Programa LAS 4.6 del Microscopio Leica DM5000 Microscopio LEICA DM5000

Transcripción

1 Microscopio LEICA DM5000 -Técnicas disponibles: Campo claro Campo oscuro DIC Fluorescencia -Programa para la captación de imágenes: LAS V4.6 encender el microscopio para poder abrir el programa la fluorescencia es opcional

2 Fuente de luz blanca (LED) Encender del interruptor y luego en la pantalla de control abrir el obturador Pantalla de control

3 Microscopio LEICA DM5000 -Encender el ordenador y el microscopio -Encender la fuente de luz blanca (LED). Ver foto anterior -Entrar en LasX User. Contraseña: Leica5000 -Programa para la captación de imágenes: LAS V4.6 Fuente de fluorescencia (opcional) Ordenador Microscopio

4 SERVICIO DE MICROSCOPÍA Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas. CSIC-UPV Equipos para la observación de las muestras Botón de estado del equipo. Indica el objetivo y la técnica con la que estamos trabajando. 1. Intensity: NO controla la luz blanca. Se hace desde la fuente LED 2. Obturador o TL-Shutter: cierra el paso de la luz transmitida 3. Aperture: diafragma de apertura o de iris, permite dar más contraste a la imagen 4. Field: diafragma de campo. Se ajusta para hacer el Köhler pero este equipo lo adapta a cada objetivo. Botón donde se puede seleccionar la técnica con la que se va a trabajar TRANSMITIDA 1. BF: campo claro 2. DF: campo oscuro 3. DIC o Nomarski 4. POL: polarización INCIDENTE Fluo: fluorescencia A DAPI GFP N21 F.excitac BP /50 BP 470/40 BP F.emis LP /50 BP 525/50 LP 590

5 En Opciones Preferencias (imagen): -Poner cómo se guardarán las imágenes. Ojo al formato! - Es aconsejable el formato tiff y en 8 bits para poder hacer Stitching (no comprime) - Añadir un nombre por defecto si se desea

6 BOTONES DE CARPETA Y ESCALA Carpeta de captura: -Elegir o hacer una nueva carpeta en imágenes usuarios. -Establecerla como carpeta de captura; se verá con un punto rojo.

7 BOTONES DE CARPETA Y ESCALA Escala: -Activar Mostrar y cambiar sus propiedades si se desea (color, fondo, barra de fin ) -Activar Fusionar todo si deseamos poner la escala en todas las fotos. -Desplazar la escala en la imagen antes de adquirir la foto.

8 OJO es aconsejable volver a las condiciones iniciales en Opciones de Entrada Configuración Default (luego quitar el modo automático) EN ADQUIRIR Exposición automática Equilibrado de blancos Mostrar sub/sobreexposición Selección de configuración: las guardadas por los usuarios Configuraciones predefinidas

9 -En Adquirir opciones de entrada dar a la configuración por defecto y quitar la exposición automática -Ajustar la exposición y resto de parámetros. Programa LAS 4.6 del Microscopio Leica DM5000

10 EN ADQUIRIR Equilibrado de blancos: -Con un click derecho en la pantalla aparece el recuadro de la imagen. -Situarlo en la zona donde se quiera hacer el balance y hacer el cuadro del tamaño adecuado. Luego seleccionar equilibrado de blancos.

11 EN ADQUIRIR Ajuste de exposición: -Exposición: regula el tiempo de exposición de la cámara y por tanto, la cantidad de luz de la imagen. -Ganancia: poner a valores bajos. Sólo altos para enfocar en fluorescencia usando valores bajos de exposición. -Saturación: da mayor o menor intensidad a los colores. -Gamma: valor de 0.6 en imágenes de campo claro y de 1 en imágenes con fluorescencia.

12 Adquirir: -En Cámara, opciones de entrada: se puede guardar una configuración nueva con sus valores de exposición, ganancia..etc. -Tras guardarla aparecerá en el recuadro de configuraciones propias.

13 EN ADQUIRIR Procesamiento: -Se puede dar nitidez a la imagen y mostrar en vivo o voltearla. Región de interés: -Útil para encontrar foco.

14 EN EXAMINAR o PROCESAR Stitching: -Quitar la escala (ni merge ni show) -Hacer las fotos con cierto grado de solapamiento entre ellas -Seleccionar todas las imágenes a unir -En las ventanas de la derecha dar a stitching y poner nombre. -Después se puede añadir la escala.

15 EN PROCESAR Agregar línea de medida: -En Anotar anotaciones básicas, activar mostrar en línea. Poner línea de distancia y hacerla sobre la imagen. -Después se puede reemplazar la imagen anterior o bien guardarla como una nueva.