EL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO

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1 COMENTARIOS Con fundamento en el numeral de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de mayo y hasta el 30 de junio de 2018, lo analicen, evalúen y envíen sus observaciones o comentarios en idioma español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM, sito en Río Rhin número 57, colonia Cuauhtémoc, código postal 06500, Ciudad de México. Fax: Correo electrónico: consultas@farmacopea.org.mx. DATOS DEL PROMOVENTE Nombre: Institución o empresa: Teléfono: Cargo: Dirección: Correo electrónico: EL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO Dice Debe decir Justificación* MPB DETERMINACIÓN DE LA FUNCIÓN Fc DE LA INMUNOGLOBULINA I. Sangre humana estabilizada. Obtener sangre humana tipo O en solución anticoagulante ACD. Almacenar la sangre estabilizada, a temperatura de 4 C durante no más de 3 semanas. La sangre cumple con los Requisitos de la materia prima para elaborar hemoderivados, que se señalan en la introducción de este capítulo. II. Solución salina amortiguadora de fosfatos ph 7.2 Fosfato ácido disódico anhidro g Fosfato ácido monosódico anhidro g Cloruro de sodio g Disolver el cloruro de sodio en 800 ml de agua y en esta solución disolver los fosfatos y llevar a 1 L con agua. III.Solución madre de magnesio y calcio Cloruro de calcio g Cloruro de magnesio g Disolver en agua y llevar al aforo a 25 ml. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 1 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

2 IV. Solución madre amortiguadora de barbital Cloruro de sodio g Barbital sódico g Disolver en agua y llevar al aforo a 4 L. Ajustar a ph 7.3 con ácido clorhídrico 1.0 M. Agregar 12.5 ml de solución madre de magnesio y calcio y llevar al aforo a 5 L con agua. Filtrar por membrana de 0.22 m de porosidad y almacenar en recipientes de vidrio a 4 C. V. Solución amortiguadora de albúmina-barbital. Disolver g de albúmina bovina en 20 ml de solución madre amortiguadora de barbital y llevar al aforo con agua a 100 ml. Esta solución se prepara inmediatamente antes de usarse. VI. Solución de ácido tánico. Disolver 10 mg de ácido tánico en 100 ml de solución salina amortiguadora de fosfatos ph 7.2. Esta solución se prepara inmediatamente antes de usarse. VII. Complemento de cobayo. Separar, por centrifugación a 4 C, la mezcla del suero de cobayo proveniente de por lo menos 10 animales. Almacenar en cantidades pequeñas a 70 C bajo cero. Inmediatamente antes de comenzar la reacción de hemólisis inducida por el complemento, diluir a CH 50 (dosis de hemólisis al 50 %) por mililitro, con solución amortiguadora de albúmina-barbital y mantener en baño de hielo, durante el desarrollo de la prueba. VIII. Antígeno de rubéola. Antígeno de rubéola específico para la prueba de inhibición de la hemaglutinación (PIH). Título > 256 unidades hemaglutinantes. lx. Preparación de eritrocitos con ácido tánico 1. Separar, por centrifugación, los eritrocitos humanos de la sangre estabilizada, (volumen apropiado) y lavarlos tres veces con solución salina amortiguadora de fosfatos ph 7.2. Hacer una suspensión al 2 % (v/v) con la misma solución amortiguadora. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 2 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

