EMBARAZO Y NEONATOLOGÍA 1. Introducción 2. Diagnóstico del embarazo 3. Parámetros bioquímicos alterados durante el embarazo 4. Estudio del líquido amniótico para la detección y prevención de alteraciones 1. INTRODUCCIÓN Embarazo: estado fisiológico durante el cual se producen cambios metabólicos y bioquímicos reversibles tras el parto Muchas de las determinaciones que vamos a comentar se efectúan por técnicas ya descritas. 2. DIAGNÓSTICO DEL EMBARAZO -La gonadotropina coriónica humana (hcg) es una proteína compuesta por dos subunidades (a y ß). -Subunidad ß: es característica de esta hormona por tanto se utiliza para el diagnostico del embarazo. - [hcg] aumenta rápidamente al comienzo de la gestación y más tarde disminuye, especialmente en el tercer trimestre. -El análisis de ß-hCG se puede hacer en orina o en suero 2.1. Análisis en orina En orina: se puede detectar unos días después de la falta de la mestruación En suero: un día después de la implantación en el útero -Determinación cualitativa: rápido, fácil y fiable -Conviene realizarlo en la primera orina de la mañana Pruebas de inhibición de la aglutinación: o Se utiliza un anticuerpo anti-ßhcg que se añade a la orina, después se añaden unas partículas recubiertas de hcg. o Si hay ßhCG en la muestra, ésta se une a los anticuerpos formando un complejo antígeno-anticuerpo, no queda por tanto anticuerpo para unirse al antígeno de las partículas por lo éstas no se aglutinan. Ausencia de aglutinación: prueba positiva. o Si no hay ßhCG en la muestra, o hay poca, el anticuerpo puede reaccionar con las partículas produciendo aglutinación: prueba negativa. Pruebas de aglutinación directa de partículas de látex: o Se utilizan partículas de látex recubiertas de anticuerpo anti-hcg. 1
Si la muestra contiene hcg, se produce la aglutinación (resultado positivo). Pruebas de anticuerpos monoclonales inmovilizados: 2
2.2. Análisis en suero - Análisis cuantitativos - Métodos más utilizados: RIA y ELISA 3. PARÁMETROS BIOQUÍMICOS ALTERADOS DURANTE EL EMBARAZO 3.1. Proteínas totales 3.2. Inmunoglobulinas 3.3. Fracciones lipídicas 3.4. Fosfatasa alcalina 3.5. Hormonas: LH y FSH T 3 y T 4 PTH y vitamina D Estrógenos 3.6 Glucosa: Test de O Sullivan 4. ESTUDIO DEL LÍQUIDO AMNIÓTICO PARA LA DETECCIÓN Y PREVENCIÓN DE ALTERACIONES -El líquido amniótico baña el interior de la membrana interna de la placenta, el amnios -Amniocentesis: La cavidad amniótica puede someterse a punción con seguridad (amniocentesis) a partir de la semana 14 Procedimiento Tubos de muestra: sellados y protegidos de la luz (bilirrubina). Muestra: conservación en frigorífico o congelación Antes del análisis centrifugar 4.1 BILIRRUBINA EN EL LÍQUIDO AMNIÓTICO -Utilidad: prever incompatibilidad de Rh fetomaterna (enfermedad hemolítica del recién nacido) -Procedimiento: Barrido entre las longitudes de onda 350 y 750 nm. El líquido amniótico sin bilirrubina tiene una absorbancia alta a 350nm que va disminuyendo al aumentar la longitud de onda (línea basal). Si hay bilirrubina: aparece un pico ancho alrededor de 450-455 nm. La diferencia entre la absorbancia de ese valor y la línea basal a esa misma longitud de onda indica la concentración de bilirrubina. 3
