COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA

Transcripción

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2 3.3 BLANCO DE MUESTRA: Son matrices que no contienen el analito de interés (placebo). Son difíciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que pudieran encontrarse durante el análisis de las muestras de prueba. 3.4 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN: Parámetros bajo los cuales el resultado de una prueba será considerado aceptable. 3.5 CURVA DE CALIBRACIÓN: Es la representación gráfica de la señal medida como una función de cantidad del analito. 3.6 INCERTIDUMBRE: Estimación que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los cuales se encuentra el valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida. 3.7 INTERVALO DE TRABAJO: Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior (incluyendo dichas concentraciones) y para las que se ha demostrado que el analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperación y linealidad. 3.8 INTERVALO LINEAL: Es la capacidad de un método analítico para dar resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito dentro de un intervalo dado. 3.9 LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN: Es la concentración más baja a la cual el analito puede cuantificarse con una precisión y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas LÍMITE DE DETECCIÓN: Es la concentración más baja a la cual puede detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas MATRIZ O PLACEBO: Muestra que contiene todos los componentes de un producto a excepción del analito MÉTODO NORMALIZADO: Proceso de medición robusto donde pequeñas variaciones en el procedimiento no deben producir de forma imprevista grandes variaciones en los resultados MÉTODO NO NORMALIZADO: Método alternativo que demuestra o estima el mismo analito tal cual se mide utilizando el método normalizado MUESTRA ADICIONADA O FORTIFICADA: Porción representativa del material a evaluar, a la que se le adicionan cantidades conocidas del analito de interés. 2 / 20

3 3.15 PARÁMETRO DE DESEMPEÑO: Parámetro específico a evaluar en una validación RECUPERACIÓN O RECOBRO: Cantidad del analito recuperada en la porción de muestra o muestra adicionada cuando esta es conducida a través del método analítico completo, y que permite evaluar la eficiencia de la extracción, proceso de preparación e interferencias que puedan existir al aplicarlo. Se expresa en términos de porcentaje REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y método en intervalos cortos de tiempo REPRODUCIBILIDAD (PRECISIÓN INTERMEDIA): Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por dos analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo método en diferentes días RESPUESTA ANALÍTICA: Lectura obtenida al aplicar un método analítico, como pueden ser el área o altura del pico en un cromatograma, lectura de absorbancia, cuentas de iones en un Espectro de Masas, lectura en mv, ml gastados en volumetría, diferencia de peso en un gravimétrico, entre otros RESULTADO DE ENSAYO: Valor de un mensurando obtenido tras la realización de un método de ensayo específico ROBUSTEZ: Es la medida de la capacidad del método analítico de permanecer inalterado por pequeñas, pero deliberadas variaciones (efecto de cambio en las condiciones) en los parámetros del mismo, proporcionando un índice de su confiabilidad durante su uso normal SELECTIVIDAD: Es la capacidad de un método analítico para medir solamente lo qué se pretende que se mida SENSIBILIDAD: Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentración del analito. Es la pendiente del intervalo de trabajo y cuanto mayor es esta, mayor es la sensibilidad del método SESGO: Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba con respecto a un valor de referencia aceptado o conocido VALIDACIÓN: Es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método, satisfacen los requisitos para su aplicación analítica. 3 / 20

4 3.26 VALIDACIÓN PARCIAL (confirmación del método): Evidencia objetiva para demostrar que al aplicar un método normalizado, se cumple con las especificaciones del mismo y se cuenta con la competencia técnica para realizarlo adecuadamente tomando en consideración sus propias instalaciones, equipo y personal. 4. DOCUMENTOS APLICABLES 1. AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals. December CENAM. Guía para estimar la incertidumbre de la medición. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de conductividad electrolítica. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Espectrofotometría de Absorción Atómica y de Emisión y Atómica con Plasma Acoplado Inductivamente. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Cromatografía de Gases (GC) y Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC). Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Gravimetría de Masa. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de ph. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Titulación volumétrica. Abril CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Espectrofotometría de Ultravioleta-Visible. Abril Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Edición Directiva 96/23/CE en cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación de los resultados. Agosto / 20

