PRÁCTICA Nº 1 INTRODUCCIÓN AL ESTUDIO DE LA HISTOLÓGIA Y MANEJO DEL MICROSCOPIO DE LUZ. INTRODUCCIÓN El microscopio es un instrumento óptico, que se utiliza para la observación de objetos sumamente pequeños que la visión humana normal no alcanza a distinguir lo que permite estudiar los detalles estructurales son imposibles de reconocer sin su empleo. En el estudio de la histología y la embriología, el microscopio ha sido uno de los factores más importantes en el impulso de su desarrollo. El microscopio consta de dos partes, una parte óptica y una parte mecánica. La parte óptica está conformada por el objetivo, el ocular, y el condensador. El objetivo constituye la parte más importante, es un tubo metálico que tiene en su interior un sistema de lentes destinado a dar la imagen real, invertida y aumentada del objeto. Se atornilla a un disco giratorio llamado revolver. El ocular está formado por un sistema de lentes plano convexas dispuestas en un tubo cilíndrico de metal, con el que se obtiene la imagen virtual y más aumentada del objeto. El condensador es un sistema de lentes colocados por debajo del objeto que se está examinando, concentra los rayos luminosos en la preparación, dándole mayor iluminación. Se usa con los grandes aumentos, es decir que aumenta la iluminación del objeto. Se puede colocar a diferentes alturas para regular la uniformidad de la luz y su intensidad; se regula abriéndolo o cerrándolo. La parte mecánica está conformada por el píe, la columna, la platina, el tubo, el sistema de enfoque y la subplatina. El píe es la porción metálica que sostiene al microscopio, la forma de herradura es la más corriente. La columna es la parte que está por la parte inferior del pié, sostiene a la platina a la subplatina y al tubo, tiene a los lados los tornillos micrométrico y macrométrico, lo que permite enfocar exactamente la visión. La platina es una lámina horizontal con un orificio en su parte central, donde se coloca el corte que se quiere examinar, presenta un dispositivo mecánico que se llama carro lo que permite el examen metódico y completo de toda la lámina. El tubo, es un cilíndrico metálico, negro por dentro, que evita la reflexión de la luz, en su extremo superior se adapta al ocular y en el inferior al revólver con los objetivos. En la subplatina encontramos el condensador y el diafragma, estos dos elementos ayudan a obtener una mejor iluminación del campo de trabajo
Usos del Microscopio La observación al microscopio amerita que se cumplan varias condiciones a saber: 1.- Iluminación del objeto en cuestión 2.- Enfoque perfecto 3.- Preparaciones histológicas de buena calidad. Cuando se inicia el examen de un corte histológico, se debe colocar sobre la platina, teniendo en cuenta que el cubre objeto quede mirando hacia arriba, y asegurándolo por medio de los ganchos que tiene la platina, La iluminación del campo se logra por medio de fuentes luminosas diversas, en este caso se enciende el bombillo. La observación al microscopio se empieza primero con el objetivo de menor aumento, luego se procede a enfocar la preparación, utilizando el tornillo macrométrico, hasta observar los contornos imprecisos de la preparación y luego el micrométrico para completar el enfoque, este tornillo debe ser utilizado con sumo cuidado tratando de evitar darle más de una vuelta. Cuando se haya logrado el enfoque perfecto, se examina la preparación en toda su extensión para así obtener una idea del corte que se está estudiando, lo que permite en muchos casos hacer un diagnóstico del tejido, cuando ya está enfocado con el objetivo de menor aumento, se hace girar el revólver para colocar los diferentes aumentos, y sólo se debe mover el micrométrico ligeramente para así obtener un enfoque perfecto, para luego estudiar los detalles con el objetivo de mediano aumento, luego se pasará al objetivo de mayor aumento, con mucho cuidado para no quebrar las láminas, ya que sufriría el lente frontal. (En estas prácticas por razones didácticas, solo utilizaremos pequeño y mediano aumento) Es de buena costumbre que mientras se trabaja con el microscopio, se debe mantener una postura lo más vertical posible o ligeramente inclinado. OBJETIVO GENERAL DE LA PRÁCTICA. Al finalizar la práctica los estudiantes tendrán la competencia de manejar correctamente el microscopio óptico de modo que pueda observar imágenes nítidas, evitando la ruptura de las láminas por incorrecta manipulación y sentir fatiga por