4.2. FOSFOLÍPIDOS TENSIOACTIVOS EN EL LÍQUIDO AMNIÓTICO -Para que el niño respire tras el nacimiento es necesario que los pulmones hayan madurado adecuadamente durante la gestación desarrollando una especie de detergente que cubre los alvéolos, el surfactante pulmomar (disminuye la tensión superficial permitiendo el llenado de los alvéolos). -Principales componentes del surfactante pulmomar: fosfatidilcolina (lecitina) y fosfatidilglicerol. -Se sintetizan de manera apreciable, a partir de la semana 34-38 la cantidad de surfactante es suficiente para la respiración del niño. -Niños prematuros: síndrome de insuficiencia respiratoria. -Los fosfolípidos tensioactivos presentes en el líquido amniótico son un indicador de la madurez pulmonar fetal - En lugar de calcular la concentración de lecitina, se calcula la relación lecitina/esfingomielina (L/S). La esfingomielina es un fosfolípido cuya tasa de producción es bastante constante durante el tercer trimestre, por ello se usa como referencia. Métodos analíticos: Análisis cromatográfico de fosfolípidos -Extracción de fosfolípidos de líquido tensioactivo y concentración del extracto -Separación de los fosfolípidos de la muestra por cromatografía en capa fina, así conseguimos que se separen la lecitina y la esfingomielina. -Relado de la placa: pulverización con ácido sulfúrico + sulfato amónico y revelado por calor. Aparecen manchas que corresponden a los distintos fosfolípidos. - Con un densitómetro se calcula la concentración relativa de lecitina y esfingomielina, resultado: L/S - L/S > 2: madurez pulmonar L/S < 1,5 inmadurez pulmonar - El fosfatidilglicerol contribuye a las propiedades del surfactante, su presencia mejora el diagnóstico de la relación L/S. Test de estabilidad de la espuma - Muy utilizado: análisis cualitativo - Fundamento: propiedad del surfactante de formar espuma estable cuando se agita en presencia de metanol o etanol. - Método: mezclar partes iguales de líquido amniótico sin centrifugar y etanol al 95%, agitar 15, dejar en reposo 15 minutos. - Si aparece un anillo completo de espuma con burbujas: madurez pulmonar. 4
Inmunoensayo de fluorescencia de polarización (FPIA) - Se basa en la medida de la microviscosidad de los lípidos del líquido amniótico que está relacionada con la tensión superficial. - La fluorescencia de polarización se basa en la medida de la cantidad de luz fluorescente polarizada que se detecta cuando un marcador fluorescente es excitado con luz polarizada, - El grado de fluorescencia está relacionado con la velocidad de rotación del marcador fluorescente (a menor velocidad mayor fluorescencia). - Al añadir el marcador fluorescente al líquido amniótico, su velocidad de rotación dependerá de la viscosidad del medio. A más surfactante, mayor microviscosidad del líquido, más se opondrá a la rotación del marcador por lo que éste girará más lentamente y mayor será la fluorescencia. PROBLEMAS NEONATALES: BILIRRUBINA -Existen diversas causas que favorecen la elevación de los niveles plasmáticos de bilirrubina en los recién nacidos. -La bilirrubina puede atravesar la barrera hematoencefálica y originar lesiones neurológicas produciendo una alteración que se denomina kernicterus - Determinación de bilirrubina urgente :determinación directa de la bilirrubina total midiendo la absorbancia a 455nm mediante un espectrofotómetro dicromático llamado bilirrubinómetro. Preguntas de revisión 1. Complete: El diagnóstico del embarazo se basa en la presencia, en sangre o en orina, de... 2. Suponga que está realizando una prueba de inhibición de la aglutinación para diagnosticar un embarazo. Si se produce aglutinación el resultado es positivo? Justifique su respuesta. 3. En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados participan tres anticuerpos diferentes. Identifíquelos. Cuál de ellos está marcado con partículas de color? Cuál es móvil? 4. En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados, debe aparecer siempre al menos una línea para qué sirve? cómo se forma? 5. En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados Cómo se forma la banda que nos indica que el resultado es positivo? 6. Cómo se lleva a cabo el análisis cromatográfico de la relación L/S? 7. En qué se basa el test de estabilidad de la espuma para determinar la madurez pulmonar? 5