GABRIEL CHAVES BETANCOURT OSCAR EDUARDO LADINO REY CHRISTIAN CHASIN ZAMBRANO

Transcripción

1 EVALUACIÓN DEL EFECTO ANTAGÓNICO DE CUATRO CEPAS DE Trichoderma sp. SOBRE HONGOS CONTAMINANTES DE SEMILLAS DE PALMA HIBRIDA INTERESPECÍFICA OxG (Elaeis oleífera x Elaeis guineensis). GABRIEL CHAVES BETANCOURT OSCAR EDUARDO LADINO REY CHRISTIAN CHASIN ZAMBRANO

2 CONTENIDO 1 ANTECEDENTES OBJETIVOS METODOLOGÍA RESULTADOS 5 CONCLUSIONES

3 ANTECEDENTES Fuente: Autor En trabajos anteriores evaluaron diferentes fungicidas y Trichoderma sp. Encontraron hongos como Rhizopus sp. Aspergillus sp. Penicillium sp. Fusarium sp. Fuente: anavl.blogspot.com Fungicidas Maxim XL Vitavax Folicur Mancozeb

4 ANTECEDENTES Trichoderma sp Micoparasitismo Competencia Antibiosis Espacio Nutrientes Metabolitos secundarios Antibióticos Phylum Clase Orden Familia Género Deuteromycota Hyphomycetes Hifales Moniliales Trichoderma sp. Inducción de resistencia en plantas superiores (Chavez M., 2006) (Martinez, Infante, & Reyes, 2013) (Agrios, 2004) (Vinale, et al., 2008)

5 ANTECEDENTES ENDOSPERMO CONSERVADO TRATAMIENTO QUIMICO 73 días de germinada TRATAMIENTO BIOLOGICO 73 días de germinada

6 ANTECEDENTES TRATAMIENTO QUIMICO 73 días de germinada TRATAMIENTO QUIMICO 73 días de germinada

7 % CONTAMINACIÓN Crecimiento (cms) Efecto de tratamientos sobre el crecimiento de Plúmula y Radícula ANTECEDENTES 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 2,226 Plumula 2,402 4,39 Radicula 3,386 Trichoderma Quimico Variables evaluadas 1,60% 1,40% 1,20% 1,00% 0,80% 0,60% 0,40% 0,20% 0,00% % Contaminación por Hongos Saques Químico Trichoderma sp

8 ANTECEDENTES

9 ANTECEDENTES %Germinación Acumulada 15% Químico 1er 2do 3er 4to 5to 6to 7mo 8vo 9no

10 CONTENIDO 1 Antecedentes Objetivos Metodología Resultados 5 Conclusiones

11 Objetivo general Evaluar el efecto antagónico de cuatro cepas de Trichoderma sp sobre hongos contaminantes de semillas de palma hibrida OxG Indupalma (E. oleífera x E. guineensis). Objetivos específicos OBJETIVOS Identificar hongos contaminantes prevalentes en semillas de palma hibrida interespecífica OxG Indupalma (E. oleífera x E. guineensis). Determinar el efecto antagónico de Trichoderma sp. mediante plato dual sobre los hongos contaminantes aislados.

12 HIPOTESIS Hipótesis Nula No se observa diferencias significativas entre los efectos de las cuatro cepas de Trichoderma sp sobre los hongos contaminantes de semillas Hipótesis Alterna Existen diferencias significativas entre los efectos de las cuatro cepas de Trichoderma sp sobre los hongos contaminantes de semillas

13 METODOLOGÍA Plantación Indupalma Ltda. Altura de 120 msnm Humedad relativa del 72,3% Temperatura de 28 C (oscilando entre 22 C y 34 C) Evaporación de 1208 mm/año Precipitación anual promedio de 2497 mm Brillo solar de 2130 horas al año

14 METODOLOGÍA Identificación de hongos contaminantes 200 semillas Germinación MUESTRA 100 Semillas Embriones 50 Semillas Calefacción 3 Muestras Intervalos días Diferentes lotes 1050 Semillas

15 METODOLOGÍA AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE HONGOS PDA x3 25 C 7 días IDENTIFICACIÓN: Claves taxonómicas de Carrillo (2003) Corena, Zambrano y Gualdrón, 2011 >5% por muestra >2% de muestra global

16 METODOLOGÍA Cepas Antagónicas Cepas Comerciales T. harzianum T. viride TharC TvirC Cepas Nativas T. harzianum Suelo de E. oleifera T. viride Espigas de inflorescencia masculina E. guineensis TharN TvirN

17 METODOLOGÍA Efecto Antagónico mediante Plato Dual 60 mm 60 mm Testigo Patógeno 60 mm Testigo Trichoderma sp Antagonista Se marca el crecimiento diariamente 8 días, 27 C, Cinco veces. Medio de cultivo PDA. Unidad Experimental Enfrentamiento (Fernandez & Suarez, 2009).