5 12. EMA. Documento MP-CA Manual de Procedimientos. Incertidumbre de mediciones. Política. 13. Eurachem. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. First Edition Eurachem-CITAC. Guide CG4 Quantifying Uncertainty and Analytical Measurements. Second Edition. QUAM : IUPAC. Harmonized Guidelines for Single Laboratory Validation of Methods of Analysis. Pure Appl. Chem., Vol. 74, No. 5, pp , NMX-CH-140-IMNC Guía para la expresión de incertidumbre en las mediciones. 17. RILAA/INPAZ. Curso a distancia sobre Validación de Métodos Químicos. Buenos Aires, Argentina Eurolab. Measurement Uncertainty in Testing. A short introduction on how to characterize accuracy and reliability of results including a list of useful references. Techical Report No. 1/2002. June DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD 5.1 CRITERIO No. 1 Clasificar el método como Normalizado o no Normalizado conforme a lo siguiente: Método Normalizado es aquel método publicado como primera instancia en: Como segunda instancia: 1. Normas Oficiales Mexicanas (NOM) 2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) 3. Normas Mexicanas (NMX). 4. Métodos Oficiales del AOAC 5. Standard Methods 6. Environmental Protection Agency (EPA) 7. Pesticide Analytical Manual (PAM) 8. Collaborative International Pesticides Analytical Council (CIPAC) 9. United States Pharmacopoeia (USP) 10. British Pharmacopoeia (BP) 11. American Society for Testing Materials (ASTM) 12. International Standard Organization (ISO) 5 / 20

6 13. Codex Alimentarius 14. Food and Drug Administration (FDA) 15. Food and Agriculture Organization (FAO) 16. European Commission (CE) 17. United States Department of Agriculture (USDA) Método no Normalizado es aquel: 1. Desarrollado por el laboratorio (método propio). 2. Método obtenido de publicaciones científicas (Journals, tesis, etc). 3. Método normalizado modificado, ampliado o usado fuera de su alcance. 5.2 CRITERIO No. 2 Considerar los siguientes parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de método. Parámetro Intervalo lineal y de trabajo Límite de detección Límite de cuantificación Recuperación Sesgo Repetibilidad Reproducibilidad Incertidumbre Sensibilidad Selectividad Robustez Métodos normalizados Físicos Fisicoquímicos Cuantitativos Cualitativos Métodos no normalizados Fisicoquímicos Nota: Los parámetros de desempeño a considerar para los métodos fisicoquímicos dependerá del tipo de prueba de que se trate. 6 / 20

7 5.3 CRITERIO No. 3 Clasificar el método por tipo de prueba Tipo de prueba Espectrofotométrica Cromatográfica Potenciométrica Volumétrica Gravimétrica Física (cuantitativa) Metodología Espectrofotometría UV-Visible Turbiedad Absorción Atómica (AA), Plasma Inductivamente Acoplado (ICP) Cromatografía de Líquidos (HPLC), Cromatografía de Gases (GC), Cromatografía de Líquidos-Masas (HPLC-MS), Cromatografía de Gases- Masas (GC-MS) ph Aniones y cationes por técnica de Ion selectivo Conductimetría Valoraciones por titulación (manual y automática) Pérdida por secado Residuo de ignición Materia extraña Densidad relativa Disolución Desintegración Índice de refracción Rotación óptica Punto de fusión Polarimetría Espectrometría de Infrarrojo Variación de volumen Uniformidad de dosis Osmolaridad Temperatura de fusión Dispositivos médicos Color Viscosidad Temperatura de fusión, etc. 7 / 20