inadecuada iluminación o por posturas inapropiadas. Además de identificar las técnicas de preparación histológica y de histoquímica empleadas. OBJETIVOS ESPECÍFIC0S. Manejar correctamente el microscopio óptico de manera que pueda observar las imágenes de manera nítida. Descartar los diferentes tipos de artefactos en las preparaciones histológicas, cuando éstas los contengan. Asumir conscientemente el hecho que los preparados histológicos nos dan imágenes bidimensionales de objetos tridimensionales. Identificar las diferentes técnicas de histoquímica o colorantes utilizados y las estructuras que se tiñen en los cortes histológicos. Identificar las diferentes técnicas histológicas de preparación empleadas y las estructuras que pueden ser observadas. CONTENIDO A DESARROLLAR DURANTE LA ACTIVIDAD Tipos de Coloración utilizada. Diferentes direcciones de los cortes. Pasos para la obtención de un corte histológico. Diferentes tipos de técnicas histológicas. Definir conceptos como basofilia, eosinofilia, elementos celulares, colorantes básicos y ácidos. Tipos de soluciones fijadoras Identificar las diferentes partes del microscopio Diferenciar estructuras histológicas tales como vasos sanguíneos, elementos celulares, diferentes tipos de tejido, diferentes tipos de ácinos, conductos excretores, diferentes tipos de glándulas.
ACTIVIDAD PRÁCTICA Fig 1 Arteria Elástica: Coloración Hematoxilina/Eosina. Aumento Menor (40 x). Señale: 1.- Las fibras elásticas como se tiñen con la H/E Fig.2: Arteria Elástica: Coloración Weigert. Aumento Menor (40 x). Señale: 1.- Las fibras elásticas como se tiñen con la coloración de Weigert..
Fig.3: Piel Delgada: Coloración Hematoxilina y Eosina. Aumento Menor (40 x). Señale: 1.- epitelio, 2.- Tejido Conectivo, 3.- folículo piloso. Fig. 4: Piel Delgada: Coloración Mallory Aumento Menor (40 x). Señale: 1.- Epitelio 2.- Tejido Conectivo 3.- Folículo piloso
Fig. 5: Medula Ósea: Coloración Supravital de Hematoxilina y Eosina con Tinta China. Aumento pequeño (40x). Señale: 1.-, Basófilos, 2.- Eosinófilas, 3.- Macrofagos Fig. 6: Apéndice: Coloración Rio Ortega. Aumento pequeño (40x). Señale: 1.- Las fibras reticulares que forman la armazón del tejido
Fig. 7: Longitudinal de la corona de un diente, Técnica por desgaste en sentido Longitudinal, cara lateral, Impregnación con Violeta de Dalia Aumento pequeño (40x) Señale: 1.- Esmalte, 2.- Dentina Fig.8: Transversal por desgaste, de la corona de un diente seco, Aumento pequeño (40x) Señale: 1.- Esmalte, 2.- Dentina
Fig. 9 : Transversal de Pulpa Dentaria, Coloración: Hematoxilina Eosina. Aumento Mediano (100x) Señale: 1.- Dentina en el techo de la cámara pulpar 2.- Capa de Odontoblastos 3.-Fibras colágenas 4.- Vasos Sanguíneos 5.- Nervios AUTOEVALUACIÓN. Mencione los diferentes tipos de técnicas histológicas. Que elementos celulares se observan en los cortes preparados por descalcificación Que elementos se observan en los cortes preparados por desgaste. Defina los términos: Basofilia, eosinofilia, metacromasia. Defina que son colorantes ácidos, básicos, Metacromáticos. Nombre las diferentes direcciones que pueden tener los cortes. Diga con que color se identifican los tejidos con la coloración de Mallory Diga con que color se identifican los tejidos con la coloración de Sales de Plata Diga con que color se identifican los tejidos con la coloración de H/E Diga con que color se identifica el núcleo, citoplasma celular y sustancia extracelular amorfa y figurada.