ScanGel Anti-IgG Tarjetas Tarjetas
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- Mario Fuentes Romero
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1 ScanGel Anti-IgG Tarjetas Tarjetas GELES FORMULADOS CON UNA ANTIGLOBULINA ANTI-IgG POLICLONAL Screening de Ac irregulares, pruebas cruzadas, fenotipos IVD Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la documentación referente a la producción y al control de cada lote. 21
2 I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro. Designada para el estudio (detección e identificación) de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios, pruebas cruzadas y para el fenotipaje eritrocitario, el test combina los principios de aglutinación y filtración en gel. La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo antiglobulina. La suspensión de glóbulos rojos y el suero o el plasma se depositan en el pocillo de los microtubos que se centrifugan después de un periodo de incubación. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción La capacidad del gel para separar los glóbulos rojos del suero o del plasma elimina la fase de lavado obligatoria en las técnicas convencionales. II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS Los microtubos de la tarjeta ScanGel Anti-IgG contienen un gel impregnado con un reactivo antiglobulina anti-igg. Esta fracción anti-igg se prepara con sueros de cabras hiperinmunizadas. Este reactivo contiene azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la etiqueta de la caja. III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en la caja. Los tajetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15 C a +25 C. Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de calor, en un local con escasas variaciones de temperatura y humedad. IV - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguiente : No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la lengüeta de sellado muestra signos de deterioro o está parcialente retirada. 22
3 Es indispensable tomar las precauciones necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente en las etapas de distribución. Utilizar una punta de pipeta para cada muestra, cada reactivo y cada vial de celulas. Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de los otros equipos. Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los reactivos y de las muestras. No pipetear directamente con la boca. Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies manchadas con lejía de 12º Cl diluida al 10% y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en un contenedor especial para residuos contaminados. Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados una vez descontaminados. Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición. V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con anticoagulante (EDTA, CPD). Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 C y +8 C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. En ningún caso debe observarse hemólisis. No calentar las muestras. VI - TÉCNICAS Material suministrado Tarjetas ScanGel Anti-IgG Material necesario pero no suministrado ScanLiss : medio de suspensión de los glóbulos rojos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos IH QC 4 x 6 ml Centrífuga : ScanGel Centrifuge Incubador : ScanGel Incubator Pipetas automáticas o semiautomáticas Puntas de pipetas Tubos de un solo uso Contenedor especial para residuos con riesgo biológico Lejía Guantes de látex 23
4 Papel absorbente Gafas de protección 1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios Controles Se recomienda efectuar en paralelo un autocontrol para cada prueba (suero o plasma y glóbulos rojos del paciente). Controles positivo (suero conocido que contenga al menos un anticuerpo que se detecte con prueba indirecta de antiglobulina) y negativo (suero conocido que no contenga ningún anticuerpo), IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Reactivos necesarios pero no suministrados EryScan, ScanCell, ScanPanel : glóbulos rojos listos para usar, para la detección y la identificación de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios (prueba indirecta de antiglobulina) EryScan 2 x 10 ml ScanCell 3 x 10 ml ScanPanel 10 x 3 ml Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe volver a centrifugar a 1500 g durante 10 minutos. a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos cuando éstos no están listos para usar Autocontrol : Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 µl de glóbulos rojos de la muestra (autocontrol). Mezclar. b) Técnica 1. Identificar cada tarjeta o la parte de la tarjeta (según el número de glóbulos rojos test utilizados para la muestra) con el nombre o el número de muestra correspondiente; en cada microtubo, identificar las celulas que se distribuirá. Retirar completamente la lengüeta de aluminio de las tarjetas. Resuspender los hematíes anted de usar. 24
5 2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de celulas listos para usar Eryscan o ScanCell o ScanPanel o de la suspensión de glóbulos rojos preparada en 1- a) en el pocillo de los microtubos apropiados. 3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero o de plasma en el pocillo de los microtubos correspondiente a la muestra ensayada. En ningún caso el periodo de tiempo entre la distribución de los glóbulos rojos y la del plasma o suero debe exceder los 10 minutos. 4. Incubar 15 minutos a +37 C en el ScanGel Incubator. 5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centriguge. 6. Leer las reacciones. 2. Pruebas cruzadas Controles Control positivo (suero conocido que contenga al menos un anticuerpo que se detecte con prueba indirecta de antiglobulina) y negativo (suero conocido que no contenga ningún anticuerpo), IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe volver a centrifugar a 1500 g durante 10 minutos. a) Preparación de la (de las) suspensión(ones) de glóbulos rojos (donante(s)) Para cada donante : Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 µl del precipitado globular (glóbulos rojos del donante). Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. b) Técnica 1. Identificar cada tarjeta o la parte de la tarjeta con el nombre o el número del receptor y el número del o de los donantes correspondientes. Retirar completamente la lengüeta de aluminio. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los microtubos adecuados. 25
