie de Divulgación Técnica ISSN: INASE, 2011 D.L.: Se autoriza la reproducción de esta publicación citando la fuente.

3 Instituto Nacional de Semillas Tabla de contenidos Introducción 3 Consideraciones generales 4 Características evaluadas 4 Porte de la planta 5 Pigmentación antociánica del coleoptile 5 Largo del coleoptile 5 Color de hoja 6 Pigmentación antociánica 6 de las aurículas de la hoja bandera Página Frecuencia de hoja bandera recurvada 6 Glauescencias 6 Largo y ancho de hoja bandera 6 Ciclo (días a 50% de espigazón) 7 Altura de planta 7 Sección del tallo 7 Forma de la espiga vista de perfil 7 Color de la espiga 7 Largo de la espiga 8 Densidad de la espiga 8 Presencia de aristas 9 Longitud del pico de la gluma 9 Forma del pico de la gluma 10 Forma del hombro de la gluma 10 Ancho del hombro de la gluma 10 Forma del pico de la lemma 11 Forma del grano 11 Largo y ancho del grano 11 Estrechamiento del grano hacia el ápice 11 Profundidad del surco ventral 12 Forma del germen 12 Longitud de los pelos del cepillo 12 Peso de mil semillas 12 Coloración al fenol de los granos 12 Materiales y métodos 13 Resultados 15 Fichas descriptivas 17 ACA ATLAX 20 BAGUETTE 9 22 BAGUETTE Página BAGUETTE BAGUETTE BAGUETTE PREMIUM BAGUETTE PREMIUM BIOINTA BIOINTA BIOINTA BIOINTA BIOINTA BUCK CHARRÚA 44 BUCK GUAPO 46 CALPROSE TROPERO 48 CENTAURO 50 FUNDACEP CRISTALINO 52 INIA MIRLO 54 KLEIN CAPRICORNIO 56 KLEIN CASTOR 58 KLEIN CHAJÁ 60 KLEIN FLECHA 62 KLEIN GAVIOTA 64 KLEIN MARTILLO 66 KLEIN PROTEO 68 KLEIN TAURO 70 LE 2210 (INIA TIJERETA) 72 LE 2245 (INIA GORRIÓN) 74 LE 2249 (INIA CHURRINCHE) 76 LE 2271 (INIA TORCAZA) 78 LE 2303 (INIA TERO) 80 LE 2310 (INIA CARANCHO) 82 LE 2313 (INIA GARZA) 84 LE 2325 (INIA CHIMANGO) 86 LE 2331 (INIA DON ALBERTO) 88 LE 2332 (INIA MADRUGADOR) 90 LE 2333 (INIA CARPINTERO) 92 LE 2354 (GÉNESIS 2354) 94 NOGAL 96 ONIX 98 PROINTA GAUCHO 100 PROINTA PUNTAL 102 SAFIRA 104 2

