MANUAL DE PREPARACIÓN DE REACTIVOS

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1 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de MANUAL DE PREPARACIÓN DE REACTIVOS Elaboró: Autorizó: Puesto QUÍMICO JEFE DE LABORATORIO Firma F0-SGC-0 Rev.2

2 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 2 de. Propósito Establecer las técnicas y condiciones para la preparación de los reactivos utilizados en el laboratorio de Infectología, tanto en las pruebas de escrutinio, pruebas rápidas o para la identificación de ciertos microorganismos. 2. Alcance El presente documento aplica y es de cumplimiento obligatorio para el personal del Laboratorio de Infectología encargado de la preparación de los reactivos. 3. Responsabilidades Jefe del Laboratorio de Infectología.- Vigilar y supervisar que el presente manual se cumpla en el personal asignado para dicha tarea. Vigilar que se cuente con el personal, material y apoyo necesario para el cumplimiento de todos y cada uno de los procedimientos dentro del laboratorio de Infectología del Instituto Nacional de Rehabilitación. Químicos y técnicos encargados de la preparación de reactivos.- Aplicar la metodología aquí estipulada con carácter de obligatorio en la preparación de los reactivos. Químicos y Técnicos del Laboratorio de Infectología.- Apoyarse en todo el momento con el personal encargado de la preparación de los reactivos. F0-SGC-0 Rev.2

3 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 3 de. Preparación de reactivos.- TINCIÓN DE GRAM Cristal Violeta Solución A: Cristal Violeta Etanol 95% 2 Disolver el Cristal Violeta en etanol Solución B: 3 Oxalato de Amonio (COONH ) 2.H 2 O Disolver el Oxalato de Amonio en. 5 Mezclar la Solución A con la solución B. Agitar la mezcla. Dejar reposar la mezcla por 2 horas. 7 Pasadas las 2 horas filtrar la mezcla en un frasco ámbar de L.. Nombre del reactivo Lugol Yodo Yoduro de potasio 2 En un mortero machacar el yodo hasta la obtención de gránulos pequeños. 3 Disolver el Yoduro de Potasio en. Agregar el Yodo y dejar en agitación por lo menos hora. 5 Dejar reposar la solución 2 horas. Pasadas las 2 horas filtrar en un frasco ámbar de L.. Nombre del reactivo 7. Fecha de Caducidad 20 g 200 ml 8 g 800 ml 3 g g Aforar a L F0-SGC-0 Rev.2

4 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de Alcohol-Acetona Etanol al 95% Acetona 2 Mezclar ambas soluciones y agitar por inversión. 3 Dispensar la mezcla en un frasco (no importa si es ámbar o claro).. Nombre del reactivo 00 ml 00 ml Safranina Solución Stock Solución Stock: Safranina Etanol 95% 2 Disolver la Safranina en etanol. 3 Dejar reposar la solución 2 horas Pasadas las 2 horas filtrar en frasco ámbar de L. Nombre del reactivo (Solución Stock) 5 Safranina Solución de trabajo Safranina solución stock 2 Mezclar por inversión y dispensar en frasco ámbar de L. Nombre del reactivo 3 25 g L 00 ml 900 ml F0-SGC-0 Rev.2

5 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 5 de 2.- TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Carbol-Fucsina Fucsina básica Etanol 95% Fenol cristales 2 Disolver lo más que se pueda la fucsina básica en alcohol. 3 En otro recipiente, disolver los cristales de fenol en agua destilada Una vez disueltas ambas soluciones mezclarlas y dejar reposar 2 horas 5 Pasada las 2 horas filtrar en un frasco ámbar de L. Nombre del reactivo 3 g 00 ml 50 g Aforar a L Alcohol-Ácido Ácido clorhídrico concentrado 30 ml Etanol 95% 970 ml Mezclar ambas soluciones, dispensando primero el Etanol al 95% y después ir agregando 2 poco a poco y cuidadosamente el ácido clorhídrico. Nota: NUNCA DAR DE BEBER AL ÁCIDO 3 Mezclar por inversión. Dispensar en frasco (No importa si es ámbar o claro). Nombre del reactivo 5 F0-SGC-0 Rev.2

6 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de Azul de Metileno Azul de Metileno 2 Disolver el Cristal Violeta en agua destilada 3 Dejar reposar la solución por 2 horas Pasadas las 2 horas, filtrar en un frasco ámbar. Nombre del reactivo Peróxido de Hidrógeno para Prueba de Catalasa Peróxido de hidrogeno al 30% 2 Mezclar ambas soluciones y agitar por inversión. 3 Dispensar en frasco ámbar de L. Nombre del reactivo.- Cloruro de Sodio al 0.85% (Solución Salina Isotónica) Cloruro de Sodio 2 Disolver el Cloruro de sodio en agua destilada 3 Dispensar la solución en frasco de L (No importa si es ámbar o claro). Nombre del reactivo 3 g L 00 ml 900 ml 8.5 g Aforar a L F0-SGC-0 Rev.2

