SUCEPTIBILIDAD DE LARVAS DE MOSQUITOS AL PARASITISMO DE NEMÁTODOS DE TRES ESPECIES NEMÁTODOS PARÁSITOS

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1 SUCEPTIBILIDAD DE LARVAS DE MOSQUITOS AL PARASITISMO DE NEMÁTODOS DE TRES ESPECIES NEMÁTODOS PARÁSITOS RESUMEN Ninfa Ruiz-Santiago 1 Carlos Granados-Echegoyen Edgar Mendoza-García Julián Hernández-Cruz Adrian Enríquez-Arauso Rafael Pérez-Pacheco Los nemátodos de la familia Mermithidae, han demostrado ser eficaces en el control biológico de larvas de mosquitos en condiciones de laboratorio y campo. En este estudio se realizaron experimentos con el objetivo de determinar la susceptibilidad del II y III instar de larvas de mosquitos Culex quinquefasciatus a diferentes dosis de nemátodos Romanomermis iyengari, Romanomermis culicivorax y Strelkovimermis spiculatus. Se consideró como unidad experimental una bandeja de plástico de 21x13x5.5 cm a la que se adicionaron 500 ml de agua destilada, se depositaron 100 larvas de mosquitos de II instar y nemátodos preparasíticos. Se evaluaron dos dosis de nemátodos (10 y 20 nemátodos/larvas) contra larvas de mosquito C. quinquefasciatus. Tres días después de la, de cada unidad experimental se tomaron 20 larvas y se disectaron con agujas entomológicas apoyado de un microscopio estereoscópico para cuantificar el número de larvas o pupas con y sin nemátodos, así como el número de nemátodos en larvas parasitadas, para determinar el porcentaje de (PP) y las medias de (MI). Con el Análisis de Varianza (ANOVA) y prueba de Tukey, el nemátodo R. iyengari solo mostró diferencias significativas (α 0.05) en la entre el instar II y el III. Encontrando que el II instar fue el más susceptible a ser parasitado. En R. culicivorax y S. spiculatus, la dosis que presentó la mayor cantidad de nematodos/larva fue originando un super en las larvas, lo que provocó la muerte de las larvas en un tiempo más corto. Con el análisis estadístico se determinó que solo el nemátodo R. iyengari mostró diferencias significativas (α 0.05) la entre el instar II y el III. Las tres especies son efectivas para el de larvas de mosquito y pueden ser utilizadas de forma eficaz en el control de la misma. PALABRAS CLAVE: Control biológico, Mermithidae, nemátodos, C. quinquefasciatus INTRODUCCION El Manejo Integrado de Plagas (MIP) utiliza un enfoque de sistemas para abatir el daño por plagas a niveles tolerables, mediante una variedad de técnicas, incluyendo a los parasitoides y depredadores, a los hospedantes genéticamente más resistentes, a las modificaciones ambientales y, cuando es necesario y apropiado, a los plaguicidas químicos. La estrategia de MIP se fundamenta en el uso de agentes biológicos contra las plagas, antes de alterar químicamente el ambiente. Los métodos de control que son más recomendables desde el punto de vista del MIP son: prácticas culturales, tolerancia o resistencia de las plantas, control biológico, etc.el control biológico de mosquitos está basado en la utilización de un biolarvicida para la reducción de vectores de enfermedades humanas, lo que representa una de las 1 CIIDIR-OAXACA del Instituto Politécnico Nacional. Calle Hornos 1003, Col. Indeco Xoxocotlán, Oaxaca, Oax.: ninfasantiago@yahoo.com.mx. C.P Tel. (951)