3 2. Adicionar 0.2 ml de solución de ácido tánico a 14.8 ml de solución salina amortiguadora de fosfatos ph Mezclar un volumen de la dilución recién preparada con un volumen de la suspensión de GR eritrocitos de la sangre humana e incubar a 37 C durante 10 min. 4. Separar los GR eritrocitos por centrifugación (400 a 800 g) durante 10 min. Descartar el sobrenadante y lavar los eritrocitos con solución salina amortiguadora de fosfatos ph Resuspender los GR eritrocitos tratados con ácido tánico al 1.0 % (v/v) en solución salina amortiguadora de fosfatos ph 7.2. X. Recubrimiento de los eritrocitos (tratados con ácido tánico), con el antígeno de rubéola 1. Tomar un volumen determinado de los eritrocitos tratados con ácido tánico (V S) y agregar 0.2 ml de antígeno de rubéola por cada mililitro de eritrocitos e incubar a 37 C durante 30 min. 2. Separar los eritrocitos por centrifugación (400 a 800 g) durante 10 min, descartar el sobrenadante (medir el volumen) y mantener los eritrocitos en un volumen de 0.2 ml. 3. A este volumen de eritrocitos adicionar un volumen equivalente al sobrenadante descartado de solución amortiguadora de albúmina-barbital; suspender los eritrocitos y recuperarlos por centrifugación. 4. Volver a suspender en igual volumen de la solución amortiguadora de albúmina-barbital, centrifugar y separar los eritrocitos dejándolos en un volumen de 0.2 ml. 5. A 0.2 ml del último lavado, agregar solución amortiguadora de albúmina-barbital hasta llegar a tres cuartos del volumen V S. Con esto se obtiene un volumen inicial (V i). 6. Mezclar 0.9 ml de solución amortiguadora de albúmina-barbital con 0.1 ml de V i obteniendo un CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 3 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

4 volumen residual (V R) y determinar la absorbancia inicial a 541 nm (A). 7. De acuerdo con los volúmenes y lavados: V S = Volumen de eritrocitos tratados con ácido tánico. V i = 0.2 ml de sedimento llevado al volumen V S con solución amortiguadora de albúmina-barbital. V R = Tomar 1 volumen de V i + 9 volúmenes de solución amortiguadora de albúmina-barbital (Dil. 1:10). V V A 10 Donde: A = f R Por lo tanto, la suspensión de glóbulos rojos sensibilizados con el antígeno de rubéola, será de un volumen final = V f V f V R 10 Donde: V f = 1 volumen de V R + 9 volúmenes de solución amortiguadora de albúmina-barbital. La suspensión de eritrocitos que se utiliza para la prueba de hemólisis. XI. Ensayo A. Inmunoglobulina. Solución de ensayo. Preparar soluciones de inmunoglobulina conteniendo 30 y 40 mg de inmunoglobulina, con solución amortiguadora de Albúminabarbital. Ajustar a un volumen de 0.9 ml con solución amortiguadora de Albúmina barbital. Ajustar la inmunoglobulina con solución de hidróxido de sodio 1.0 M a ph 7.0, si es necesario. Si utiliza placas de micro-titulación, cambiar las cantidades para preparar las soluciones de inmunoglobulina con 15 mg y 30 mg de inmunoglobulina y cambiar el ajuste de volumen a 1.2 ml con solución amortiguadora de Albúmina barbital. B. Preparación de referencia. Utilizar inmunoglobulinas Emplear estándar de referencia (OMS) internacional de CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 4 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

