ALGORITMO DE ANÁLISIS: ELECCIÓN DE LA PRUEBAS O INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO. Eva Barrios Noviembre 2.014

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Gregorio Lucero Velázquez
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1 ALGORITMO DE ANÁLISIS: ELECCIÓN DE LA PRUEBAS O INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO Eva Barrios Noviembre 2.014

2 SOCIEDAD VENEZOLANA DE HEMATOLOGÍA EDUCACIÓN MÉDICA CONTÍNUA DECLARACIÓN DE POTENCIALES CONFLICTOS DE INTERESES

3 DONACIÓN DE SANGRE BCC Research HLC008F The Blood Industry MARCH 2008

4 TRANSFUSIÓN Calidad de las unidades (LIBRES DE AGENTES INFECCIOSOS) Disponibilidad (REDUCIR DESCARTE)

5 REDUCCIÓN DEL RIESGO TRANSFUSIONAL SELECCIÓN DEL DONANTE GESTIÓN DE CALIDAD DISMINUCIÓN DEL PERÍODO DE VENTANA: KITS > SENSIBILIDAD BIOLOGÍA MOLECULAR INACTIVACIÓN VIRAL

6 REDUCCIÓN DE DESCARTE DE UNIDADES CINÉTICA DE LA INFECCIÓN MARCADORES SEROLÓGICOS SELECCIÓN DE LAS PRUEBAS INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

7 Marcadores de infección por HBV Busch MP y Col. Transfusion 2000; 40 (2):

8 Marcadores de infección por HCV Busch MP y Col. Transfusion 2000; 40 (2):

9 Marcadores de infección por HIV

10 DESPISTAJE INFECCIOSO Pruebas basadas en la detección de Ags y/o Acs como respuesta a la presencia de agentes infecciosos (ELISA CMIA FIA) Pruebas basadas en la detección del material genético viral, inclusive previamente a la aparición de Anticuerpos o presencia de partículas virales circulantes (NAT)

11 SCREENING SEROLÓGICO HBV AgSHB Anti AgSHB Anti CoreHB Neutralización HCV Ac/Ag (core) Blot Anti HCV HIV Ac/Ag (p24) Blot Anti HIV A D N A R N Chagas Anti T. cruzi (IgM/IgG) IFA HTLV Anti HTLV Sífilis Anti T. pallidum FTA VDRL

12 DETECCIÓN Y/O DIAGNÓSTICO

13 ALGORITMO ANÁLISIS MARCADOR SEROLÓGICO NO REACTIVO REACTIVO REANÁLISIS POR DUPLICADO NO REACTIVO REACTIVO 2da. MUESTRA

14 FINALIDAD DEL ENSAYO DETECCIÓN ANÁLISIS INTERPRETACIÓN

15 PRUEBAS DE LABORATORIO * 100 % Sensibilidad * 100 % Especificidad * Reproducible * Sencilla * Rápida y automatizable * Sin lecturas subjetivas * Económica LA PRUEBA IDEAL NO EXISTE

16 RIESGO DE TRANSMISIÓN PREVALENCIA INCIDENCIA ÍNDICE DE POSITIVIDAD

17 índices DE POSITIVIDAD AgSHB Anti CoreHB Anti HCV Ag/Ac HCV Ag/Ac HIV Anti HTLV Anti Chagas Anti T. pallidum VDRL Reactivos 0,35 3,38 0,12 0,16 0,15 0,17 0,32 1,17 1,16 Indetermin 0,07 0,57 0,34 0,15 0,28 0,09 0,37 0,26 0,01 n: (SC) n: (PLF)

18 ESTABLECER ALGORITMO DE ANÁLISIS 1.- Evaluación comparativa de kits (diferentes marcas diferentes metodologías ELISA vs. CMIA): Identificar índices de S y E diagnóstica Establecer índices de Reanálisis Predictivo Identificar índices de Especificidad Relativa Establecer Límites de Detección 2.- Conocer la tendencia (evaluaciones inter e intralaboratorio CCI)

19 ESTABLECER ALGORITMO DE ANÁLISIS 3.- Establecer Relación de Positividad sugestiva de resultados Falsos Positivos 4.- Caracterización de las muestras (complementar evaluaciones con pruebas confirmatorias) 5.- Identificar causas de discrepancias serológicas 6.- Interpretación de Resultados

20 EVALUACIÓN PRUEBAS % ESPECIFICIDAD DIAGNÓSTICA % ESPECIFICDAD RELATIVA AgSHB Anti CoreHB Anti HCV Ag/Ac HCV Ag/Ac HIV Anti HIV Anti Chagas Anti HTLV VDRL 98 N/E Anti T. pallidum 99 98

21 DISCREPANCIAS SEROLÓGICAS

22 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 1.- CRITERIOS DE FABRICANTE 2.- TENDENCIAS DE LAS CORRIDAS 3.- METODOLOGÍA MANUAL O AUTOMATIZADA 4.- EVALUACIÓN DE PRUEBAS EN EL LABORATORIO 5.- COMPARACIÓN DE RESULTADOS ENTRE MARCAS COMERCIALES DE LA MISMA TÉCNICA Y/O TÉCNICAS DIFERENTES (ELISA/CMIA) 6.- IMPACTO DEL USO DE KITS DE 4TA GENERACIÓN 7.- PRUEBAS CONFIRMATORIAS NAT