8 Tipo de prueba Física (cualitativa) Metodología Pruebas límites de cloruros, fosfatos, hierro, fluoruros, sulfatos, etc Metales pesados (cualitativa) Inhibidores (formaldehído, sales cuaternarias, oxidantes, derivados clorados, etc. CRITERIO No. 4 Establecer los parámetros finales de desempeño con base al tipo de prueba: Tipo de prueba Parámetro de desempeño Espectrofotométrica Cromatográfica Potenciométrica Volumétrica Gravimétrica Física Intervalo lineal y de trabajo SI SI SI SI SI NO Límite de detección SI a SI a NO NO NO SI b Límite de cuantificación SI a SI a SI a SI a SI a NO Recuperación SI SI NO SI SI NO Sesgo SI SI SI SI SI NO Repetibilidad SI SI SI SI SI SI c Reproducibilidad SI SI SI SI SI SI c Incertidumbre SI SI SI SI SI SI c Sensibilidad SI d SI d SI d,e SI e SI d NO Selectividad SI d SI d SI d,e SI SI SI b Robustez SI d SI d SI d SI d SI d SI d a Solo para análisis a nivel de trazas (ppm, ppb, ppt) b Solo métodos cualitativos. c Solo métodos cuantitativos. d Solo aplica para métodos no normalizados. e Solo para el análisis de aniones y cationes por ión selectivo Nota: Solo para métodos gravimétricos y volumétricos la selectividad se sustenta con los resultados de linealidad, recuperación, repetibilidad y reproducibilidad, si estos cumplen con los criterios de aceptación establecidos 8 / 20

9 5.5 CRITERIO No. 5 Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a: 1. La más solicitada. 2. La más compleja. 3. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices; FEUM, Residuos orgánicos, metales contaminantes, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por grupo (alimentos, principio activo, tipo de presentación, entre otros) a. Alimentos: lácteos, cárnicos, productos de la pesca agua, cereales, frutas, vegetales, productos de panificación, miel, productos de confitería, especias, entre otros. b. Medicamentos: cápsula, gragea, tableta, suspensión, jarabe, ungüento, colirio, espuma, gel, supositorio, parche, jalea, ovulo, entre otros. 9 / 20

10 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: CRITERIO No. 6 Evaluar los parámetros de desempeño correspondientes como se detalla en las siguientes tablas: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones Intervalo lineal Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado a) Graficar respuesta analítica (y) vs. nivel de concentración adicionado (x) b) Confirmar visualmente la existencia de linealidad del intervalo. c) Elaborar gráfico de residuales. d) Confirmar aleatoriedad de los residuales alrededor de la recta Ver nota 2 a) Utilizar niveles establecidos en la curva de calibración ó utilizar la tabla guía contenida en el anexo A. b) Los niveles de concentración deben estar igualmente espaciados en el intervalo de interés. c) Considerar en el intervalo el valor de la especificación y/o los valores de aceptación y rechazo y estar en la medida de lo posible al centro de este. d) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método. Intervalo de trabajo Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. Cada nivel por triplicado a) Considerar los niveles que cumplen con los criterios de recuperación y repetibilidad establecidos. b) Graficar la concentración obtenida (y) vs. la concentración adicionada (x) c) Calcular la pendiente (m) y el coeficiente de correlación (r ). a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal. b) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método 10 / 20

11 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones Límite de detección (pruebas cualitativas) Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. 10 replicas de cada nivel Elaborar tabla de respuesta de resultados positivos y negativos con respecto a la concentración Concentración mínima en la cual se obtienen 10 resultados positivos Límites de detección y cuantificación Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. Cada nivel por triplicado a) Calcular la pendiente (m) y la desviación estándar de la ordenada al origen (sbo) de la respuesta analítica (y) vs nivel de concentración adicionado (x) b) Estimar los límites con las siguientes ecuaciones: 3.3* sb LD = m o a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo, b) Reportar los límites estimados estadísticamente en las unidades establecidas por el método. c) Considerar como límite práctico de cuantificación el nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo. 10 * sb LC = m o Recuperación y sesgo Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado a) Calcular la concentración recuperada para cada nivel de concentración adicionado. b) Para el sesgo, efectuar la resta aritmética de la concentración añadida menos la concentración recuperada. a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Reportar la recuperación como intervalo en % y el sesgo como intervalo en las unidades establecidas por el método. 11 / 20

