INFORME DE RESULTADOS-PRUEBA DE PATERNIDAD T. 976 22 11 33 WWW.BIOSALUD.ORG RESIDENCIAL PARAÍSO, 9 50006 ZARAGOZA -SPAIN-
INFORME DE RESULTADOS-PRUEBA DE PATERNIDAD Han sido remitidas al Centro de Análisis Genéticos, dos muestras dubitadas de mucosa bucal en torunda identificadas como PADRE e HIJA con el fin de proceder a la investigación biológica de paternidad entre los donantes de ambas muestras. METODOLOGÍA EMPLEADA EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ADN El ADN fue extraído a partir de las muestras siguiendo un protocolo de lisis alcalina con proteinasa K. Posteriormente, el ADN se cuantificó mediante PCR a tiempo real ("Quantifiler TM Human DNA Amplification kit" de Applied Biosystems) en un termociclador Mastercycler de Eppendorf. MARCADORES MOLECULARES / POLIMORFISMOS DEL ADN Mediante la técnica de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) se amplificaron 16 loci marcadores, de localizaciones cromosómicas diferentes, y para los que se conoce la frecuencia alélica en la población (D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, VWA, TPOX, D18S51, AMEL, D5S818 y FGA, - AmpFISTR Identifiler Plus TM ) Los alelos, para todas las regiones detalladas, han sido identificados mediante electroforesis capilar en un secuenciador automático ABI 3100 Avant y los resultados analizados utilizando el software Genemapper, todo ello de Applied Biosystems. El cálculo de probabilidad de paternidad y del índice de paternidad se hace a partir de frecuencias correspondientes a las bases de datos de población española.
DETERMINACIÓN DE LOS GENOTIPOS Sistemas P. Padre DP12-161 Hija DP12-162 D8S1179 13/15 13/15 D21S11 28/33.2 28/33.2 D7S820 8/11 11 CSF1PO 10/12 12 D3S1358 15/16 16/18 THO1 6/7 6/9.3 D13S317 11/13 9/13 D16S539 9/11 9/10 D2S1338 17/23 19/23 D19S433 13 13/14 VWA 16 16/18 TPOX 9/11 8/9 D18S51 15 12/15 AMEL X/Y X D5S818 10/12 11/12 FGA 20/23 20/21 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Índice de paternidad (IP) = 56.701,235 Probabilidad de Paternidad (W) = 99,998236 % Predicado verbal (Hummel): Prácticamente probada
Consideraciones científico-legales Exclusión de paternidad Para cada marcador genético, un individuo hereda un alelo de su madre y uno de su padre. Considerando la maternidad como segura, la comparación de los alelos observados en el padre y en el hijo puede dar lugar a varias situaciones: NO EXISTENCIA DE DISCORDANCIAS Cuando no existen discordancias entre las muestras analizadas, se realiza un análisis estadístico en base a las frecuencias alélicas de la población, para determinar IP (Índice de Paternidad) y W (Probabilidad de paternidad), en casos de paternidad simples, y el LR (Likelyhood ratio), en los casos de paternidad complejos (casos de paternidad en ausencia del presunto padre). Los cálculos se realizan mediante el programa FAMILIAS. Las frecuencias alélicas que se utilizarán para dichos cálculos, serán las publicadas en el artículo "Allelic frecuencies of the 15 STR loci included in the AmpF/STR Identifiler TM PCR Amplification Kit in an autochthonous sample from Spain" (Manuel V. Camacho, et al. FSI 173(2007)241-245) EXISTENCIA DE MÁS DE DOS DISCORDANCIAS Se excluye la paternidad cuando existan más de dos discordancias entre la muestra perteneciente al hijo y la del presunto padre. CASOS DE POSIBLE MUTACIÓN-EXISTENCIA DE UNA O DOS DISCORDANCIAS En el caso de que se observen una o dos discordancias se considerará la posibilidad de que se hayan producido una o dos mutaciones y se calculará el índice de paternidad teniendo en cuenta las tasas de mutación de los STRs implicados según el método propuesto por Charles H. Brenner (C. Brenner, Mutations in paternity, 2006, http://dnaview.com/mudisc.hmt.) Exclusión de primer orden (por observación directa de la presencia o ausencia de los alelos estudiados): - Cuando el supuesto hijo/a posee un alelo que está ausente en el presunto padre y en la madre. - Cuando en el supuesto hijo/a no se detecta ninguno de los alelos que están presentes en el presunto padre, en heterocigosis de éste y/o del hijo/a.
Exclusión de segundo orden (basado en el estado de homocigosis deducido de un resultado negativo): - Cuando el supuesto hijo/a y el presunto padre son homocigotos para caracteres distintos. Índice de Paternidad y Probabilidad de paternidad Cuando la exclusión de paternidad no es posible, se calcula el Índice de Paternidad, que expresa el cociente entre las probabilidades de las dos hipótesis planteadas. (Individuos relacionados frente a no relacionados). IP = X/Y X es la frecuencia con la que el presunto padre transmite los genes obligatorios al hijo/a para esa combinación específica madre-hijo/a. Y es la frecuencia con la que un hombre al azar transmitirá los genes obligatorios al hijo/a para la misma combinación específica madre-hijo/a. Además se calcula la probabilidad de paternidad (W), valor que expresa la probabilidad de que el presunto padre sea el padre biológico, a la vista de los resultados obtenidos en los diferentes marcadores genéticos moleculares realizados y presuponiendo la maternidad indubitada. Para realizar estos cálculos se parte de una probabilidad de paternidad a priori de 0.5, es decir, el presunto padre tiene, a priori, las mismas probabilidades de ser el padre como de no serlo. W = p*ip / (p*ip + 1-p)
CONCLUSIONES Primera: El estudio de los diversos marcadores genéticos moleculares utilizados no ha permitido excluir al donante de la muestra la identificada como PADRE como padre biológico de la donante de la muestra identificada como HIJA. Segunda: El análisis estadístico de la probabilidad de paternidad del donante de la muestra PADRE respecto a la donante de la muestra HIJA teniendo en cuenta la estructura genotípica del presunto padre (Valor de X) y de la distribución de los distintos marcadores analizados en la población (Valor de Y), ha concedido un índice de paternidad (IP) de 56.701,235 y una probabilidad de paternidad del 99,998234 % que, según los predicados verbales de Hummel, corresponde a una paternidad prácticamente probada. Fdo: Dra. Pilar Madero Barrajón Directora Gerente Colegiado Nº998-M (COB) María Pilar Sánchez Simón Jefe de Laboratorio Colegiado Nº00001-ARG(COB)