7 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 7 de 5.- Reactivo de Kovac (Indol Rápido) p-dimetilaminobenzaldehído 5 g Ácido clorhídrico concentrado 25 ml Alcohol isoamílico (Se puede utilizar en lugar de isoamílico alcohol 75 ml amílico) 2 Disolver el p-aminobenzaldehído en alcohol isoamílico. Una vez disuelto se agregará poco a poco y con mucho cuidado el ácido clorhídrico 3 concentrado. Mezclar por inversión la solución por minuto. 5 Dispensar en frasco ámbar de 00 ml. Nombre del reactivo.- Reactivo de Erlich p-dimetilaminobenzadehído Etanol absoluto HCl concentrado 2 Disolver el p-dimetilaminobenzaldehído en etanol. 3 Una vez disuelto, ir agregando poco a poco y con mucho cuidado el HCl Mezclar la solución minuto. 5 Dispensar la solución en frasco ámbar.. Nombre del reactivo g 95 ml 20 ml 7.- Cloruro férrico en solución acuosa FeCl 3 al 0% Cloruro férrico Ácido clorhídrico concentrado 2 g 2.5 ml Aforar 00 ml 2 Disolver el cloruro férrico en agua. Una vez disuelto el cloruro férrico, ir agregando poco a poco y cuidadosamente el ácido 3 clorhídrico concentrado a F0-SGC-0 Rev.2

8 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 8 de Agitar minuto 5 Dispensar la solución en frasco ámbar de 00 ml. Nombre del reactivo Almacenar en refrigeración. 8.- Rojo de Metilo Rojo de metilo. Etanol 95%.. 2 Disolver el rojo de metilo en etanol. 3 Una vez disuelto agregar el agua destilada y agitar. Filtrar la solución. 5 Dispensar la solución en frasco ámbar.. Nombre del reactivo Almacenar en refrigeración. 9.- Voges Proskauer (reactivo de Barrit) -Naftol -Naftol Etanol absoluto 2 -naftol en etanol absoluto 3 Dispensar la solución en frasco ámbar de 00 ml. Nombre del reactivo Almacenar en refrigeración. 0. g 300 ml 200 ml 5 g 00 ml F0-SGC-0 Rev.2

9 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 9 de Hidróxido de potasio al 0% (KOH 0%) Hidróxido de Potasio 2 Disolver el hidróxido de potasio en agua. 3 Dispensar en frasco ámbar de 00 ml. Nombre del reactivo 0.- Metanol-Fenol 5% Fenol cristales Metanol absoluto 2 Disolver los cristales de Fenol en metanol 3 Dispensar la solución en frasco ámbar. Nombre del reactivo.- Hidróxido de sodio al 0 % (KOH 0%) Hidróxido de Potasio 2 Disolver el hidróxido de potasio en agua. 3 Dispensar en frasco ámbar de 00 ml. Nombre del reactivo 0 g 00 ml 50 g Aforar L 0 g 00 ml a F0-SGC-0 Rev.2

10 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 0 de 2.- Reactivo de Kovacs (Reactivo Oxidasa) Diclorhidrato de N, N, N, N-tetrametil-p-fenilendiamina (TPD) 2 Depositar una pizca de reactivo TPD en un tubo cónico de 5 ml 3 Disolver con agua destilada Envolver con aluminio o papel metálico el tubo para protegerlo de la luz.. Nombre del reactivo 5 Pizca 0 ml 3.- Azul de Lactofenol (Azul de algodón) Azul de Anilina 0.05 g 20 ml Fenol cristales 20 g Glicerol 0 ml Ácido láctico 20 ml 2 Disolver el colorante azul de anilina en agua destilada. 3 Dejar en reposo la solución por 2 horas. 3 Pasada las 2 horas, en un recipiente aparte disolver los cristales de fenol en ácido láctico. Una vez disuelto el fenol, agregar el glicerol y agitar. 5 Filtrar el azul de anilina en frasco ámbar. Agregar al frasco ámbar la solución de glicerol-fenol-ácido láctico.. Nombre del reactivo 7 F0-SGC-0 Rev.2

11 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de.- Tinción de Wright Colorante de Wright Wright polvo Metanol absoluto 2 Disolver el colorante de Wright e ir calentando para ayudar a que se disuelva. 3 Dejar en reposo la solución por semana. Pasada la semana, filtrar en frasco ámbar. Nombre del reactivo 5. g L Buffer de fosfatos ph 7 Fosfato de Sodio dibásico.02 g Fosfato de Potasio Monobásico 3.5 g Aforar a L 2 Disolver los fosfatos en 500 ml de agua destilada 3 Una vez disuelto medir el ph. Si se necesita ajustar ph con ácido clorhídrico (HCl) Una vez que se ha alcanzado el valor de ph deseado aforar con el resto del agua destilada a L. 5 Guardar en frasco ámbar de L. Nombre del reactivo F0-SGC-0 Rev.2