12 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones Repetibilidad Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Tres niveles diferentes de concentración (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo) Cada nivel por sextuplicado. a) Analizar las muestras por un mismo analista (analista 1) en 2 días diferentes (3 niveles/triplicado /día). b) Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel c) Calcular la media (x), desviación estándar (sr) y el coeficiente de variación (CVr) de los % de recuperación obtenidos para cada nivel adicionado. a) Analizar las muestras en 2 días diferentes (3 niveles/triplicado/día) y por un analista diferente (analista 2) a) Utilizar la información obtenida en la estimación del intervalo de trabajo como los datos para el día 1 (cada nivel por triplicado por día). b) Reportar la desviación estándar (sr) o coeficiente de variación (CVr) máximos obtenidos. c) Si no se cuenta con dos analistas o dos equipos para estimar la reproducibilidad, estimar solo la repetibilidad con el mismo analista pero utilizando un tercer día. Reproducibilidad (Precisión intermedia) Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Tres niveles diferentes de concentración (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo). Cada nivel por sextuplicado. b) Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel c) Combinar estos resultados con los datos obtenidos en la estimación de la repetibilidad y calcular la media (x), desviación estándar (sr) y el coeficiente de variación (CVR) de los % de recobro para cada nivel. Reportar la desviación estándar (sr) o coeficiente de variación (CVR) máximos obtenidos 12 / 20

13 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones Sensibilidad Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. Cada nivel por triplicado a) Graficar la respuesta analítica (y) vs la concentración adicionada (x) b) Calcular la pendiente de la recta (m) a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Reportar la relación entre el cambio de respuesta analítica por unidad de concentración. Pueden emplearse técnicas confirmatorias para asegurar la identidad del analito como son la utilización de detectores de espectrometría de masas, arreglo de diodos o infrarrojo. Selectividad Blancos de muestra o muestras adicionadas con cantidades conocidas de interferencias, productos de degradación o impurezas Por duplicado Evaluar si la presencia de las interferencias, impurezas o productos de degradación inhiben o incrementan la detección del analito. Cuando no se tienen estándares de interferencias o impurezas se pueden aplicar las siguientes condiciones de degradación: a) Temperatura: C o 20 C por debajo de su punto de fusión, durante 2 a 4 semanas. b) Luz UV, luz fluorescente y/o humedad relativa por un tiempo apropiado. c) ph 1 a 2 y/o 10 a 12 y someterlas a C por un tiempo apropiado. d) Para líquidos y semisólidos adicionar peróxido de hidrógeno. 13 / 20

14 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones a) Identificar de 4 a 7 factores que puedan tener un efecto significativo en el desempeño del método y variar ligeramente cada uno ellos. Robustez Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Concentración equivalente al nivel medio estimado en el intervalo de trabajo 8 muestras por duplicado b) Efectuar una serie de 8 combinaciones de valores nominales con variaciones deliberadas c) Analizar una muestra por duplicado con cada serie de combinaciones d) Calcular las diferencias de las mediciones de los subgrupos. a) Reportar los factores que más influyen en el resultado final. b) Establecer si el método es robusto frente a las variaciones establecidas. e) Graficar en una línea los valores de las diferencias de menor a mayor. f) Calcular la desviación estándar de las diferencias (sdi). 14 / 20

15 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 FECHA: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones a) Especificar el mensurando. b) Identificar las fuentes de incertidumbre Incertidumbre No aplica Utilizar la información obtenida en el proceso de validación. c) Cuantificar los componentes de la incertidumbre (u) d) Calcular la incertidumbre estándar combinada (uc) Puede utilizarse como guía los criterios establecidos en las referencias 2, 12, 14, 16 y 18. e) Calcular la incertidumbre expandida(uexp) Nota 1. Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito en la muestra, la adición debe ser llevada a cabo en las primeras etapas. Nota 2. Para la determinación de: intervalo lineal y de trabajo, límites de detección y cuantificación, recuperación, sesgo, repetibilidad y sensibilidad se debe aplicar el método de ensayo específico por un mismo analista (el de más experiencia en el análisis) bajo las mismas condiciones. Nota 3. Para métodos físicos cuantitativos la repetibilidad y reproducibilidad se calculan en base a la lectura directa. 15 / 20

