Taula Rodona: Sífilis 2013 Les proves Juliana Esperalba Esquerra Servei de Microbiologia Hospital Universitari Vall d Hebron
Introducció: Treponema pallidum subsp. pallidum Ordre Spirochaetales Família Spirochaetaceae Gènere Treponema T. pallidum subsp. pallidum Morfologia helicoidal amb flagel > 95% homologia entre espècies (morfologia i antigenèticament) Gram negatius (*) Paràsits obligats del home, únic reservori
Diagnòstic Clínica Sífilis primària / secundària amb lesions Cribatge / Seguiment posttractament Neurosífilis Sífilis congènita Tècnica diagnòstica Diagnòstic directe / indirecte Mostra Local / sistèmica
Diagnòstic DIRECTE TINCIONS I MICROSCOPIA CULTIU BIOLOGIA MOLECULAR CAMP FOSC CONTRAST FASES GRAM PCR FLUORESCÈNCIA TEIXITS SEQÜENCIACIÓ
Diagnòstic DIRECTE TINCIONS I MICROSCOPIA CAMP FOSC GRAM FLUORESCÈNCIA TEIXITS 1. Sense tincions Microscopia de camp fosc: Mostres locals de lesions < 20 minuts des de la recollida de la mostra motilitat (làbil: oxigen, calor, ph no fisiològic, desecació) 2. Tinció de Gram NO (diàmetre < 1 μm) 3. Tinció fluorescent Microscopia de fluorescència DFA TP (direct fluorescent antibody for T. pallidum): Mostres locals de lesions Secades: no necessita visualització immediata Pràcticament no s utilitza 4. Tincions de teixits DFAT TP (direct fluorescent antibody tissue for T. pallidum) IHC (immunohistochemistry) Per mostres de teixits lesionats: cervell, gastrointestinals, placenta, cordó umbilical o pell. Diagnòstic de fases tardanes o sífilis congènita
Diagnòstic DIRECTE BIOLOGIA MOLECULAR PCR (polymerase chain reaction): Tècnica diagnòstica més nova Mostres de LCR, genitals, líquid amniòtic i sang (poca sensibilitat en fases avançades) Ens permetria diferenciar espècies HUVH: PCR multiplex a temps real: RealCycler HSVT G v.2 (control intern i control positiu) Dianes: T. pallidum supesp. pallidum i Haemophilus ducrey PCR SEQÜENCIACIÓ
Diagnòstic INDIRECTE TREPONÈMIQUES EIA (enzyme immunoassay) TPHA (Treponema pallidum haemagglutination) FTA ABS (fluorescent treponemal antibody absorption) Immunoblots NO TREPONÈMIQUES RPR (rapid plasma reagin) VDRL (venereal disease research laboratory)
Diagnòstic INDIRECTE: TREPONÈMIQUES Antígen de T. pallidum subsp. pallidum per detectar Ac específics Detecció d Ac IgM: útil en el diagnòstic de sífilis congènita. No són útils pel seguiment del tractament o per diagnòstic de reinfeccions ja que són positius durant molts anys/al llarg de la vida. Falsos positius Immunoassaigs ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) CLIA (chemiluminescence) TPHA (Treponema pallidum haemagglutination) Hemaglutinació FTA ABS (fluorescent treponemal antibody absorption) IFI Immunoblots
Treponèmiques: Cribatge
Treponèmiques: TPHA i FTA ABS
Diagnòstic INDIRECTE: NO TREPONÈMIQUES RPR / VDRL Antígen = cardiolipina + colesterol + lecitina Detecten Ac IgG i IgM en resposta a cardiolipina o altres lípids segregats per les cèl lules infectades o pels treponemes. Reacció immunitària: aglutinació de les partícules lipídiques VDRL necessita lupa RPR utilitza partícules de carbó que la fan visible Ràpid i senzill Tècniques quantitatives Útil pel seguiment del tractament Baixa sensibilitat en fase primària o terciària Falsos positius Efecte prozona
Diagnòstic INDIRECTE: RPR
Algoritme HUVH Sèrum LCR Sèrum per congènita EIA TPHA RPR FTA ABS FTA ABS VDRL* EIA (mare) IgM (IFI) (nounat) PCR
Diagnòstic INDIRECTE
Diagnòstic INDIRECTE Sensibilitat Especificitat Fase Primària Secundària Latència Terciària VDRL 78 100 95 71 98 RPR 86 100 98 73 98 WHO FTA ABS 84 100 100 96 97 TPHA 88 100 100 94 EIA 92 100 99 100 99
En resum Sífilis primària Sífilis secundària Sífilis latent (< 1 any) Sífilis latent o terciària (> 1 any) Neurosífilis Congènita Directe: lesions Directe: lesions Indirecte: Directe: PCR Directe: PCR Indirecte: T positives Indirecte: Precoç: no detecció Ac Indirecte: 100% sensibilitat T i NT positives NT van disminuint NT positives o negatives Clínica Indirecte: T sèrum + FTA ABS VDRL Control embaraç NT falses IgG > 6m IgM
Per finalitzar... Diagnòstic serològic: dos sèrums mínim Gran quantitat de tècniques per un diagnòstic Dificultat en la interpretació dels resultats Reinfeccions Valor de la IgM en sífilis aguda (no congènita) Gràcies per la vostra atenció