12 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 2 de 5.- Líquido de Turk Ácido acético glacial.. Azul de metileno %. 2 Agregar aproximadamente 0 ml de agua destilada al recipiente. 3 Agregar los 3 ml de ácido acético poco a poco y con mucho cuidado. Aforar a 00 ml con agua destilada. 5 Agregar -2 gotas de azul de metileno. Mezclar por inversión. 7 Vaciar en frasco ámbar.. Nombre del reactivo 8 3 ml Aforar a 00 ml -2 gotas.- Azul de Metileno al % Azul de metileno.. g Aforar a 00 ml 2 Disolver el azul de metileno en agua destilada. 3 Vaciar en frasco ámbar.. Nombre del reactivo 8 Almacenar en refrigeración. F0-SGC-0 Rev.2

13 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 3 de 7.- Azul de Bromotimol Azul de bromotimol.. 2 Disolver el azul de bromotimol en agua destilada. 3 Vaciar en frasco ámbar.. Nombre del reactivo 8 Almacenar en refrigeración. g Aforar 00 ml a 8.- Medio de transporte viral Albúmina bovina al 5% 0 ml Gentamicina ( mg/dl) 2.5 ml Penicilina/estreptomicina (50,000 U/50,000 µg) ml Fungizona ( mg/ml) 0.25 ml Bicarbonato de sodio (NaHCO 3 ) al 7.5% 0. ml Solución salina balanceada de Hank s 85.5 ml 2 Disolver en 50 ml de solución salina balanceada de Hank s todos los reactivos. 3 Agitar por lo menos 3 minutos. Ajustar a ph de Aforar a 00 ml con el resto de la solución salina balanceada de Hank s. Esterilizar por filtración. 7 Hacer alícuotas de 2.5 ml en tubos cónicos estériles.. Nombre del reactivo 8 Almacenar en refrigeración. F0-SGC-0 Rev.2

14 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de Solución salina balanceada de Hank s Cloruro de sodio (NaCl). 8 g Cloruro de potasio (KCl). 0. g Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO )-7H 2 O. 0.2 g Cloruro de calcio monohidratado (CaCl 2 ) H2O g Bicarbonato de sodio (NaHCO 3 ) g Fosfato de sodio dibásico (Na 2 HPO ) 0.0 g Fosfato de potasio monobásico (KH 2 PO ) 0.0 g Glucosa g Rojo de fenol 0.02g Aforar a L 2 Disolver las sales en 700 ml de agua destilada. 3 Esterilizar por filtración. Nombre del reactivo Almacenar en refrigeración. 9.- Carbohidratos al 0% Cualquier carbohidrato a preparar g 0 ml 2 Disolver en 0 ml de agua destilada el carbohidrato a preparar. Agitar hasta que se disuelva, se puede auxiliar de una barra magnética o calentar 3 levemente según se requiera. Esterilizar por filtración.. Nombre del reactivo 5 Almacenar en refrigeración Buffer de fosfatos para micobacterias 0% Solución : Fosfato de sodio dibásico (Na 2 HPO ) 2 Disolver el fosfato de sodio dibásico y esterilizar Solución 2: 3 Fosfato de potasio monobásico (KH 2 PO ) 9.5 g 000 ml 9. g F0-SGC-0 Rev.2

15 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: 5 de Disolver el fosfato de potasio monobásico y esterilizar. 5 Mezclar la Solución con la solución 2. Agitar la mezcla.. Nombre del reactivo 000 ml 2.- Hidróxido de sodio al 2% con citrato de sodio al 0.5% Hidroxido de sodio al 2%: Hidróxido de sodio Citrato de sodio 2 Disolver el hidróxido de sodio y el citrato de sodio. 3 Esterilizar. Nombre del reactivo 22.- TINCIÓN DE AURAMINA/RODAMINA Auramina/Rodamina Auramina O Rodamina B Glicerol Fenol 2 Disolver el fenol en 00 ml de agua. 3 Agregar el glicerol y homogenizarlo en la solución fenólica. Disolver la auramina/rodamina en los 250 ml de la solución. 5 Dejar reposaar 2 horas Filtrar en un recipiente con tapón de rosca. 20 g 5 g 000 ml 3 g.5 g 50 ml 20 g 00 ml F0-SGC-0 Rev.2

16 MOP-SIB-3 DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Fecha: JUN 5 Hoja: de 7 5. Nombre del reactivo. Fecha de preparación 7. Nombre de la persona que lo preparó 8. Fecha de caducidad. Glosario Azul de algodón: Tinción utilizada para la visualización de características de hongos filamentosos. Tinción de Gram: Tinción diferencial para la visualización de bacterias por las características de su pared y membrana celular. Tinción de Ziehl-Neelsen: Tinción diferencial para la visualización de bacterias con gran cantidad de ácidos micólicos en su pared celular. Tinción de Wright: Tinción que permite diferenciar entre varios tipos celulares de la sangre. 5. Control de cambios Revisión Descripción del cambio Fecha 00 Incorporación al sistema de Gestión de la Calidad Agosto Revisión y cambio de formato Marzo Actualización de imagen institucional JUN 5 F0-SGC-0 Rev.2