2 alternativas de mayor importancia en los programas de lucha antivectorial en el sector salud. Algunas especies de nemátodos de la familia Mermithidae, han demostrado ser eficaces en el control biológico de larvas de mosquitos vectores de enfermedades en condiciones de laboratorio y campo. En este estudio se realizaron experimentos con el objetivo de determinar la susceptibilidad del II y III instar de larvas de mosquitos Culex quinquefasciatus a diferentes dosis de nemátodos Romanomermis iyengari, Romanomermis culicivorax y Strelkovimermis spiculatus en laboratorio. MATERIALES Y MÉTODOS Material Biológico Los nemátodos R. iyengari, R. culicivorax y S. spiculatus y las larvas de mosquito C. quinquefasciatus se obtuvieron de la planta de producción masiva de nemátodos ubicada en las instalaciones del CIIDIR- IPN Oaxaca. Bioensayo Se consideró como unidad experimental una bandeja de plástico de 21x13x5.5 cm a la que se le adicionó 500 ml de agua destilada, se depositaron 100 larvas de mosquitos C. quqinquefasciatus de II instar y 1000 o 2000 nemátodos preparasíticos para evaluar dos dosis de nemátodos (10 y 20 nemátodos/larvas). Tres días después de la, de cada unidad experimental se tomaron 20 larvas y se disectaron con agujas entomológicas bajo un microscopio estereoscópico para cuantificar el número de larvas o pupas con y sin nemátodos, así como el número de nemátodos en larvas parasitadas, para determinar el porcentaje de (PP) y las medias de (MI). Análisis estadístico A los datos de porcentaje de y medias de se les aplicó Análisis de Varianza (ANOVA) y una comparación de medias (Tukey, 0.05) en el programa estadístico JMP version 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES El de los nemátodos R. iyengari, R. culicivorax y S. spiculatus sobre las larvas de mosquito C. quinquefasciatus provocó la muerte de la larva en ambas dosis aplicadas, evitando que este alcanzara la etapa adulta. Las tres especies de nemátodos alcanzaron un 100% de en las dosis aplicadas y en los instares II y III. El II instar presentó medias de más altas en comparación con el III instar y se presentó un incremento en la media de respecto a la dosis aplicada. Estos resultados coinciden con las observaciones hechas por Pérez-Pacheco et. al., (2004) donde señala que las larvas de II instar son más susceptibles a ser parasitadas y esto puede ser explicado por el poco desarrollo alcanzado por la pared cuticular de las larvas de mosquito en esos estadios y el estilete de los nemátodos puede penetrarla fácilmente. El mismo autor en un estudio de R. iyengari parasitando An. Pseudopunctipennis encontró que no hay total en larvas de IV instar lo que confirma que la cutícula en este instar está muy desarrollada y es por ello que el estilete no pueda perforarla. La dosis presentó en promedio una mayor cantidad de nemátodos parasitando una larva (5 nemátodos/larva) en comparación con la dosis en donde la cantidad de nemátodos fue menor (2 nemátodos/larva) Cuadro 1, 2, 3, 4, 5 y 6. Respecto a la media de la especie R. iyengari presentó valores que van desde 1.1 a 3.7, para la especie R. culicivorax valores de 1.2 a 3.4 y S. spiculatus 1.2 a 3.2, lo cual indica que las larvas fueron parasitadas por 1 a 3 nematodos. Presentandose un super en

3 las larvas de mosquito a una dosis de debido a que se llevo a cabo la exposición de las larvas a una mayor cantidad de nemátodos preparasíticos, por lo que la muerte de la larva fue en tiempo más corto en comparación con la dosis, coincidiendo con lo encontrado por Pérez-Pacheco et. al. (2003) Cuadro 1: y media de causado por R. iyengari en larvas de segundo instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R Cuadro 2: y media de causado por R. iyengari en larvas de tercer instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R Cuadro 3: y media de causado por R. culicivorax en larvas de segundo instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R

4 Cuadro 4: y media de causado por R. culicivorax en larvas de tercer instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R Cuadro 5: y media de de S. spiculatus en larvas de segundo instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R Cuadro 6: y media de de S. spiculatus en larvas de tercer instar de mosquito C. quinquefasciatus emergidos de larvas R R R R R R R De acuerdo con los resultados obtenidos, el nemátodo R. iyengari solo mostró diferencias significativas (α 0.05) en la media de entre el instar II y el III. El instar II fue el más susceptible a ser parasitado. El análisis estadístico respecto a los nemátodos R. culicivorax y S. spiculatus no mostraron diferencias significativas en ninguna de las variables evaluadas sin embargo, hay un alto porcentaje de registrado en los diferentes instar del mosquito evaluado (C. quinquifasciatus). Lo que confirma lo que señalan algunos autores en estudios realizados con especies de nemátodos sobre todo con la especie R. iyengari que estos nemátodos son capaces de reducir las altas densidades de mosquito de Anopheles spp, Culex spp y Aedes spp. en condiciones de campo (Santamarina, 1994) y resultan una alternativa eficaz y amigable con el medio ambiente. A pesar de que las especies Culex spp han mostrado ser menos