5 inmunoglobulina humana y hacer las mismas soluciones, en igual concentración que el problema. C. Solución de control de complemento. Usar únicamente 0.9 ml de solución amortiguadora de albúmina-barbital. Colocar por duplicado, en celdas o tubos de vidrio, las soluciones antes mencionadas. D. Agregar a cada celda o tubo, 100 ml µl de GR eritrocitos sensibilizados y mezclar. Si utiliza placas de micro-titulación, cambiar el volumen de eritrocitos sensibilizados a 0.3 ml (la concentración final de inmunoglobulina se encuentra en un rango de entre 10 y 20 mg/ml). 1. Incubar a temperatura ambiente durante 15 min. 2. Agregar 1 ml de solución amortiguadora albúminabarbital y recuperar los eritrocitos por centrifugación (1 000 g/10 min). Si utiliza placas de micro-titulación, cambiar el volumen de solución amortiguadora albúmina-barbital a 1.5 ml y agitar suavemente hasta homogeneizar antes de centrifugar. 3. Separar el sobrenadante (SN) = 1.9 ml. 4. Reemplazar los 1.9 ml con solución amortiguadora albúmina-barbital y repetir el procedimiento de lavado. Si utiliza placas de micro-titulación, agregar aproximadamente 3 ml de solución amortiguadora albúmina-barbital. 5. Centrifugar nuevamente y dejar el sedimento de eritrocitos en un volumen de 0.2 ml aproximadamente. Si utiliza placas de micro-titulación, repetir la centrifugación y cambio de sobrenadante 4 veces, para dejar el sedimento en un volumen final de 0.3 ml aproximadamente. 6. Mantener las muestras tapadas a 4 C, máximo 24 h. XII. Complemento iniciador de hemólisis 1. Para medir la hemólisis, agregar a todas las muestras 0.6 ml de solución amortiguadora albúmina-barbital, calentada previamente a 37 C. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 5 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

6 2. Resuspender los eritrocitos cuidadosamente con una pipeta, por lo menos cinco veces. 3. Colocar las celdas en el baño térmico del espectrofotómetro. 4. Después de 2 min, agregar 0.2 ml a la primera celda o tubo complemento de cobayo diluido (125 a 200 CH 50/mL) mezclar con la pipeta dos veces. Inmediatamente después de la segunda vez de usar la pipeta, determinar la absorbancia a 541 nm registrando tiempo y lectura, pues la absorbancia es dependiente del tiempo. Repetir lo anterior con todas las muestras. Usar solución amortiguadora de albúmina-barbital como líquido de compensación. 5. Detener la lectura, si la absorbancia en función del tiempo, ha pasado claramente el punto de inflexión. Si utiliza placas de micro-titulación: 1. Precalentar las placas a 37 C. 2. Para medir la hemólisis, agregar a todas la muestras 0.9 ml de solución amortiguadora albúmina-barbital, calentada previamente a 37 C. 3. Resuspender los eritrocitos cuidadosamente con una pipeta, por lo menos cinco veces. 4. Transferir ml de cada solución en cuatro pozos de las placas. 5. Incubar las microplacas a 37 C durante 6 min, agitando suavemente cada 10 s. 6. Agregar a cada pozo 0.06 ml de complemento de cobayo diluido (150CH 50/mL) mezclar durante 10 s, e inmediatamente comenzar a registrar determinar la absorbancia a 541 nm a 37 C cada 20 s. 7. Detener la lectura si la absorbancia en función del tiempo ha pasado claramente el punto de inflexión. XIII. Evaluación Determinar la pendiente (S) de la curva de hemodiálisis en el punto de inflexión aproximado, segmentando la sección CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 6 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

7 más inclinada en intervalos de tiempo adecuado (por ejemplo, Δt = min), y calcular S entre los puntos de intersección adyacentes, expresados como ΔA/ min. El mayor valor de S se utiliza como S EXP. Además, determinar la absorbancia al inicio de la medición (As) extrapolando la curva, la cual es casi lineal y paralela al eje del tiempo en los primeros minutos. Corregir S EXP utilizando la expresión: S S As EXP Calcular la media aritmética del valor de S para cada preparación (prueba y solución de referencia). Calcular el índice de la función de Fc (IFc) de la expresión: IFc = 100 (S Sc ) Sr Sc Donde: S = Media aritmética de la pendiente corregida de la preparación a ser examinada Sr = Media aritmética de la pendiente corregida para la preparación de referencia. Sc = Media aritmética de la pendiente corregida para el control del complemento. Calcular el índice de la función Fc de la preparación a ser examinada: el valor no es menor que el es mayor o igual al indicado en el certificado que acompaña a la preparación de referencia. *Para una mejor comprensión de su solicitud adjunte bibliografía u otros documentos que sustenten sus comentarios. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 7 de 7 MÉTODOS DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS