Equipamiento para preparación y análisis de muestras en ANATOMÍA PATOLÓGICA 2 Microscopios Eclipse Ci-L y Ci-E El estándar de microscopía para Anatomía Patológica, con una serie de características específicas adaptadas a las necesidades especificas de los servicios de Anatomía Patológica. Nikon 4 Microscopios Eclipse Ni-U y Ni-E La gama más alta de microscopios adaptada para Anatomía Patológica. Nikon 5 Cámaras digitales de la serie Digital Sight El complemento perfecto para un microscopio triocular. Las cámaras de esta serie permiten obtener imágenes de elevada calidad de las muestras observadas en el microscopio Nikon 6 Sistemas de digitalización de portas Para convertir las portas en una imagen digital de súper-alta resolución Hamamatsu 9 SLEE Medical GmbH Microtomos, criostatos, procesadores de tejidos...y toda una extensa gama de productos para el equipamiento de laboratorios histopatológicos. SLEE Medical 12 Plataforma ncounter La plataorma ncounter permite analizar perfiles de cientos de mrnas, mirnas y CNVs en simultáneo, con una elevada precisión y sensibilidad. NanoString 15 Sistema de microdisección láser ARCTURUS XT Tecnología exclusiva de captura LCM (Laser Capture Microdissection) que permite la comprobación de todos los cortes realizados. Arcturus
MICROSCOPÍA NIKON Nikon le ofrece la gama de microscopios más adaptada a las necesidades de los Servicios de Anatomía Patológica Microscopio Eclipse Ci-L y Ci-E El estándar de microscopía para Anatomía Patológica. Ofrece una serie de características supremas adaptadas a sus necesidades. Sistema de iluminación LED de alta potencia Eco friendly El nuevo sistema de iluminación LED de alta potencia y vida media 60.000 horas permite una iluminación brillante y absolutamente uniforme en el intervalo de 1 a 100 aumentos. Con una reproducción del color perfecta permite ver las muestras de una forma totalmente natural. Adicionalmente y debido a su elevada potencia, puede ser utilizado con sets de polarización incluso a elevado aumento. Ergonomía El microscopio Ci-L y Ci-E poseen una gran cantidad de accesorios que permiten observaciones cómodas durante periodos prolongados. Entre ellas se pueden destacar las siguientes: El portaoculares ergonómico telescópico con un ángulo de inclinación variable entre 10 y 30º y un movimiento atrás/delante de 40 mm permiten la visión sin fatiga para cualquier usuario durante largos periodos de observación. Adicionalmente puede incorporar un puerto triocular para una cámara digital. La altura total del microscopio puede variarse hasta 50 mm mediante elevadores de altura El revólver y la platina del microscopio pueden bajarse 20 mm en caso necesario para una observación de muestras más cómoda. El mando XY de la platina puede subirse y bajarse para adaptarse a manos más pequeñas o más grandes. 2
Facilidad de uso El botón Image Capture situado en la parte lateral derecha del microscopio permite la captura de imágenes con las cámaras Nikon de la serie Digital Sight sin necesidad de quitar la vista de los oculares. El microscopio motorizado Ci-E permite ser programado para un intercambio rápido entre dos objetivos (por ejemplo entre un 10x y un 40x) para aquellas técnicas que lo requieran. Adicionalmente al cambiar el objetivo, tanto la posición del condensador como la intensidad de iluminación cambian automáticamente para una observación perfecta. Óptica Nikon Nikon posee un magnífico rango de objetivos especialmente diseñados para Anatomía Patológica: El objetivo Plan Acromático 1x permite ver campos visuales de 25 mm de diámetro en conjunción con los oculares de ultra gran campo. La óptica Plan Fluor posee una elevada transmisión de la luz lo que permite ser utilizada en técnicas tales como FISH Gama de objetivos Plan Apocromáticos Lambda con aumentos de 2 a 100x de una calidad cromática perfecta. Gran variedad de accesorios Todos los microscopios Nikon permiten la instalación de una gran variedad de accesorios: Revólveres manuales hasta 7 posiciones Sistemas de polarización para la visión de cristales Módulos de epi-fluorescencia para técnicas como FISH Sistemas de múltiple observación Adaptadores para dos cámaras 3
Microscopios Eclipse Ni-U y Ni-E La gama más alta de microscopios NIKON adaptada a Anatomía Patológica. Con una iluminación con lámpara halógena de 100W o un sistema LED de alta calidad permite la observación de las muestras en cualquier técnica de microscopía directa, incluida NOMARSKI (DIC). Adicionalmente a las características ya mencionadas para los microscopios de la serie Ci los microscopios Ni-U y Ni-E permiten motorizar todos los componentes del microscopio incluido el eje Z y un revólver séptuple. Adicionalmente permiten una expansión del microscopio casi ilimitada: Dos torretas para epi-fluorescencia Ruedas de filtros para FISH Microscopía confocal El microscopio Ni-E puede motorizarse completamente mientras que el modelo Ni-U permite motorizar varios de sus componentes tales como el módulo de epi-fluorescencia o el revólver portaobjetivos. 4
Cámaras digitales de la serie Digital Sight El complemento perfecto para su microscopio triocular. Las cámaras digitales NIKON de la serie Digital Sight, con una amplia variedad de modelos permiten la obtención de imágenes de elevada calidad de las muestras observadas en el microscopio Diferentes modelos de cámara Dentro de la serie Digital Sight se pueden encontrar diferentes modelos de cámaras: DS-Fi2. El modelo estándar de la gama. Con una magnífica reproducción del color y resolución de 5 millones de píxeles DS-Ri1: el modelo para los usuarios más exigentes. Con una reproducción perfecta del color y resolución 12,7 millones de píxeles mediante un CCD refrigerado. DS-Vi2: el modelo adaptado para aquellas aplicaciones en las que se requiera una velocidad rápida en la toma de imágenes. Posee CCD en color con 2 millones de píxeles de resolución DS-Qi1Mc: cámara monocroma de alto nivel adaptada para las más exigentes técnicas de epi-fluorescencia. Permite la cuantificación de la intensidad de fluorescencia de la imagen con mediante un sensor refrigerado de 1.5M de píxeles. Controladores Cada uno de los modelos anteriormente citados puede conectarse a uno de los dos controladores siguientes, en función de la necesidad de cada usuario Controlador DS-U3: permite conectar las cámaras a un ordenador para la toma de imágenes directa en el ordenador. La toma de imágenes se realiza a gran velocidad gracias a su conexión Firewire con NIS. Controlador DS-L3. Su pantalla táctil y su software de fácil manejo permiten una toma de imágenes intuitiva sin necesidad de ordenador. Perfecto para las sesiones clínicas pues puede ser conectado a una pantalla TFT externa de gran tamaño o a un proyector para ver las imágenes del microscopio a gran tamaño. 5
Sistemas de digitalización de portas Hamamatsu Educación y Formación Análisis de imagen Teleconferencia Gestión de Datos Para convertir las portas en una imagen digital de súper-alta resolución Acceso a las imágenes a través de la red Diversas aplicaciones de software e integración Obtener una imagen de súper-alta resolución en toda la preparación, no solo en una región determinada (WSI) Necesidad de manejar la preparación de cristal una sola vez, para su escaneado Mayor comodidad a la hora de trabajar (monitor, a distancia, teleconsulta ) Evitar el photobleaching en preparaciones fluorescentes Posibilidad de visualizar varias preparaciones al mismo tiempo Anotaciones y herramientas de análisis automatizado por software Posibilidad de archivar y organizar las imágenes fácilmente (discos duros, servidores ) 6
Sistemas de captación de imágenes Escaneado Consiste en tres detectores matriciales, 3x RGB TDI (Time Delay Integration), que permiten escanear con alta calidad de imagen preparaciones tanto de campo claro como en fluorescencia, gracias a su elevada sensibilidad y a la eficacia óptica de la excitación. A diferencia del clásico sensor CCD, el sensor 3 RGB TDI, con sus 4096 pixeles de largo, permite escanear una preparación con gran sensibilidad a una alta velocidad, minimizando el efecto del photobleaching en el caso de muestras fluorescentes. Así, una preparación de 15x15mm puede ser digitalizada con una resolución de 1,9 millones de pixeles en tan solo 1 minuto utilizando el objetivo de 20x. La misma área digitalizada con el objetivo de 40x tardaría 2 minutos y 30 segundos. Previamente al escaneado de cada porta, el sistema realiza un autoenfoque de las distintas partes de la muestra mediante puntos de autoenfoque de manera totalmente automática. Capaz de escanear portas convencionales con objetivos de 20x y 40x aumentos, equivalentes a resoluciones de 0.46 µm/ pixel y 0.23 µm/pixel respectivamente, integrando sin marcas de bordes ni pespuntes la imagen microscópica de preparaciones completas para obtener una imagen digital de súper-alta resolución. Diferentes tipos de muestras y preparaciones: HE, Citología, fluorescentes Diferentes parámetros: área, resolución, nombre, destino de la WSI en servidor La digitalización perfecta con un solo clic NANOZOOMER RS NANOZOOMER HT NANOZOOMER XR Escáner de preparaciones histológicas Hamamatsu Nanozoomer 2.0 RS con capacidad para 6 portas convencionales (26 x 76 mm) o 2 portas dobles (52 x 76 mm). Consta de un módulo de carga con capacidad hasta 210 portas, un sistema de captación de imagen, software, un ordenador y una pantalla. Consta de un módulo de carga con capacidad hasta 320 portas, un sistema de captación de imagen, software, un ordenador y una pantalla. 7
NANOZOOMER SQ Hamamatsu Sistema de escáner digital automático para el escaneado de preparaciones histológicas, capaz de escanear portas convencionales (26 x 76 mm) con objetivos de 20x y 40x aumentos, equivalentes a resoluciones de 0.46 µm/pixel y 0.23 µm/ pixel respectivamente, integrando sin marcas de bordes ni pespuntes la imagen microscópica de preparaciones completas para obtener una imagen digital de súper-alta resolución Escáner para digitalización de preparaciones histólógicas Hamamatsu Nanozoomer SQ Además de escanear la totalidad de la preparación en XY, el sistema permite realizar varios planos sobre el eje Z, de manera que al final se obtiene una imagen digital multidimensional por la que se puede navegar en profundidad variando el foco. El software de adquisición de imagen, denominado NDPscan, permite controlar cada parámetro del proceso de escaneado y aplicarlo de igual manera a cada preparación. También permite configurar diferentes protocolos para cada tipo de muestra de manera fácil, sencilla y funcional. 8
SLEE Medical GmbH ofrece una extensa gama de productos para el equipamiento de laboratorios histopatológicos. Sus productos son utilizados a nivel mundial en la preparación de muestras. 50 años de experiencia en el diseño, la producción y la distribución de criostatos, microtomos y equipos de histología son la garantía de la elevada calidad de los productos y del éxito continuado de SLEE Medical GmbH. Equipamiento para preparación de muestras en anatomía patológica Slee Medical MICROTOMOS Rotatorios automáticos, semiautomáticos y manuales para seccionamiento de especímenes parafinados, huesos, plásticos... Aplicaciones: Medicina. Biología. Industria. CRIOSTATOS manuales y semiautomáticos Completamente automatizados en avance, retracción y seccionamiento. Aplicaciones: Histología / Patología. Investigación. Cámara de trabajo de grandes dimensiones optimizada para la manipulación y una cómoda disposición de los utensilios de trabajo. Incluye 24 posiciones para la preparación de muestras. Microtomo. Criostato. 9
PROCESADORES DE TEJIDOS Totalmente automáticos o de carrusel. Para cubrir todos los requisitos de la histopatología de hoy, en materia de seguridad de la muestra, rapidez de procesamiento, flexibilidad, protección del medio ambiente y economía. Procesador de tejidos de carrusel Procesador de tejidos totalmente automático. ESTACIÓN DE INCLUSIÓN EN PARAFINA Unidad modular de gran capacidad para la inclusión de muestras de tejidos en parafina de forma fácil y cómoda. Dispensador de parafina. Plataforma de enfriamiento. Unidad de precalentamiento. Estación de inclusión en parafina. Cada una de ellas con control electrónico de temperatura independiente. SISTEMAS DE TINCIÓN DE TEJIDOS Combinan flexibilidad y rapidez. Posibilitan trabajar con diferentes protocolos de tinción al mismo tiempo por el alto número de estaciones. Desde tinciones rutinarias en histología y en citología hasta equipos completamente automáticos. Teñidor de tejidos automático. Equipo teñidor de carrusel. 10
MONTADOR DE CUBREPORTAS AUTOMÁTICO MCS I y II Los equipo cubreportas MCS permiten trabajar con altos estándares de calidad, el montaje se realiza para cada vidrio individual, rápidamente y sin burbujas. Este método garantiza un alto rendimiento de procesamiento. Se puede conectar directamente al teñidor MAS de SLEE. Puede trabajar con cubres y portas de diferentes marcas. Velocidad de procesamiento: desde 300 hasta 500 portas / h. Volumen de dispensación: desde 30 hasta 200 µl. CITOCENTRÍFUGA Cellspin I / II Citocentrífuga para la preparación de monocapas celulares Manejo sencillo y seguro: Fácil preparación de muestras Clips universales de acero inoxidable para embudos reutilizables y de un solo uso Etiquetado de portaobjetos legible durante todo el proceso Indicación de la FCR (fuerza centrífuga relativa) durante el centrifugado. Selección de rotores de fácil intercambio: Rotores abiertos o cerrados (12 posiciones de carga) Fácil extracción del rotor para su carga fuera de la centrífuga. Amplia oferta de diferentes rotores (sedimentación, citocentrifugación) 11
Sistema de análisis genético ncounter para muestras parafinadas Nanostring La plataforma ncounter de NANOSTRING permite analizar perfiles de cientos de mrnas, mirnas y CNVs en simultáneo, con una elevada precisión y sensibilidad. Plataforma ncounter Con su novedosa tecnología digital, basada en una detección directa y en multiplexing, se evitan pasos de amplificación, RT o tener que dividir las muestras en varias reacciones diferentes. Esto la hace especialmente idónea para muestras valiosas y difíciles como las parafinadas (FFPE), convirtiéndola en el nuevo gold-standard de análisis para las mismas. Elevada reproducibilidad trabajando directamente con muestras FFPE Resultados comparables a los obtenidos con muestras frescascongeladas Multiplexing de hasta 800 dianas diferentes Gran flexibilidad en tipo de muestra de partida: desde extractos crudos de parafinados hasta RNA/DNA purificados (solo 50 ng de RNA necesarios) Sin amplificación, RT o división de la muestra Tecnología Innovadora Cada molécula de Código de Barras se une a una molécula diana individual y específica. La tecnología patentada que NanoString utiliza en su sistema ncounter es de detección digital directa, con alta capacidad de multiplexing (hasta 800 genes), en una sola reacción sin amplificación. Al no requerir un paso de amplicación el sistema puede trabajar con una gran variedad de tipos y calidades de muestras de partida (por ejemplo, FFPE). En esta tecnología, cada molécula diana viene identificada por un código de barras de seis posiciones de colores. Estos códigos de barras hibridan directamente con las moléculas diana, y pueden ser contados individualmente sin ser necesaria la amplificación proporcionando así datos digitales de una muy elevada sensibilidad. 12
Hibridación Las moléculas de código de color forman parte de lo que se denomina Sonda Informadora (Reporter Probe). Dicha sonda, además del código de color específico tiene una secuencia complementaria a la molécula diana con la cual tiene que hibridar. El sistema de sondas se completa con una Sonda de Captura (Capture Probe), compuesta por otro fragmento de secuencia complementaria específica a la molécula diana de interés. Este segundo tipo de sonda, permitirá la inmovilización de los productos hibridados en un paso posterior Así pues, tras el paso de hibridación (overnight), se obtienen estructuras triples formadas por el doble sistema de sondas del ncounter más la molécula diana Purificación e Inmovilización Tras la hibridación (único paso que tiene que preparar el usuario de forma manual), las muestras se transfieren a la ncounter Prep Station, donde se realizarán el resto de los pasos de preparación de las mismas de forma completamente automática. En estos subsiguientes pasos, el exceso de sondas que no han generado producto triple son eliminadas, los complejos sondasmoléculas diana son unidos e inmovilizados, y alineados en el cartucho (superficie recubierta con Estreptavidina). Complejos de Hibridación Sondas sobrantes Inmovilización y Alineamiento para captura de imagen y contaje de moléculas Unión al cartucho Adquisición de Datos Una vez terminado este proceso, los cartuchos con las muestras se llevan al segundo equipo que forma parte del Sistema ncounter: El ncounter Digital Analyzer. Aquí se lee el cartucho (capacidad de hasta 12 muestras), se cuentan los Códigos de Barras, y se tabulan para cada molécula diana de interés. Un "informador"= 1 ácido nucléico Los Códigos se cuentan y se tabulan 13
Resultados en Muestras Parafinadas Al tratarse de una tecnología libre de enzimas, con el ncounter los ensayos de Análisis Genético son más directos, sencillos, presentan mayor precisión y una muy elevada correlación con el mismo tipo de ensayo realizado en muestras frescas. Además, no solo es así partiendo de RNA purificado, si no que los resultados obtenidos son también análogos trabajando con extractos crudos de parafinados Muestra Parafinada frente a Muestra Congelada Muestra de RNA purificado frente a Extracto Crudo de Parafina Counts from Preserved Slices Cryropreserved y=0.7878x - 0.8733 R 2 = 0.9956 FFPE Preserved y=0.4528x - 7.1227 R 2 = 0.9757 Counts in FFPE Sample Heart FFPE Purified RNA y=0.8389x - 2.4719 R 2 = 0.959 Heart FFPE Extract y=0.7951x - 8.4606 R 2 = 0.9641 Counts from Frozen Tissue Counts in Purified Total RNA Comparison of counts of 96 genes in 100ng of total heart RNA versus 100 ng total RNA prepared from frozen heart slices (green points) and total RNA prepared from FFPE heart slices (orange points) Amplio Abanico de Aplicaciones Posibles Análisis de Expresión Génica Análisis de mirna Análisis de Expresión de mirge: mrna y mirna en simultáneo Análisis de Variación de Dosis ( Copy Number Variation ) Análisis de Expresión de lncrna Análisis de Expresión ChIP-String Análisis de Fusión de Genes (Leucemia) Análisis de Expresión Génica de Célula Única Conclusión El análisis de Expresión Génica en muestras parafinadas es especialmente difícil debido a que, normalmente, el RNA en dichas muestras se encuentra más degradado que en muestras de otra tipología. Gracias a su innovadora tecnología de detección directa, sin pasos enzimáticos, directa, sencilla y en multiplexing, el ncounter es el sistema idóneo para estudios de investigación clínica y oncológica con muestras FFPE 14
Sistema de Microdisección Láser ARCTURUS XT La microdisección mediante LASER UV es un método para aislar pequeñas áreas o células independientes de una sección histológica para su posterior análisis Estos equipos son los únicos del mercado que incorporan 2 Láseres, uno UV para cortar (LC- Láser Cutting) y otro IR para capturar células sin riesgo para la integridad de los ácidos nucleicos y las proteínas (LCM- Laser Capture Microdissecton). Solamente se corta la zona requerida para el estudio. El DNA, RNA o las proteínas pueden ser estudiadas debido a que el corte no afecta a la zona de nuestro interés, sino alrededor de la misma mediante microablación fría por fotodescomposición. De este modo la muestra no se ve afectada por el Laser UV, impidiendo posibles alteraciones en las estructuras subcelulares. El sistema es capaz tanto de cortar tanto pequeñas como extensas regiones de tejido mediante su láser UV como de capturar pequeñas áreas e incluso single cells gracias a su tecnología de captura LCM (Laser Capture Microdissection). Ambos láseres de estado sólido cuentan con licencia exclusiva del NIH para ARCTURUS. En qué consiste la tecnología LCM? Se basa en la utilización de un recubrimiento plástico (CapsureTM) sensible a la temperatura (termoplástico) que se adhiere al material biológico cuando se ilumina con un pulso corto de luz laser infrarrojo. Una vez iluminado con un haz de entre 7.5 y 30 µm de diámetro el plástico se adhiere a la muestra sólo en el punto iluminado y al retirar la cubierta se arrastra la zona de la muestra que se ha iluminado. Posteriormente se puede recoger y caracterizar (contenido de DNa y/o proteínas, expresión de genes, identificación de antígenos, etc...). Esta tecnología exclusiva de ARCTURUS es la única que permite la comprobación de todos los cortes realizados, ya que cuenta con una posición de visualización de todos y cada uno de los cortes realizados en la muestra independientemente del número de ellos. Esto es fundamental para el posterior análisis de Acidos nucleicos y proteínas en cualesquiera de las aplicaciones que el usuario quisiera realizar tras el proceso de Microdisección (PCR RT, Microarrays, Expresión génica etc) La combinación de estos dos láseres en un mismo equipo, permiten al usuario trabajar independientemente con cualesquiera de ellos o bien a la vez. Para áreas grandes de tejido o bien tejidos más duros con hueso, cartílagos o paredes celulares en vegetales, el empleo del Láser UV de estado sólido de 349 nm, nos permite cortar a velocidades muy elevadas mientras que para estructuras unicelulares o estructuras intracelulares, el láser IR de 810 nm, es capaz de capturar sin cortar, lo que se traduce en un mínimo daño para estas células ya que no se libera energía calorifica con lo que las muestras obtenidas mediante este procedimiento son procesadas posteriormente para la extracción de ácidos nucléicos y/o proteínas, con excelentes rendimientos, muy superiores a los obtenidos con láseres UV, los cuales no pueden ser utilizados para cortar células únicas. 15
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