18 METODOLOGÍA Efecto Antagónico mediante Plato Dual Inhibición del crecimiento radial Comparación con patógeno testigo Micoparasitismo Crecimiento de Trichoderma sp sobre el micelio del hongo patógeno (línea punteada)

19 METODOLOGÍA Efecto Antagónico mediante Plato Dual Competencia por espacio y nutrientes Porcentaje de Inhibición de crecimiento radial (PICR) Comparar el Radio de Crecimiento Antagonista (RCA) con el Radio de Crecimiento Patógeno (RCP). Ezziyyani et al. (2004) R1 es el radio del patógeno testigo R2 es el radio del patógeno en enfrentamiento

20 Micoparasitismo (MICMO) Grado Capacidad antagónica Elías y Arcos (1984) y citada por Ezziyyani et al. (2004) Se midió la invasión de la superficie y esporulación de Trichoderma sp sobre los hongos donde se presente crecimiento sobre el micelio del patógeno. 0 Ninguna invasión de la superficie de la colonia del hongo patógeno 1 Invasión de ¼ de la superficie de la colonia del hongo patógeno 2 Invasión de ½ de la superficie de la colonia del hongo patógeno 3 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno 4 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno y esporulación sobre ella. METODOLOGÍA Efecto Antagónico mediante Plato Dual

21 METODOLOGÍA Análisis de datos Análisis de Datos Los cuatro antagonistas se analizarán mediante un ANOVA de los resultados obtenidos de PICR para cada uno de los hongos. Además, se realizará la prueba de Tukey (P=0,05) para comparar las medias entre ellas. Para analizar el MICMO se hizo mediante la prueba de Kruskal-Wallis para variables no paramétricas ordinales.

22 CONTENIDO 1 Antecedentes Objetivos Metodología Resultados 5 Conclusiones

23 RESULTADOS Microorganismos presentes en las etapas del proceso 5,70% 8,33% 10,17% Calefacción 2,52% 0,63% 4,40% 2,63% 54,02% 1,35% 1,16% 3,86% 1,90% 2,20% 2,07% 3,75% 4,83% 4,95% 10,00% Germinación 0,79% 0,70% 0,99% 26,03% 18,41% 0,19% 1,90% 0,17% 1,96% Embriones 3,03% 2,82% 4,21% 10,29% 10,35% 0,63% 0,73% 0,63% 0,63% 0,41% 0,32% 50,37% 11,62% 16,66% 11,71% Mucor sp Syncephalastrum sp A. niger A. terreus Penicillium sp F Schizhophyllum sp Levaduras Bacterias Penicillium sp V Schizophyllum sp Syncephalastrum sp Mucor sp Aspergillus terreus Rhizopus sp T viride Levaduras Aspergillus niger Aspergillus fumigatus Penicillium sp V Fusarium sp Aspergillus flavus Penicillium sp F Fusarium sp 2 Schizophyllum sp Levaduras Mucor sp Fusarium sp 1 Syncephalastrum sp A. fumigatus A. terreus No identificado Fusarium sp 3 T. viride Basipetospora sp Penicillium sp G Penicillium sp NB Bacterias Penicillium sp F

24 HONGO Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus terreus Fusarium sp Fusarium sp Mucor sp Penicillium sp Penicillium sp Rhizopus sp Schizophyllum sp Syncephalastrum sp Código IPS01 IPS02 IPS03 IPS04 IPS05 IPS06 IPS07 IPS08 IPS09 IPS10 IPS11 ETAPA DEL PROCESO RESULTADOS Calefacción Germinación Embriones X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

25 RESULTADOS Identificación de hongos contaminantes Microorganismos no reportados anteriormente Chrysosporium sp. Schizophyllum sp Syncephalastrum sp. Microorganismos reportados no encontrados Sclerotinia sp. A. clavatus A. ochraceus Mayor contaminante de semillas en germinación. Disminuye tasa de germinación (Zubir, et al., 1995, citado por Dikin, et al., 2003)