5 susceptible al de Romanomermis spp. que las especies de Anopheles spp., debido a la conducta típica de los anofelinos de alimentarse en la superficie del agua, que para respirar adoptan una posición paralela al plano horizontal del agua, debido a que carecen de sifón respiratorio, conducta que los hace más vulnerables al ataque de los nemátodos que tienen el habito de vivir en la superficie del agua a diferencia de los mosquitos de Culex y Aedes que respiran en la superficie del agua por medio de un sifón respiratorio, adoptando una posición oblicua a la superficie del agua y se alimentan del sustrato de en el fondo de los criaderos(pérez et al., 2004) Cuadros 7, 8 y 9. Cuadro 7. Análisis estadístico del porcentaje de y media de para R. iyengari sobre larvas de C. quinquefasciatus Instar Dosis Media Parasitismo a 2.7 a 98 a 2.5 a II a 2.4 a III a 1.6 a 99 a 1.7 b a 1.9 a Valores con la misma letra dentro de una columna no difieren significativamente con un alfa de Cuadro 8. Análisis estadístico del porcentaje de y media de para R. culicivorax sobre larvas de C. quinquefasciatus Instar Dosis Porcentaje Media a 1.5 a 92.5 a 2.25 a II a 3.0 a III a 3.0 a 95.0 a 2.50 a a 1.9 a Cuadro 9. Análisis estadístico del porcentaje de y media de para S. spiculatus sobre larvas de C. quinquefasciatus Instar Dosis Media Parasitismo II a 1.7 a 99.0 a 1.8 a II a 1.9 a III a 1.8 a 97.5 a 2.0 a III a 2.2 a Un aspecto a considerar en los nemátodos parásitos de mosquitos es su efecto patogénico cuando se presenta super, ocasionando la muerte rápida de las larvas de mosquito parasitadas. Así mismo, el espesor de la cutícula del huevo (8 micras) y de su cutícula adulta de R. iyengari puede permitirle sobrevivir los períodos de desecación más prolongados que R. culicivorax y reciclar biológicamente en los cuerpos de agua donde se aplican (Gajanana, 1978).

6 Por esto último y a manera de recomendación para un control biológico de mosquito a base de nemátodos, R. iyengari puede ser una de las alternativas más apropiadas y también considerar que el momento más oportuno para una aplicación de nemátodos es cuando se presentan poblaciones donde predominan instar I y II. También hay que considerar que los nemátodos jóvenes son menos efectivos en el control ya que gastan mucha energía en movimientos en busca del hospedero la cual es una limitante (Santamarina, 1994). CONCLUSIONES El instar II fue el más susceptible a ser parasitado, esto puede ser explicado por el poco desarrollo alcanzado por la pared cuticular de las larvas de mosquito en esos estadios y el estilete de los nemátodos puede penetrarla fácilmente. Las especies R. culicivorax y S. spiculatus presentaron un alto porcentaje de registrado en los diferentes instar del mosquito evaluado (C. quinquifasciatus). Lo que confirma lo señalado por algunos autores en estudios realizados con especies de nemátodos sobre la especie R. iyengari Welch, respecto a que estos son capaces de reducir las altas densidades de mosquito de Anopheles spp, Culex spp y Aedes spp. en condiciones de campo (Santamarina, 1994). La utilización de nemátodos de especies R. iyengari, R. culicivorax y S. spiculatus parásitos de larvas de mosquitos son idóneos para el control de larvas de mosquito y evitar que alcancen la etapa adulta y puedan llegar a convertirse en un problema de salud por las enfermedades que trasmiten. LITERATURA CITADA Bheema Rao US.,Gajanana A.,Rajagopalan P.K A note on the tolerante of the mermithid nematode Romanomermis sp. to different ph and salinity. Indian J. Med Res 69:423-7 Gajanana A., Kazmi S.J., Bheema Rao Us, Chandrahas R.K. Studies on a nemátodo parasite (Romanomermis sp.:mermithidae) of mosquito larvae isolated in Pondichery. Indian J. Med Res. 68: Pérez-Pacheco R., C. Rodríguez H., J. Lara-reyna., R. Montes B., G. Ramirez V Susceptibilidad de larvas de mosquitos Aedes Aegypti (L.) y Culex quinquefasciatus (Diptera : Culicidae) al del nemátodo Romanomermis iyengary (Welch). Folia Entomológica.42(3): Pérez-Pacheco R., C. Rodríguez H., J. Lara-reyna., R. Montes B., G. Ramírez V., L. Martínez M Parasitismo de Romanomermis iyengary en larvas de tres especies de de mosquitos en laboratorio y de Anopheles pseudopunctipennis en campo. Agrociencia Vol. 38 Num.4. Pérez-Pacheco R., C. Rodríguez H., J. Lara-Reyna., R. Montes B., J. Ruiz V Control of the mosquito Anopheles pseudopunctipennis (Diptera: Culicidae) with Romanomermis iyengary (Nematoda:Mermithidae) in Oaxaca, México. Biological Control Santamarina M.A Actividad parasitaria de Romanomermis iyengary (Nematoda: Mermithidae) en criaderos naturales de larvas de mosquitos. Misc. Zool. 17:

7 Santamarina y Bellini Producción masiva de Romanomermis iyengari (Nematoda: Mermithidae) y su aplicación en criaderos de anofelinos en Boa Vista (Roraima), Brasil. Rev. Panam Salud Publica /Pan Am J Public Health 7(3) Pérez-Pacheco, Rafael; C. Rodríguez H.; J. Lara R., Montes B., G. Ramírez V., L. Martinez M Parasitism of Romanmermis iyengary in larvae of three species of mosquito in the laboratory and in Anopheles pseudopunctipennis in the field. Agrociencia. 38(4):