GUÍA RÁPIDA DEL LECTOR DE MICROPLACAS xmark CON SOFTWARE MPM

Transcripción

1 GUÍA RÁPIDA DEL LECTOR DE MICROPLACAS xmark CON SOFTWARE MPM Elaboró: Dr. Jean Alberto Castillo Badillo. Dr. José Luis Maravillas Montero. Febrero 2015

2 1. - Encender el equipo Encender la computadora Abrir el icono del software MPM6 que se encuentra en el escritorio de su PC dando doble click en el icono, aparecerá la siguiente pantalla, que lo conducirá a las diferentes opciones. De click en FILE nuevo experimento abrir datos de corridas anteriores protocolo existente abrir protocolos de muestra Al darle click en New Experiment, aparecerá una pantalla con la barra de herramientas que se muestra a continuación. BARRA DE HERRAMIENTAS (File Menu) Primero debe seleccionar el tipo de lector que va a utilizar dando click en el icono aparecerá una nueva ventana, seleccione xmark

3 Una vez seleccionado el lector de microplacas debe seleccionar el tipo de placa que utilizará. De click en Plate Size Si requiere incubación seleccione el icono INCUBATOR Set to ON Agregue la temperatura que desea click en OK Si desea visualizar el monitor de temperatura seleccione en el icono Monitor Temperature En la parte inferior derecha parecerá el monitor de la pantalla que le indicará a que temperatura se encuentra su xmark Los iconos que corresponden a FILE MENU, permiten guardar, abrir o imprimir protocolos o datos de corridas existentes.

4 Aparecen otros iconos que proporcionan la información de las lecturas y donde podemos hacer el diseño de la placa para un nuevo experimento. Información Datos crudos (solo absorbancias) Placa (Diseño de la placa) Datos de resultados (aplicando ecuación matemática) Ajuste de la curva Reporte Validación del reporte DISEÑO DE UN EXPERIMENTO 1. Dar doble click en New Experiment, File > New Experiment o en el Icono 2. Aparecerán los Iconos mencionados anteriormente y lo que prosigue es hacer la configuración de la placa. Dando click en TEPLATE 3.- Una vez que se abre la página para el diseño de la placa nos aparecerán varios iconos. Lo ideal es configurar la mayor cantidad de datos con la finalidad de tener la mayor información para un reporte mas completo. a) DISEÑO DE LA PLACA. En la cual se incluye el nombre o número de la muestra (alfanumérico), los estándares (con número), el blanco (con el símbolo gato (#); en esta parte si se deja la ecuación matemática cargada por default será sustraído a cada lectura), control negativo (NC) y control positivo (PC).

5 BLANCO Se definen con el símbolo gato ESTÁNDAR MUESTRAS (Alfanumérico) Cortar Copiar Pegar Borrar ***Llenado en series **Ecuación matemática Editar controles Seleccionar todo Llenar datos hacia abajo Llenar datos hacia la derecha 4. - Es necesario seleccionar el tipo de ensayo que se correrá así como la longitud de onda que será utilizada. De click Aparecerá la siguiente ventana

6 Seleccione el modo de lectura que llevará acabo: END POINT (Punto Final): Lee una sola absorbancia en cada pozo DNA: Para muestras de DNA y RNA, la placa se lee en el modo de espectro para obtener lecturas en un rango de 220 a 320 nm, permite determinar pureza de DNA y RNA así como su concentración. El equipo colecta datos en 2 longitudes de onda específicas (260 a 280 nm) y toma una tercera longitud de onda como blanco (320 nm). UV Protein: Este modo de lectura calcula la concentración de proteína cruda con un background de ac. nucleico, el cálculo de la concentración se hace usando una ecuación. KINETIC (cinética): Es utilizada para adquirir una serie de lecturas de absorbancia de cada pozo definiendo un intervalo de tiempo para calcular el rango de reacción. SPECTRA (Espectro): Determina la absorbancia en un intervalo de longitudes de onda. Con incrementos y límites especificados por el usuario. Well by Well Scan: Determina la absorbancia en un intervalo de longitudes de onda, con un máximo y un mínimo de la longitud de onda, se llega a la máxima longitud de onda con incrementos definidos, es posible configurar el rango de pozos que serán medidos. PLATE 2-1 (Promedio de 2 placas): Son datos de punto final de 2 placas con datos de la sustracción de la 2ª placa a la 1ª.

7 5. - Otras opciones. ECUACIÓN MATEMÁTICA Al darle click en el nos aparecerá un cuadro que nos permite definir la ecuación matemática que deseamos usar en el análisis de los datos (las absorbancias). 1. Introducir el nombre de la ecuación ( en el espacio Equation Name) 2. Dar ENTER 3. Agregar el símbolo que corresponda en el 1er cuadro 4. Seleccionar la operación a realizar:+ suma, -resta, *multiplicación, /división o log Logaritmo. 5. Agregar el símbolo que corresponda en el segundo cuadro. Los símbolos que se utilizan para configurar la ecuación son los Significa la lectura de cada pozo Ejemplo: Si se le quiere decir todos los pozos # Significa el Blanco 500 Significa el estándar. El número va a variar y depende de la concentración del estandar, por ejemplo si la concentración del estándar que voy a utilizar es de 600 escribiría 600. M1 Significa muestra 1. La muestra se escribe alfanumérica. Por ejemplo si a la muestra número 7 será restada a todos los demás pozos escribiría lo siguiente: M7 PC significa control positivo NC Significa control negativo

8 Si desea aplicar la ecuación matemática que configuró al análisis de sus datos, primero seleccione TEMPLATE CHOSE TEMPLATE VIEW, de click en se abrirá una casillita que le dará varias opciones entre ellas seleccione EQUATION seleccione la casilla de los resultados con el mouse, de click derecho y seleccione la ecuación deseada. Es posible analizar algunos datos con una ecuación matemática y otros con otra ecuación matemática, para realizar esto es necesario seleccionar Multiple equation posteriormente seleccionar las casillas que serán analizadas con una ecuación, dando click derecho para definir la ecuación a analizar. Realice lo mismo para el resto de las casillas que serán analizadas con la otra ecuación matemática.

9 LLENADO EN SERIE Si tenemos duplicados de muestras es posible configurar el número de éstas con o sin dilución. Y de ésta manera se ahorrará tiempo en repetir las muestras. Si los estándares tienen algún factor de dilución, y están por duplicado o triplicado, también se configura en éste icono. Al darle click nos aparecerá un cuadro que nos permite definir lo antes mencionado. Factor de dilución si no hay dilución se coloca el numero 1 Número de réplicas Hacia donde quiere que se hagan las réplicas hacia abajo o a la derecha Una vez que ya configuré la placa dar click en: Una vez que hagamos la lectura podemos pasar a analizar los resultados.

10 6. - ANÁLISIS DE RESULTADOS Para el análisis de resultados damos click en RESULT DATA y nos despliega una pantalla en la cual podremos visualizar los resultados. Los resultados son las absorbancias leídas aplicándoles la ecuación matemática que configuramos en un inicio.