Inducción de embriogénesis somática en Narcissus papyraceus cv. Shirazi. Curso: Crecimiento y cultivo vegetal 2008. Integrantes:Garcia Luciana Perez Diaz Juan Pablo
Introducción: Fitorregulador: Es toda sustancia orgánica, distinta de los nutrientes, que a bajas concentraciones (menores que 1 a 10 mm.) promueven, inhiben o modifican el crecimiento o el desarrollo del vegetal.
Fitorreguladores utilizados: Auxinas: -Se denominan auxinas a los compuestos caracterizados por su capacidad de inducir elongación en células de vástagos. Ejemplos: ac. 3-indolacetico (AIA), ac. 2,4 diclorofenoxiacetico (2,4-D), (, ac. naftalenacetico (ANA), ac. Indol-3-butirico (IBA)
Giberelinas: -Todas son ac. Carboxílicos diterpenoides tetracíclicos, se las denomina ac. Giberélicos y se las representa GAs -Estimulantes del crecimiento al igual que las auxinas,coincidiendo con éstas en algunos de sus efectos biológicos.
Citoquininas: -Se definen como compuestos naturales o de síntesis que en presencia de adecuadas concentraciones de auxinas inducen la división celular en cultivos de tejidos vegetales. -Ejemplos: kinetina, bencilaminopurina, etc.
Narcissus papyraceus: Pertenece a la familia Amaryllidaceae. Posee valor ornamental y propiedades farmacológicas, derivadas de sus alcaloides, con actividades antivirales y antitumorales.
Métodos de propagación en Narcissus Los métodos tradicionales no son tan efectivos en este tipo de plantas debido a que: 1Necesitan 1.Necesitan muchos años para desarrollarse. 2.Los bulbos que producen se infectan facilmente. La embriogénesis somática provee de un método rápido innovador y económico para la producción de nuevas plantas.
Embriogénesis somática: Involucra la formación, desarrollo y mantenimiento de embriones y la posterior obtención de plantines. Se parte de una cel. somática bipolar. Puede ser directa o indirecta.
Objetivo de la investigación: Encontrar el mejor protocolo para la inducción de la embriogenesis somática y regeneración en Narcissus papiraceus.
Obtención de los explantos: Se esterilizaron las catáfilas de los bulbos en Ridomil (15 mg/l) por 15, luego en sol. comercial de Cl (1,5% v/v) por 20, seguido por una agitación durante 4 en sol. de HgCl2. Los explantos se lavaron 3 veces con agua destilada estéril y se cortaron en segmentos de 10mm de largo y se trasfirieron a los medios de cultivo para la inducción ió de bulbillos y embriones somáticos.
Medios de cultivo utilizados: Para uno de los set de experimentos se utilizó el medio Murashige and Skoog (MS), suplementado con:mio-inositol inositol (100mg/l), ac. nicotínico (5mg/l), piridoxina en HCl (0.5mg/l), tiamina en HCl (0.5mg/l).
Para el otro set de experimentos se uso el medio Nitsch suplementado con:biotina (0.05mg/l), ac. fólico (0.5mg/l), glicina i (2mg/l), mio-inositol inositol it (100mg/l), ac. nicotínico (5mg/l), piridoxina en HCl (0.5mg/l), tiamina i en HCl (0.5mg/l).
Inducción de embriogénesis somática: Para la inducción los cultivos fueron mantenidos inicialmente en oscuridad por 2 semanas a 24ºC. Luego se transfirieron los cultivos a condiciones de luminosidad id d con 16 hs. de fotoperiodo diario i por 8 hs. de oscuridad manteniendo cte. la temperatura. Se usó agar al 7% para solidificar el medio y se mantuvo el ph 5,6. Los explantos fueron subcultivados cada 4 semanas. s. El nº de bulbillos y embriones inducidos por explanto fue registrado luego de 10 semanas del cultivo inicial.
Tratamientos utilizados:
Resultados de la embriogénesis somática: Tratamiento A vs. B: El tratamiento A produjo: -Estructuras hinchadas y translúcidas similares a los embriones somáticos tempranos. -El color de los tejidos cambio a amarillo después de 3 semanas.
El tratamiento B produjo: -Embriones globulares. El tratamiento B produjo mas embriones por explanto que el A.
Estos resultados indicaron que para inducir la embriogénesis bi i somática ái es necesario agregar 2,4-D 24D y BAP en iguales concentraciones. Tratamiento C vs. D: -El tratamiento D produjo mas embriones somáticos que el C. Tratamiento E: -Produjo embriones escamosos o en catáfilas después de 8 semanas.
Resultados en la regeneración de bulbillos: Tratamientos utilizados:
Tratamiento G vs. H: -El tratamiento G produce mas bulbillos por explanto que el H.
Tratamiento I: -A las 8 semanas los explantos se hincharon y dieron lugar a bulbillos en la base de los bulbos escamosos. Tratamiento J vs. K: -Ambos produjeron la misma cantidad de bulbillos por explanto. Tratamiento L vs. M: -El tratamiento L produjo un poco mas de bulbillos que el M.
Tratamiento N vs. P: -Ambos tratamientos producen regeneración vía bulbos.
Tratamiento R: -Produjo hinchazón de los explantos a las 2 semanas de iniciado el cultivo.
Resultados en la germinación y formación de plantines: Los embriones somáticos fueron transferidos a un medio MS sin fitorreguladores. Los cuales germinaron a las 2-3 semanas y el desarrollo de las raíces ocurrió a las 12 semanas.
Los bulbillos fueron transferidos a un medio MS (la mitad de fuerte) conteniendo IBA (1 mg/l). Las raíces se desarrollaron a las 8 semanas en la base de los bulbillos.
Conclusiones: 1. El mayor nº de bulbillos se produjo Nitsch conteniendo BAP (2,2 mg/l) y 2,4-D (1,1mg/l). 2. El mayor nº de embriones somáticos se observaron en el medio MS conteniendo GA3 (0,5mg/l) BAP (1,6mg/l) y 2,4-D (1,6mg/l). 3. Altas concentraciones de BAP y 2,4-D producen embriones somáticos y bulbillos.