26 PICR Escala MICMO RESULTADOS Aspergillus terreus IPS03 70,0% 61,4% 61,0% 60,0% 56,5% 50,0% 43,7% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% TharC TharN TvirC TvirN Antagonistas ANOVA multifactorial PICR de A. terreus (IPS03) Fuente GL SC MC F P Tratamiento 3 0,2395 0, ,8 0,000 Error 16 0,0120 0,0007 Total 19 0,2515 R-cuad 95,2% Desv. Estand. 0, MICMO de A. terreus (IPS03) TharC TharN TvirC TvirN Antagonistas Prueba de Kruskal-Wallis H GL P 16,07 3 0,001 19,00 3 0,000

27 Mucor sp. IPS06 RESULTADOS ANOVA multifactorial Fuente GL SC MC F P Tratamiento 3 0,0362 0, ,15 0,000 Error 15 0,0069 0,0005 Total 18 0,0431 R-cuad 83,95% Desv. Estand. 0,02149 Prueba de Kruskal-Wallis H GL P 16,89 3 0,001 17,83 3 0,000

28 Escala MICMO Syncephalastrum sp. IPS11 RESULTADOS MICMO de Syncephalastrum sp. (IPS11) TharC TharN TvirC TvirN Antagonistas ANOVA multifactorial Fuente GL SC MC F P Tratamiento 3 0,0686 0, ,83 0,000 Error 15 0,0045 0,0003 Total 18 0,0732 R-cuad 93,74% Desv. Estand. 0,0174 Prueba de Kruskal-Wallis H GL P 16,07 3 0,001 19,00 3 0,000

29 Escala MICMO Schizophyllum sp. IPS10 RESULTADOS MICMO de Schizophyllum sp. (IPS10) TharC TharN TvirC TvirN Antagonistas ANOVA multifactorial Fuente GL SC MC F P Tratamiento 3 0,2395 0, ,4 0,000 Error 15 0,0134 0,0008 Total 18 0,2529 R-cuad 94,70% Desv. Estand. 0,0298 Prueba de Kruskal-Wallis H GL P 10,71 3 0,013 18,75 3 0,000

30 RESULTADOS Datos Y Distancia (mms) Efecto de Trichoderma viride Comercial sobre Schizophyllum sp Variable P3 T3 TestigoP TestigoT Día ( ) Crecimiento del patógeno en plato dual ( ) Crecimiento de Trichoderma sp en plato dual a 60 mm de distancia ( ) Crecimiento de Trichoderma sp testigo ( ) Crecimiento de patógeno testigo

31 % PICR RESULTADOS 90,0% PICR de las cuatro cepas de Trichoderma sp. sobre hongos contaminantes de semillas 80,0% 70,0% 60,0% 50,0% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% IPS01 IPS02 IPS03 IPS04 IPS05 IPS06 IPS07 IPS08 IPS09 IPS10 IPS11 Hongos contaminantes TharC TharN TvirC TvirN Noveriza y Quimio (2004) los antagonistas promisorios deben tener más del 60% de inhibición del crecimiento radial

32 CONTENIDO 1 Antecedentes Objetivos Metodología Resultados 5 Conclusiones

33 CONCLUSIONES Se aislaron e identificaron once cepas de hongos prevalentes en el proceso de germinación de semilla de palma híbrida interespecífica OxG Indupalma (E. oleífera x E. guineensis) de los géneros Aspergillus sp., Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp., Rhizopus sp., Schizophyllum sp. y Syncephalastrum sp. Las cuatro cepas de Trichoderma sp. inhibieron el crecimiento de los hongos contaminantes de semillas de palma híbrida interespecífica OxG Indupalma y se presentaron diferencias significativas entre los efectos de inhibición del crecimiento de todos los antagonistas usados.

34 CONCLUSIONES La cepa de T. viride comercial es la más promisoria para el uso como antagonista, debido a que inhibe en gran medida (>60% PICR) a seis de los once hongos estudiados, y de los cuales, no todos son inhibidos a su vez por los demás antagonistas. La cepa de T. viride comercial presentó parasitismo en diez de los once hongos aislados y en siete de ellos colonizó y esporuló la mitad o más del micelio del patógeno. Se hace promisorio el uso de moléculas biológicas para el control de hongos patógenos en proceso de producción de semillas hibridas de palma de aceite.

35 GRACIAS