Uso de Trichoderma y Glomus para el control de enfermedades de la madera en vid Dra. Rufina Hernández Martínez 1
Enfermedades de la madera
Agentes causales: hongos Eutypa lata Botryosphaeria spp Phaeomoniella chamydospora Phaeoacremonium spp Stereum hirsutum Fomitipora punctata Cylindrocarpon
Enfermedad Eutipiosis Enfermedad de Petri Yesca joven Yesca Muerte regresiva por botriosferia Pie negro Hongos asociados Eutypa lata P. chlamydospora P. aleophillum P. aleophillum P. chlamydospora F. punctata P. aleophillum P. chlamydospora Phomopsis viticola Fomitiporia sp Botryosphaeria spp Cylindrocarpon spp. Principales síntomas Lesiones necróticas en forma de cuña en tallos. Crecimiento débil y lento, tronco con menor diámetro del normal, entrenudos más cortos y menor masa foliar. Hojas con patrón atigrado, puntos color marrón oscuro a negro en el xilema que son observables cuando se realiza un corte transversal en los troncos o tallos. Superposición de los síntomas producidos por la yesca joven y la enfermedad de Petri, junto con podredumbre blanca (causado por Fomitiporia sp), que gradualmente vuelve el tronco una esponja quebradiza. Cancro en el tejido vascular de la madera en forma de cuña, necrosis de la madera, progresiva falla de apertura de yemas y muerte regresiva En las raíces causa pudriciones. Se observan lesiones negras, agujeradas y necróticas. Tejido necrótico
Ciclo de las enfermedades Daño en el tejido: necrosis, pudrición Muerte regresiva y decline Liberación de esporas en invierno y primavera durante las lluvias Madera muerta infectada Herida fresca de poda Cuerpos fructíferos en madera muerta
Medidas de control Retirar y quemar la madera infectada dentro del viñedo. Cortar y retirar los brazos muertos y cordones de la viña durante la latencia. Usar doble poda. Podar tarde en el período de latencia para promover una rápida cicatrización de las heridas. Hacer los cortes grandes directamente después de una lluvia. Tratamiento de las heridas de poda Benomilo (benlate) y fusilazole (90% de reducción) 6
Medidas de control No existen tratamientos fungicidas Plantar vides sanas sin ningún signo de cambio de color en el tejido vascular, el material de propagación (sin madera oscura). Tratamiento de agua caliente 53 C por 30 minutos, seguido de 30 minutos en agua fría con benomilo (100 g/100 l de agua) Trichodermas; 200 g/100 l de agua) (Fourie y Halleen, 2006). 7
Biocontrol Uso intencional de organismos para suprimir las poblaciones de patógenos. Organismos que activan el sistema de defensa de las plantas. Krishna y Gardener, 2006 8
Trichoderma como agente de Competencia por recursos contra otros hongos Antibiosis (compuestos volátiles, no volátiles, enzimas) Micoparasitismo Estimulación del sistema de defensa de la planta biocontrol 9
Aislados locales de Trichoderma sp. 10
Ensayos de competencia contra hongos de la madera 11
Evaluación de actividad quitinasa en medio suplementado con quitina coloidal y azul de bromocresol. 12
Trichoderma T3 T5 T6 Patógeno Phaeoacremonium +/- + + aleophilum Phaeomoniella + + + chlamydospora Cylindrocarpon sp. - - +/- 13
Tolerancia a fungicidas detrichoderma
Producción de esporas de Trichoderma 15
Aplicación de hongos como agentes de control biológico FORMA DEL AGENTE Esporas Micelio VENTAJAS Fácil producción Resistencia al secado - Factibilidad de producción - Incremento de población en suelo DESVENTAJAS Bajo nivel de germinación en suelo (sensibilidad a cambios de humedad, dependencia de nutrienes exógenos, forma micelial efectúa el micoparasitismo) No hay estudios en relación con la producción viabilidad
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Tratamientos en viñedo comercial Donde: Tratamiento Cepa T3 T. harzianum T5 T. gamsii T6 T. gamsii TESTIGO Agua MIX Mix Línea I x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x T6 T5 T3 TESTIGO MIX Línea II x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x TESTIGO T3 T5 MIX T6 Línea III x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x T5 T6 T3 TESTIGO MIX Línea IV x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x T5 MIX TESTIGO T3 T6 Arreglo completamente al azar, cuatro repeticiones. 18
Poda de formación para muestreo 8 de febrero 19
Inoculación de Trichoderma spp. en condiciones de campo Suspensión de 2x10 6 esporas/ ml + Polyether Polymethysiloxane. 12 de febrero. 20
Muestreos para recuperar inoculo de campo 21
Muestreos en viñedo comercial 3er muestreo: 4 de junio Recuperación en placa PDA + 100 mg/l de cloranfenicol 22
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Aislamientos recuperados de viñedo comercial 1er muetreo 2do muetreo Líneas Líneas Trat. 1 2 3 4 Trat. 1 2 3 4 T1 3/3 2/3 1/3 1/3 T1 0/3 2/3 0/3 2/3 T2 1/3 0/3 0/3 0/3 T2 1/3 0/3 0/3 0/3 T3 0/3 0/3 0/3 0/3 T3 0/3 0/3 0/3 0/3 Control 0/3 0/3 0/3 0/3 Control 0/3 0/3 0/3 1/3 T5 2/3 1/3 1/3 3/3 T5 2/3 0/3 1/3 1/3 31 % de inoculo de tricodermas 21 % de inoculo de tricodermas 24
Aislamientos recuperados de viñedo comercial 3er muetreo Líneas Trat. 1 2 3 4 T1 1/3 0/3 0/3 0/3 T2 0/3 0/3 0/3 0/3 T3 0/3 0/3 0/3 0/3 Control 0/3 0/3 0/3 0/3 T5 0/3 0/3 0/3 0/3 0.2 % de inoculo de tricodermas 25
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Ensayo en vivero para el biocontrol de hongos de la madera: Trichodermas y micorrizas
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Conclusiones Se aislaron cepas de Trichoderma locales con potencial para ser utilizadas contra hongos patógenos de la madera. Se identificaron las cepas como T. harzianum, T. gamsii, T. artroviridae y T. asperellum. Las cepas locales de Trichoderma fueron superiores a las cepas comerciales contra hongos fitopatógenos. Las especies de Trichoderma locales tienen potencial para ser usadas en combinación con fungicidas. La madera de vid y jugo V8 son buenos para la producción de esporas de Trichoderma, por lo que pueden ser utilizados para experimentos de escalabilidad para su producción masiva. 35