6 3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero o de plasma del receptor en el pocillo de los microtubos correspondientes. En ningún caso el periodo de tiempo entre la distribución de la suspensión de glóbulos rojos y la del suero o plasma debe exceder los 10 minutos. 4. Incubar 15 minutos a +37 C en el ScanGel Incubator. 5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrifuge. 6. Leer las reacciones. 3. Fenotipaje eritrocitario Controles Controles positivo y negativo : glóbulos rojos conocidos positivos y negativos para el antígeno, ensayados simultáneamente con los glóbulos rojos de la muestra. IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos Control de la muestra (únicamente glóbulos rojos de la muestra). Reactivos necesario pero no suministrado Reactivos Bio-Rad correspondiente al antígeno estudiado. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos Para cada muestra : Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 µl del precipitado globular de la muestra. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. b) Técnica 1. Para cada muestra, identificar un microtubo con el nombre o el número de muestra correspondiente e identificando el suero-test utilizado y un microtubo con el nombre o el número de muestra (control muestra). Retirar completamente la lengüeta de aluminio. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los microtubos adecuados. 26
7 3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero-test en el pocillo de los microtubos correspondientes (excepto en los microtubos que sirven de control de la muestra). En ningún caso el periodo de tiempo entre la distribución de los glóbulos rojos y la del suero-test debe exceder los 10 minutos. 4. Incubar 15 minutos a +37 C en el ScanGel Incubator. 5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrifuge. 6. Leer las reacciones. VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La presencia de aglutinados (en la superficie o dispersos en el gel) o de hemólisis en un microtubo corresponde a un resultado positivo. Un sedimento de glóbulos rojos y la ausencia de hemólisis en el fondo del microtubo corresponde a un resultado negativo. Los resultados sólo son válidos si los controles dan los resultados esperados. 1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios Un resultado negativo (ausencia de aglutinación y de hemólisis) en todos los microtubos utilizados significa que el suero o el plasma ensayado no contiene anticuerpos, correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test, que se detecten con la técnica utilizada. Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) en uno de los microtubos utilizados prueba, por el contrario, la presencia de uno o varios anticuerpos en el suero o en el plasma. Entonces se debe realizar la identificación de ese o esos anticuerpos. Un resultado positivo en el microtubo autocontrol puede indicar la presencia de auto-anticuerpos. Si además del autocontrol, al menos uno de los glóbulos rojos test está aglutinado, debe sospecharse de una mezcla auto-anticuerpos /alo-anticuerpos. Sólo pueden detectarse los anticuerpos correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test. En el marco de una identificación, el análisis comparado entre las reacciones positivas y las reacciones negativas observadas con cada uno de los glóbulos rojos test del panel utilizado permite caracterizar, con la ficha de análisis adjunta al panel, la o las especificidad(es) de los anticuerpos presentes en el suero (o plasma) ensayado. 2. Pruebas cruzadas Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) muestra la existencia de una incompatibilidad entre el suero o el plasma del receptor y los glóbulos rojos del donante. 27
8 3. Fenotipaje eritrocitario Ver el prospecto del suero-test utilizado. Los resultados únicamente son válidos si el control de la muestra es negativo. VIII - COMPORTAMIENTO 1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios La evaluación de las especificaciones realizada con 1086 pacientes ha demostrado una reacción equilibrada entre sensibilidad y especificidad. Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de inmunoadherencia o filtración de gel. La especificidad sobre un muestreo de pacientes sin seleccionar es del 99,6%. La aplicación hace posible la detección de anti-rh1(d) humano en una concentración igual a 20 ng/ml. Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas buenas especificaciones tanto intra como interensayo. 2. Pruebas cruzadas La evaluación de las especificaciones ha dado resultados concordantes con la técnica de filtración de gel utilizada en paralelo. Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas buenas especificaciones tanto intra como interensayo. 3. Fenotipaje eritrocitario Ver el prospecto del suero-test utilizado. LÍMITES Los resultados anormales pueden ser consecuencia de : una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los glóbulos rojos o del material. una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una reacción cruzada. el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al recomendado. una preparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada. una resuspensión incompleta de los glóbulos rojos. una hemólisis de las muestras o de los glóbulos rojos problema. la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los residuos de fibrina). contaminación entre microtubos. uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente. 28
9 IX - LITERATURE 1. Löw B., Messeter L. : Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T., Kurashina S., Nakao M. : A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Engelfriet C.P., Overbeeke M.A.M., Voak D. : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2: Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Bromilov I.M., Adams K.E., Hope J., Eggington J.A. and Duguid J.K.M. : Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph. : Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C., Quillet P., Baufine-Ducroq H. : Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Burin des Rosiers N., Nasr O. : Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69: Issitt PD. : Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.
10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code:
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