4 Introducción El Instituto Nacional de Semillas es el organismo responsable del Registro de Propiedad de Cultivares. Uruguay se encuentra adherido y se rige por el convenio de la Unión Internacional para la Protección de las Obtenciones Vegetales (UPOV). De acuerdo con el Convenio de la UPOV, sólo puede concederse la protección respecto de una nueva variedad vegetal cuando la evaluación de la solicitud ha mostrado que satisface los requisitos establecidos por el Convenio de la UPOV. Entre estos requisitos la variedad debe ser distinta (D) de cualquier otra variedad notoriamente conocida en el momento de la presentación de la solicitud, y suficientemente homogénea (H) y estable (E) (en siglas: DHE). El examen DHE es, fundamentalmente, un ensayo en cultivo. Realizar un ensayo en cultivo consiste en cultivar la variedad de un modo que asegure la expresión de las características pertinentes de la variedad. Por lo que la inclusión de una determinada variedad en el registro requiere la realización de trabajos previos, complejos y especializados, mediante los cuales se realiza una descripción de las distintas variedades, utilizando caracteres fenotípicos para identificar cada genotipo. UPOV ha establecido Directrices de Examen específicas para especies. Estas directrices constituyen un método reconocido y armonizado para realizar el examen de nuevas variedades y son la base de los ensayos DHE. Triticum aestivum L. es una gramínea de ciclo invernal de espiga dística solitaria en el ápice de la caña, espiguillas sésiles con dos glumas comprimidas lateralmente y situadas contra el raquis (Rosengurtt et al., 1995). En este ensayo se sembraron 39 cultivares de trigo de los 42 que se encuentran inscriptos en el Registro Nacional de Cultivares (INASE, 2010). Muy pocas veces se presenta la oportunidad de comparar más de 40 variedades de amplia difusión sembradas en las mismas condiciones. Un ensayo de estas características permite apreciar las diferencias entre cultivares en el campo y es de gran utilidad para ver la variabilidad de las características de los cultivares que se siembran en el país. El ensayo incluye además, materiales que no se encuentran inscriptos en el Registro Nacional (ej. LE 2303, LE 2310, LE 2271) los cuales se usan como testigos de variedades conocidas. Esta publicación será de gran utilidad para técnicos y productores implicados en la producción, control y comercio de semillas. Evaluación y Registro de Cultivares 3

5 Instituto Nacional de Semillas Consideraciones generales El material vegetal que suministra a INASE el obtentor (o su representante) para el examen DHE, denominado muestra de referencia, deberá ser representativo de la variedad candidata. Una variedad es un conjunto de plantas que puede definirse por la expresión de los caracteres resultantes de un cierto genotipo o de una cierta combinación de genotipos, y que puede distinguirse de cualquier otro conjunto de plantas por la expresión de uno de dichos caracteres por lo menos (UPOV, 2002). Características evaluadas Las directrices de ejecución del examen DHE de trigo (UPOV, 1994) incluyen 26 características, de las cuales 12 son consideradas muy importantes para diferenciar entre cultivares (caracteres asterisco, UPOV, 1994). Se trata de caracteres que deberán emplearse para todas las variedades en cada período de siembra, y que deberían estar presentes siempre en la descripción de la variedad, a menos que el nivel de expresión de un carácter precedente o las condiciones ambientales regionales lo impidan. Mientras el cultivo está en el campo son ocho las características que se evalúan. El resto de los caracteres se registran en espigas maduras. Para esto se cosechan 50 espigas representativas de cada parcela para posteriormente describirlas en el laboratorio. Se registraron adicionalmente características que no se encuentran en el protocolo de UPOV pero son muy útiles para complementar las descripciones varietales, tales como ancho y largo de hoja bandera, largo y ancho del grano, forma del grano, largo de los pelos del cepillo en el grano (DEFRA, 2010). A continuación se detallan las características que fueron evaluadas así como el momento en el cual se registran. 4

6 Porte de la planta Para evaluar este carácter se observa el ángulo que forman las hojas y los tallos con un eje vertical imaginario (Figura 1). El estado fenológico óptimo para evaluar porte de las plantas es desde mitad a final de macollaje. Figura 1. Escala de evaluación de porte Erecto Postrado Erecto Semierecto semipostrado Postrado Pigmentación antociánica del coleoptile Se sembraron los cultivares en cámaras de crecimiento siguiendo el procedimiento para la determinación de la pigmentación antociánica del coleoptile (UPOV, 1994). Figura 2. Pigmentación antociánica del coleoptile: ausencia (a la izquierda), fuerte (a la derecha) Largo del coleoptile Se midió con regla milimetrada en 10 de los coleoptiles en los que se observó el color. Evaluación y Registro de Cultivares 5

