Métodos rápidos alternativos a la ISO 6579 para el análisis de Salmonella Alfredo Corujo Fernández Project Manager Food Safety Nutreco España
TEMAS Métodos rápidos: Consideraciones generales Sistemas basados en pruebas ELISA: ELFA VIAS DIFUSIÓN Sistemas basados en, ph (movilidad) Sistemas basados en separación Inmunomagnética Sistemas basados en Bacteriófagos Sistemas basados en Hibridación Sistemas basados en PCR Sistema serotipado basado en microarrays Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR Tendencias futuras en la detección de patógenos: Biosensores
Métodos Rápidos: Consideraciones generales Se puede decir que método rápido es aquel que es más rápido, sencillo o confiable que lo convencional. Clasificación en áreas de acuerdo a lo que se busca: Sistemas para facilitar la toma de muestras Métodos para ayudar al procesamiento de las muestras Sistemas de cuantificación microbiológica Métodos para identificación y cuantificación de microorganismos Sistemas especiales para análisis de muestras de aguas, ambientales y superficies Sistemas de identificación mediante métodos moleculares Métodos inmunológicos para detección y/o cuantificación de microorganismos Otros métodos misceláneos
Métodos Rápidos: Consideraciones generales CARACTERISTICAS DE UN MÉTODO RÁPIDO IDEAL Preciso Rápido y productivo Económico Aceptable Realización simple Entrenamiento Reactivos comunes Reputación de la compañía Buen servicio técnico Requerimientos de espacio y utilidad óptimos
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA
Valores para el control negativo: OD 0.030 Valores para el control positivo: OD 0.900-1.700. Se considera la muestra POSITIVA: OD 0,200.
ASSURANCE GOLD SALMONELLA EIA Resultados el día siguiente Para alimentos procesados. Alimentos crudos & altamente contaminados necesitan incubación adicional de un día al otro. Dos opciones para lectura de los resultados del test: Los resultados pueden ser leídos visualmente o por instrumentos con lectora de microplaca.
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow) REVEAL (Neogen) Reveal Reveal SE Reveal 2.0
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow) Singlepath (Merck) Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow) VIP (Biocontrol)
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (ELFA) Sistema VIDAS (Biomerieux) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales (Calzas, Heces...)
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS VIA Sistema TECRA (Biotrace) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D - +
SISTEMAS BASADOS EN INMUNOCONCENTRACIÓN + ELISA (ELFA) Sistema VIDAS (Biomerieux) Salmonella Matrices: Ingredientes Alimentos
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (difusión) 1-2 TEST (Biocontrol) Salmonellas móviles Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales
SISTEMAS BASADOS EN, ph (MOVILIDAD) OSRT (OXOID) Salmonellas móviles Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales Cada test contiene 2 tubos : Tubo A (Azul) contiene Rappaport- Vassiliadis modificado como medio selectivo, y Lysine Iron Cystine Rojo neutro como medio indicador. Tubo B (Rojo) contiene Lysine Deoxycholate modificado medio selectivo y Brilliant Green modificado como medio indicador.
SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA Sistema DYNAL BIOTECH (Dynabeads) Salmonella spp+ Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D
SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA Sistema Pathatrix Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales L+D
SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS VIDAS UP SALMONELLA CONFIRMACIÓN Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras L+D
SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS RapidCheck Select S.enteritidis (SDIX) Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales
SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS RapidCheck confirmación S.enteritidis (SDIX) Confirmación de cepas S. enteritidis
SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓN HybriScan Salmonella (Sigma- Aldrich) Muestras con OD% < 10 son consideradas negativas. Muestras con OD% > 10 < 20 son consideradas dudosas. Muestras con OD% 20 son consideradas positive.
SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓN Lumiprobe 24 (EUROPROBE)
GeneQuence (NEOGEN) SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓN
SISTEMAS BASADOS EN PCR
SISTEMAS BASADOS EN Real Time PCR (BAX System)
SISTEMAS BASADOS EN RT- PCR MX3005P (STRATAGENE) LIGTHCYCLER (ROCHE) iq-check ABI PRISM 7900HT (BIORAD) (APPLIED BIOSYSTEMS)
SISTEMAS BASADOS EN PCR (Assurance GDS) Sistema Multiplex (Biocontrol): Matrices: Ingredientes Alimentos Muestras ambientales Combina concentración de muestra y detección de DNA
SISTEMAS BASADOS EN PCR (Led Active Blue) Sistema Fotoactivación ( ib-applied science): EMA:Ethidium bromide monoazide PMA: propidium monoazide
SISTEMAS SEROTIPADO BASADO EN MICROARRAYS PREMITEST SALMONELLA CHECK- POINTS AT READER
Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR Muestra positiva REP-PCR Identificación cepas de Salmonella. Indentificación de fuentes de contaminación ambiental
Tendencias futuras en la detección de patógenos SISTEMAS BASADOS EN BIOSENSORES Staphylococcus aureus Salmonella spp. E. coli Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus Clostridium perfringens Listeria monocytogenes Shigella spp. Oligonucleotidos específicos de virulencia E.coli O157:H7 (hly A, eae A) Salmonella spp (inv A, agf B) Vibrio spp. Campylobacter
CONCLUSIONES Existen diferentes métodos alternativos más rápidos que la ISO. La elección del método dependerá de la matriz a analizar. El método seleccionado debería estar validado para la matriz problema. Para matrices muy contaminadas se recomiendan protocolos de 48 horas. Existen pocos métodos alternativos para matrices procedentes de la producción primaria, se necesitan métodos rápidos para este tipo de muestras. Las industrias procesadoras de alimentos deberían implementar métodos alternativos validados de cara a cumplir la legislación futura en cuanto al control de Salmonella en producto final.
MUCHAS GRACIAS