La importancia del virus PRRS
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- César Lara Díaz
- hace 7 años
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1 La importancia del virus PRRS Es la enfermedad más costosa de la porcicultura mundial de todos los 8empos por encima de enfermedades como: Aujeszky, Fiebre porcina clásica y PED.
2 Impacto de PRRS en la producción Incremento en la mortalidad todas las etapas. Aumento en el número de cerdos de desecho. Disminución de la ganancia diaria. Aumento en la conversión. Problemas reproduc8vos.
3 Costos de la enfermedad Aprox 15 MIL MILLONES de pesos mexicanos 1 Holtkamp DJ, Kliebenstein JB, Neumann EJ, et al. Assessment of the economic impact of porcine reproduc8ve and respiratory syndrome virus on United States pork producers. J Swine Health Prod 2013;21(2):72-84.
4 Aprox 15 MIL MILLONES de pesos mexicanos
5 Desarrollo de nuevas líneas celulares permisivas a PRRSV y sus implicaciones. Por PhD MVZ Paloma Suárez Modificada por: MVZ, MC Raúl González M Gerente Técnico Unidad de Negocios Porcinos
6 Virus PRRS Virus ARN, Arterivirus, envuelto de cadena sencilla. Agente causal del Sindrome Respiratorio y Reproduc8vo del cerdo (PRRS). 7 ORF s aunque hay reportes de nuevos ORF s sgp3 5 UTR 1a 1b 2a 2b(E) UTR GP2a/GP3/ GP4 GP5/ M 2b(E) N RNA Meulenberg, J.J.M PRRSV, the virus. Vet Res 31:
7 PRRS
8 Clasificación del virus PRRS* Tipo 1 (Europeo) Tipo 2 (Americano) Serologicamente y an8genicamente dis8ntos Meulenberg, J.J.M PRRSV, the virus. Vet Res 31: * Hay reportes de nuevos 8pos
9 Mul8plicación del virus PRRS Virus por primera vez aislado en 1991 (Europa Lelystad Virus) y 1992 (USA VR- 2332). El aislamiento se realizó, inicialmente, en Macrófagos Alveolares Porcinos (MAPs), ya que no era posible crecerlo en líneas celulares establecidas porque: Necesidad de sacrificar lechones (los macrófagos no se mul8plican) Animales libres de la enfermedad. No uniformidad en el número de células obtenidas; diferencias en ktulos víricos Contaminaciones frecuentes (flora del cerdo) Uso en la producción comercial de vacunas limitado (caro y díficill). Sólo vacunas muertas.
10 Macrófagos Alveolares Porcinos Fuente; Cinta Prieto, Universidad de Madrid
11 En 1992, aparece la primera línea celular que permika crecer el virus Línea Celular conunua (CL 2621)
12 Caracterís8cas de la CL 2621 Obtenida a par8r de un clon suscep8ble de la línea MA- 104, una línea celular de riñón de mono verde africano. Posteriormente se produjeron nuevos clones a par8r de misma línea celular dando origen a la línea MARC- 145 En la actualidad, el crecimiento del virus PRRS en células de simio, está protegido por patente en algunos países. Permi8do para uso en inves8gación Uso restringido para la producción de vacunas
13 MARC- 145 Fuente; Cinta Prieto, Universidad de Madrid
14 Desaoos presentes en PRRSV Alta tasa de mutación y variación gené8ca La inmunidad natural es limitada frente a cepas heterólogas. Mecanismos de evasion del sistema inmune El virus induce la producción de Interleukina 10 una citoquina an8inflamatoria muy potente. La producción de Interferon- α está suprimida en algunas cepas del virus. Producción tardía de interferon- γ Producción tardía de an8cuerpos neutralizantes
15 Por qué Pfizer inves8go en PRRS? Pfizer era una compañía líder en CRP. (Ahora es lider). PRRS es una enfermedad de mucho interes: Distribución mundial de la enfermedad (aunque dos 8pos muy diferenciados). Múl8ples retos; enorme variabilidad gené8ca y an8génica. Con incremento en virulencia en varias regiones. Elevado impacto económico.
16 Por qué Pfizer/Zoe8s inves8go en PRRS? Grupo de inves8gación en PRRS con más de 20 años de experiencia propia y/o con colaboraciones. Avances generados en el conocimiento gené8co del virus y de sus proteínas estructurales: Primer clon infeccioso de ADN complementario de un virus PRRS 8po 2. Primer uso del virus PRRS como vector. Descubrimiento del receptor CD163 de PRRS.
17 PRRSV y Pfizer
18 Qué es el receptor CD163? Se realizaron librerías de cadn a par8r de MAP que se seleccionaron por su habilidad de hacer que células no de simio fueran suscep8bles al PRRSV. Se iden8ficó el CD163 como el receptor primario frente al virus. La transfección transitoria del cdna fue necesaria y suficiente para hacer que diferentes líneas celulares fueran permisivas a PRRSV. Posteriormente se crearon líneas celulares que de modo con8nuo expresaran el receptor CD163 en su superficie, permi8endo la replicación del virus. Dichas líneas proceden de diferentes especies, BHK21 (riñón de hamster), PK0809 (riñón porcino), y NLFK (riñón felino).
19 Implicaciones Futuras Evidentemente, la más cercana es la generación de nuevas vacunas
20 Diferente línea celular: diferentes propiedades La atenuación es un proceso evolu8vo El virus acumula mutaciones que le permiten crecer de forma eficiente en la línea celular Al mismo 8empo pierde propiedades que son ú8les para su mul8plicación en el cerdo Las presiones selec8vas son diferentes dependiendo de la línea celular u8lizada y por ello, los virus vivos atenuados en diferentes líneas celulares 8enen propiedades diferentes.
21 Desarrollo actual: Generación de nuevas vacunas a PRRS. Estas líneas celulares permi8rán el desarrollo de nuevas vacunas, tanto muertas como vivas modificadas frente a PRRS y potencialmente con nuevas propiedades. De hecho, ya hemos obtenido el virus 8po 2 Master para el desarrollo de una vacuna (ya disponible en US- Mex ) mediante el pase en células no de simio como de riñón porcino, CD163+ PK y células de riñón de hamster, CD163+ BHK que expresan el receptor CD163. Clonaje molecular (clon de ADN complementario infecuvo) MAPs Células PK- CD163 Células PK- CD163 Células BHK- CD163 Virus Master
22 Desarrollo actual A pesar de su paso en células BHK el virus de la vacuna de Zoe8s replica bien en MAPs y sus predecesores perdieron genes que inhiben la liberación de ciertos interferones por las células del hospedador.
23 Por lo tanto, hoy tenemos.. Una vacuna vs virus PRRS, creada a parur de un culuvo celular innovador que le confiere propiedades únicas como: El virus vacunal crecido en este cul9vo celular (BHK CD163 +) NO interfiere con la producción de interferon por lo tanto mejor respuesta vacunal.
24 Nuevas oportunidades en el futuro v El tener un clon infec8vo de ADN complementario y una línea suscep8ble permi8rá en un futuro el alterar el genoma del PRRSV y por lo tanto: El desarrollo de Vacunas DIVA. Iden8ficar factores de virulencia y construir virus gené8camente atenuados. U8lizar el virus del PRRS como vector adicionando genes que confieran protección frente a otras enfermedades del cerdo.
25 Muchas gracias
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