7 Instituto Nacional de Semillas Color de hoja Los cultivares pueden presentar diferente color de hoja, el color varía de verde oscuro a amarillo verdoso. Este carácter se registra durante el macollaje. Pigmentación antociánica de las aurículas de la hoja bandera Debido a la ausencia o presencia de antocianina en las aurículas estas pueden o no estar coloreadas. La expresión de este carácter varía desde nula a muy fuerte. El momento óptimo para registrar la pigmentación antociánica es al iniciarse la emergencia de la espiga. En la figura 3 se observa a la derecha aurículas pigmentadas con las aristas emergiendo. Mientras que a la izquierda se observan aurículas sin pigmentación antociánica con la espiga emergida al 50%. Figura 3. Pigmentación antociánica de las aurículas: a la izquierda aurículas pigmentadas, a la derecha aurículas con nula pigmentación. Frecuencia de hoja bandera recurvada Esta característica se observa desde el momento en que se abre la vaina de la hoja bandera hasta que está visible la primera espiguilla. La característica varía desde todas las hojas banderas rectas, pasando por 25% recurvada, 50%, 75% o todas las hojas banderas recurvadas. Glauescencias Se denomina glauescencia a la serosidad que recubre ciertas partes de las plantas como espigas, nudo de la espiga o vaina de la hoja bandera. Al pasar los dedos la serosidad se pierde. La glauescencia de la hoja bandera (DEFRA, 2010) se registra a comienzos de espigazón. Mientras que la glauescencia de la vaina de la hoja bandera, del pedúnculo de la espiga y de la espiga se registran en antesis. La expresión varía desde nula a muy fuerte. Largo y ancho de hoja bandera Estas características se observan en comienzos de espigazón en forma general en la parcela. La expresión varía desde muy angosta a muy ancha y desde muy corta a muy larga para ancho y largo, respectivamente. 6

8 Ciclo (días a 50% de espigazón) Se define ciclo como los días desde emergencia del cultivo hasta que el 50% de la parcela está espigada. El ciclo del cultivo varía desde muy corto a muy largo, además se puede expresar en días desde emergencia a espigazón. Este es un carácter muy útil en la descripción de variedades. Adicionalmente se registró días a 50% de antesis, se presenta el dato de cada cultivar, así como también los días desde emergencia a madurez fisiológica (Hanft y Wych, 1982). Altura de la planta La altura de planta se mide a madurez en la parcela desde el suelo hasta el fin de la espiga (aristas incluídas). Se realizaron dos medidas de altura en cada repetición. Sección del tallo En madurez se hace un corte entre el nudo de la espiga y el anterior. La sección del tallo puede variar entre: Hueca Media Maciza Forma de la espiga vista de perfil Piramidal Bordes Semimazuda Mazuda Fusiforme Paralelos Color de la espiga Se observa en madurez en el conjunto de la parcela no en espigas individuales. Evaluación y Registro de Cultivares 7

9 Instituto Nacional de Semillas Largo de la espiga Esta característica puede registrarse de forma visual, variando desde muy corta a muy larga. En este trabajo se midió con regla milimetrada en 10 espigas de cada parcela. En la figura siguiente se observan espigas de diferentes cultivares que varían en su longitud. Figura 4. Espigas de distintas longitudes. BIOINTA 3000 BAGUETTE 9 Densidad de la espiga LE 2325 La observación visual es una forma de evaluar densidad de la espiga, los niveles varían de muy laxa a muy densa. Por otro lado, existe un método cuantitativo que es mucho más engorroso ya que requiere medir el largo de espiga y contar las espiguillas. En este trabajo se contaron las espiguillas de 10 espigas de cada parcela (2 repeticiones por cultivar). Para el cálculo de la densidad se utilizó la fórmula propuesta en el Manual de Identificación de Cereales (1989). Densidad = ( n-1)*10 / largo de espiga (cm). 8 BIOINTA 1000

10 Presencia de aristas Se observa la presencia o ausencia de aristas, se determina en espigas maduras (figura 5). Figura 5. Presencia de aristas, espigas con aristas (izquierda) y espigas sin aristas (derecha). BAGUETTE PREMIUM 11 BAGUETTE PREMIUM 13 Todas las características de gluma se observan en la gluma inferior de una espiguilla del tercio medio de la espiga. En la figura 6 se observan los componentes de una espiguilla y de una gluma. Figura 6. a) Vista transversal de una espiguilla de trigo b) vista de una gluma c) espiguillas del medio de la espiga A B C Longitud del pico de la gluma Se observa el largo del pico de la gluma (de una espiguilla ubicada en el tercio medio de la espiga). La expresión de esta característica se evalúa de forma visual pudiendo variar desde muy corto, corto, medio, largo a muy largo. Adicionalmente, en este trabajo el pico de la gluma se midió con regla milimetrada en 10 glumas de cada parcela. Evaluación y Registro de Cultivares 9