23 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ESTATUS SEROLÓGICO RELACIÓN DE POSITIVIDAD REACTIVO > 1,1 NO REACTIVO < 0,9 NO CONCLUYENTE > 0,9 < 1,1 IP > 1,1 < 2,0

24 ALGORITMO ANÁLISIS MARCADOR SEROLÓGICO IP < 0,9 IP =/ > 0,9 < 2,0 IP < 0,9 IP > 2,0 REANÁLISIS REANÁLISIS IP < 0,9 IP =/ > 0,9 < 2,0 IP < 0,9 IP > 2,0 NO REACTIVO INDETERMINADO

25 ESTRATEGIAS CONTROL DE ETAPAS PROCESO: HEMOVIGILANCIA: garantizar la seguridad transfusional TRAZABILIDAD: seguimiento y control INFECCIÓN: INDICES DE POSITIVIDAD PREVALENCIA/INCIDENCIA PRUEBA: SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

26 ESTRATEGIAS Evaluar pruebas utilizadas en el Laboratorio Establecer RP para cada marcador Utilizar kits de última generación Contar con kits de generación comparable de dos marcas comerciales Validez Internacional Registros y almacenamiento de muestras

27 Preguntas?

28 Tres Barreras Protectoras Selección de Donantes Análisis (despistaje infeccioso) Inactivación/Remoción adapted from: N Dhingra, WHO Conference on SARS, Kuala Lumpur, June 2003

29 Riesgo estimado de infección viral (contaminación en donantes seronegativos) 7 en 10 donaciones estudiadas Período de Ventana Variantes Virales Seroconversión Errorres Lab Atípica VHB ( %) <0 (0%) 1( %) 1-3( %) VHC 80( %) <1(<1.1-<0.9%) 0-20(0-21.9%) 1.2(0-21.9%) VIH 15(93.7%) <0.6(<3.7%) <0.1(<0.6%) 0.4(2.5%) HTLV 15 (93.7%) <1 (<6.2%) 1(6.2%) 0.8(5%) Total < ( %) (<0.3-<0.5%) (0-10.6%) ( %) ***Transfusion 2002;42,9S:8S. Busch y col. Applications of molecular biology to blood Transfusion. AABB,1997:123-76

30 AUMENTO DE SENSIBILIDAD EN LA DETECCIÓN SEROLÓGICA DE VIH Técnica Antígeno 1ª generación Lisado viral VIH-1EIA 2ª generación Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 EIA/ELFA 3ª generación Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 y antígeno VIH-1 del grupo O EIA/ELFA 4ª generación Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH- 1 y VIH-2 y VIH-1 "O", y anticuerpos para detectar el Ag p24

31 CBER-LICENSED (Center for Biologics Evaluation and Research-) HIV DONOR SCREENING TESTS Test/Company Method Indication Date Abbott RealTime HIV-1 Amplification Kit Polymerase chain reaction (PCR) Donor screen 05/11/2007 HIV-1 RT PCR Biolife PCR Donor screen 01/03/2007 HIV ½ STAT Pak Chembio DiagnosticSystems Rapid immunoassay Donor screen 05/25/2006 ADVIA Centaur Siemens Microparticle chemiluminomet Donor screen 05/18/2006 Cobas AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Roche Molecular Systems PCR Donor screen 05/11/2006 Cobas AmpliScreen HIV-1 Test RocheMolecular Systems, Inc., Pleasanton, CA PCR Source plasma donors, other living donors, and organs 12/20/2002 Procleix-Gen-Probe San Diego, CA HIV-1/HCVNucleic acid test TMA Source plasma donors, living organ donors and cadaveric samples 2/8/2002 UltraQual HCV RT-PCR Assay, National Genetics Institute, Los Angeles, CA PCR Donor screen 9/18/2001 Coulter HIV-1 p24 Ag Assay; HIV-1 p24 Antigen Test System, Coulter Corporation, Miami, FL EIA Donor screen/prognosis and kit 3/14/1996 HIVAB HIV-1 EIA -Abbott Laboratories, Abbott Park, IL EIA Donor screen 3/1/1985 Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 (rdna) EIA,Abbott Laboratories, Abbott Park, IL EIA Donor screen 2/14/1992 Vironostika HIV-1 Microelisa SystembioMerieux, Inc., Durham, NC EIA Donor screen 12/18/1987 Genetic Systems rlav EIA, Bio-Rad Laboratories Blood Virus Division, Redmond, WA EIA Donor screen 4/25/1990 Genetic Systems HIV-2 EIA, Bio-Rad Laboratories Blood Virus Division, Redmond, WA EIA Donor screen 6/29/1998 Genetic Systems HIV-1/HIV-2 Peptide EIA, Bio-Rad Laboratories Blood Virus Division, Redmond, WA EIA Donor screen 12/9/2000

32 Utilidad de las pruebas a nivel VIH* molecular Anticuerpos Detección ADN/ARN Reducción P.V. 22 días 11 días 50% HCV** 82 días 23 días 72% HBV*** 59 días 34 días 42% *Transfusion 2003; 43: **Schreiber GB et al For the retrovirus Epidemiology Study. ***Transfusion 2002;42,9S:8S.

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