11 Instituto Nacional de Semillas Figura 7. Pico de la gluma de diferentes longitudes. Muy corto Corto Medio Largo Muy largo BAGUETTE PREMIUM 13 CALPROSE TROPERO LE 2325 KLEIN GAVIOTA LE 2210 Forma del pico de la gluma Esta característica presenta las siguientes clases: Recto Ligeramente Medianamente Fuertemente Acordado curvado curvado curvado Forma del hombro de la gluma La forma del hombro de la gluma presenta las siguientes categorías: Inclinado Ligeramente Recto Elevado Muy elevado con inclinado segundo pico Ancho del hombro de la gluma El ancho del hombro de la gluma varía entre las siguientes: Ausente o Estrecho Medio Ancho Muy ancho muy estrecho 10

12 En la figura 8 se observan diferentes expresiones de la forma del hombro de la gluma. Figura 8. Forma del hombro de la gluma. Ligeramente inclinado BAGUETTE 17 Forma del pico de la lemma Recto BIOINTA 1002 Elevado Elevado con segundo pico KLEIN CHAJÁ SAFIRA La forma del pico de la lemma varía entre las siguientes expresiones: Recto Ligeramente curvado Medianamente curvado Fuertemente curvado Acordado Forma del grano La forma del grano puede ser oval o elongada. Largo y ancho del grano El largo del grano puede variar desde muy corto a muy largo, mientras que el ancho varía de muy estrecho a muy ancho. Estrechamiento del grano hacia el ápice La variación de esta característica va desde ausente o muy débil hasta muy pronunciado. Evaluación y Registro de Cultivares 11

13 Instituto Nacional de Semillas Profundidad del surco ventral La profundidad del surco ventral en el grano puede ser superficial, medio o profundo. Forma del germen La forma del germen o embrión puede ser elongado u ovalado. Longitud de los pelos del cepillo Los pelos del cepillo presentes en el ápice del grano pueden ser cortos, medios o muy largos. Peso de mil semillas Mediante la trilla manual de las espigas cosechadas se obtuvieron los granos que posteriormente se utilizaron para obtener el peso de mil semillas. Se utilizó la metodología ISTA (2010), se pesaron 4 repeticiones de 100 granos de cada parcela (800 semillas por cultivar). Coloración al Fenol de los granos Para la evaluación de esta característica se aplicó la metodología propuesta por TG/3/11 (UPOV, 1994), la gama de coloración al fenol varía desde nula o muy clara hasta muy oscura. Figura 9. Diferentes intensidades de reacción al fenol. LE 2210 BAGUETTE 17 FUNDACEP CRISTALINO 12

14 Materiales y métodos Mientras el cultivo está en el campo, son ocho las características que se evalúan. El resto se registran en espigas maduras. Para esto se cosechan 50 espigas representativas de cada parcela para posteriormente describir 10 de ellas en el laboratorio, el resto se trilla manualmente para analizar los granos. En el cuadro 1 se observa la lista de cultivares sembrados así como también el obtentor y la empresa representante en Uruguay. Este ensayo incluyó 44 variedades de trigo sembradas en dos repeticiones. La siembra fue en Pando, el 3 de mayo de 2010, se hizo en siembra directa sobre un rastrojo de moha. Previamente a la siembra se trató la semilla con Carbendazim + Tiram e Imidacloprid + Tebuconazole (200 3 cm cada 100 kg semilla de cada uno). La unidad experimental consistió en parcelas de 6 surcos espaciados a 0,16 m, el largo de parcela fue de 6 m. La densidad utilizada fue de semillas viables m. Al estado de dos hojas se contaron las plantas por -1 parcela, se establecieron en promedio 24 plantas m. En el cuadro 2 se presenta el manejo del ensayo realizado hasta el momento. Los materiales se encuentran agrupados por época de siembra (UPOV, 1994). La evaluación de las características se hace de acuerdo a las directrices de UPOV (1994). Cuadro 1. Cultivares sembrados en el ensayo DHE de trigo Cultivar Nombre Comercial Representante en Uruguay Obtentor Origen ACA 901 AGROACA ACA ARGENTINA ATLAX BARRACA ERRO OR M SEMENTES BRASIL BAGUETTE 17 NIDERA URUGUAYA S.A. SERASEM FRANCIA BAGUETTE 18 NIDERA URUGUAYA S.A. SERASEM FRANCIA BAGUETTE 19 NIDERA URUGUAYA S.A. CLAUDE BENOIST FRANCIA BAGUETTE 9 NIDERA URUGUAYA S.A. CLAUDE BENOIST FRANCIA BAGUETTE PREMIUM 11 NIDERA URUGUAYA S.A. CLAUDE BENOIST FRANCIA BAGUETTE PREMIUM 13 NIDERA URUGUAYA S.A. CLAUDE BENOIST FRANCIA BIOINTA 1000 ADP S.A. INTA ARGENTINA BIOINTA 1001 ADP S.A. INTA ARGENTINA BIOINTA 1002 ADP S.A. INTA ARGENTINA BIOINTA 1004 ADP S.A. INTA ARGENTINA BIOINTA 3000 ADP S.A. INTA ARGENTINA BUCK CHARRÚA BUCK SEMILLAS S.A. ARGENTINA BUCK GUAPO SYNGENTA URUGUAY S.A. BUCK SEMILLAS S.A. ARGENTINA CALPROSE TROPERO CALPROSE CALPROSE URUGUAY CENTAURO BARRACA ERRO BARRACA ERRO MÉXICO FUNDACEP CRISTALINO FADISOL FUNDACEP FECOTRIGO BRASIL INIA MIRLO INIA INIA URUGUAY KLEIN CAPRICORNIO AGAR CROSS URUGUAYA S.A. CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN CASTOR AGAR CROSS URUGUAYA S.A. CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN CHAJÁ AGAR CROSS URUGUAYA S.A. CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN FLECHA AGAR CROSS URUGUAYA S.A. CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN GAVIOTA AGAR CROSS URUGUAYA S.A. CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA Evaluación y Registro de Cultivares 13

15 Instituto Nacional de Semillas Cultivar Nombre Comercial Representante en Uruguay Obtentor Origen KLEIN MARTILLO AGAR CROSS CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN PROTEO AGAR CROSS CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA KLEIN TAURO AGAR CROSS CRIADERO KLEIN S.A. ARGENTINA LE 2210 INIA TIJERETA INIA INIA URUGUAY LE 2245 INIA GORRIÓN INIA INIA URUGUAY LE 2249 INIA CHURRINCHE INIA INIA URUGUAY LE 2271 INIA TORCAZA INIA INIA URUGUAY LE 2303 INIA TERO INIA INIA URUGUAY LE 2310 INIA CARANCHO INIA INIA URUGUAY LE 2313 INIA GARZA INIA INIA URUGUAY LE 2325 INIA CHIMANGO INIA INIA URUGUAY LE 2331 INIA DON ALBERTO INIA INIA URUGUAY LE 2332 INIA MADRUGADOR INIA INIA URUGUAY LE 2333 INIA CARPINTERO INIA INIA URUGUAY LE 2354 GENESIS 2354 INIA INIA URUGUAY NOGAL ADP FLORIMOND DEPSPREZ FRANCIA ONIX CALPROSE OR M SEMENTES BRASIL PROINTA GUACHO INTA ARGENTINA PROINTA PUNTAL INTA ARGENTINA SAFIRA CALPROSE OR M SEMENTES BRASIL Cuadro 2. Manejo del ensayo D.H.E. de trigo Momento Producto Dosis Fertilización Siembra urea 50 kg N ha -1 Herbicidas 31-May urea 50 kg N ha Jul urea 60 kg N ha Jun Iodosulforón metil sodio + Clorsulfurón 0.1 l ha g ha -1 Fungicidas 2 de agosto Pyraclostrobin + Epoxiconazole 1 l ha -1 En relación al análisis estadístico, para el caso de características cuantitativas este se realizó utilizando el programa MINITAB (Pennsylvania State University, 2000). El modelo analizado fue: Yij=µ+bloque+t+? E Yij: variable respuesta µ: media general t: tratamientos (cultivares) bloque: repeticiones? E: error experimental Las hipótesis planteadas fueron: Ho: No existen diferencias para las variables entre los cultivares Ha: Existen diferencias para las variables entre los cultivares 14

16 La verificación de los supuestos (normalidad de los residuos y homogeneidad de la varianza fueron hechos con el programa MINITAB (Pennsylvania State University, 2000). Cuando se detectó diferencias entre tratamientos se realizó test de rangos múltiples MDS (mínima diferencia significativa) para detectar diferencias entre medias, utilizando el programa INFOSTAT (Universidad Nacional de Córdoba, 2004). La variable largo del pico de la gluma debió ser transformada (transformación de rangos) ya que no cumplía con el supuesto de normalidad de distribución de los residuos, posteriormente de esta transformación los residuos cumplieron adecuadamente los supuestos. Resultados En el cuadro 3 se presenta el valor para cada cultivar de las variables cuantitativas medidas. Cuadro 3. Variables cuantitativas medidas en el ensayo según cultivar. Variedad Espiga Nº espiguillas largo cm Ciclo a espigazón Planta a madurez Pico de la gluma días Altura cm Longitud mm Peso mil granos g pmg ACA 901 ATLAX BAGUETTE 17 BAGUETTE 18 BAGUETTE 19 BAGUETTE 9 BAGUETTE PREMIUM 11 BAGUETTE PREMIUM 13 BIOINTA 1000 BIOINTA 1001 BIOINTA 1002 BIOINTA 1004 BIOINTA 3000 BUCK CHARRÚA BUCK GUAPO CALPROSE TROPERO CENTAURO FUNDACEP CRISTALINO INIA MIRLO KLEIN CAPRICORNIO KLEIN CASTOR KLEIN CHAJÁ KLEIN FLECHA KLEIN GAVIOTA KLEIN MARTILLO KLEIN PROTEO KLEIN TAURO LE , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,06 Evaluación y Registro de Cultivares 15

17 Instituto Nacional de Semillas Variedad Espiga Nº espiguillas largo cm Ciclo a espigazón Planta a madurez Pico de la gluma días Altura cm Longitud mm Peso mil granos g pmg LE 2245 LE 2249 LE 2271 LE 2303 LE 2310 LE 2313 LE 2325 LE 2331 LE 2332 LE 2333 LE 2354 NOGAL ONIX PROINTA GAUCHO PROINTA PUNTAL SAFIRA Significancia CV (%) MDS (p 0,05) R , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,60 *** *** *** *** *** *** 4,1 4,6 1,5 3,2 14 2,9 2 0, , Las características cuantitativas medidas fueron: número de espiguillas por espiga, largo de espiga (cm), días desde emergencia a espigazón (ciclo), altura de planta a la madurez (cm), longitud del pico de la gluma (mm) y peso de mil granos (g). Hubo diferencia significativa entre los cultivares para todas las variables registradas. Posteriormente el análisis de comparación múltiple permitió identificar los cultivares que fueron diferentes entre sí. A modo de ejemplo, en la variable altura la mínima diferencia significativa (MDS, p=0,05) fue de 7 cm, si se compara la altura a madurez de los cultivares Onix y Safira, se observa que este último fue 7 cm más alto, lo que indica que para las condiciones de este experimento, Safira fue significativamente más alto que Onix. En las siguientes páginas se presenta para cada variedad un resumen de las principales características observadas. 16