16 5.7 CRITERIO No. 7 Criterios de aceptación Parámetro Intervalo lineal Intervalo de trabajo Límite de cuantificación práctico Límite de cuantificación estimado Límite de detección Recuperación Repetibilidad Reproducibilidad Robustez Criterio de aceptación a) Comportamiento lineal en la gráfica de concentración vs respuesta analítica. b) Datos aleatorios en el gráfico de residuales a) Pendiente: valor cercano a 1 b ) Coeficiente de correlación: r 0.98 para cuantificación de residuos e impurezas r 0.99 para cuantificación de contenido e ingrediente activo Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Los establecidos en la referencia original del método. Si no se dispone de estos datos utilizar como guía las tablas contenidas en el anexo B. Si s Di < s R el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método es robusto. 5.8 CRITERIO No. 8 Elaborar un protocolo de validación que incluya lo siguiente: Título Protocolo de validación parcial o total (según aplique). Señalar asimismo el nombre y clave del método que se pretende validar. 1.Objetivo 2. Campo de aplicación 3. Método de ensayo Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a determinar Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la validación Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) 4. Equipo Descripción general del equipo a utilizar en la validación. 5. Materiales Indicar los materiales a utilizar separando como material de uso general y material volumétrico 16 / 20

17 6. Reactivos a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado. b) Señalar los patrones a utilizar con su grado de pureza o concentración. c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto). d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.). Indicar las características, forma de almacenamiento y cantidades de muestra 7. Muestras estimadas para llevar a cabo la validación. Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas. 8. Desarrollo experimental Detallar las instrucciones para cada uno de los parámetros de desempeño a ensayar. 9. Resultados Propuesta de formato de registro 10. Análisis estadístico Establecer para cada parámetro de desempeño la herramienta estadística a utilizar para su evaluación. 11. Criterios de aceptación Establecer los criterios de aceptación que deben cumplirse con su respectiva referencia bibliográfica. Nota: El protocolo debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. 5.9 CRITERIO No. 9 Elaborar un informe de resultados de validación que incluya lo siguiente: Informe de resultados de validación parcial o total (según aplique). Señalar Título asimismo el nombre y clave del método que se validó. 1.Objetivo Considerar los parámetros de desempeño evaluados y el analito determinado. 2. Campo de aplicación Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplicó la validación Hacer una breve explicación de las características del analito, su importancia 3. Antecedentes sanitaria o nutricional, así como las especificaciones nacionales e internacionales establecidos para este. Descripción del nombre, marca, modelo, número de serie, número de 4. Equipo identificación e intervalo de trabajo del equipo utilizado en la validación Descripción de: a) Nombre, marca y lote del material de uso general utilizado. 5. Materiales b) Nombre, marca, clave, volumen nominal y volumen real del material volumétrico empleado a) Indicar el nombre, marca, grado, pureza, presentación y lote de los reactivos utilizados b) Indicar el nombre, marca, pureza o concentración, presentación y lote de los 6. Reactivos patrones de referencia utilizados c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto) que se emplearon 17 / 20

18 d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.) que se utilizaron. 7. Muestras 8. Método de ensayo 9. Desarrollo experimental 10. Resultados 11. Análisis de resultados 12. Conclusión 13. Bibliografía 14. Anexos Indicar las características, forma de almacenamiento, marca, presentación, caducidad y cantidades de muestra utilizadas para llevar a cabo la validación. Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas utilizados. Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) Detallar como se llevaron a cabo los ensayos de cada uno de los parámetros de desempeño. Presentación de resultados en forma de tablas, señalando fechas de inicio y término, analistas, laboratorio, analito, matriz, unidades y clave de bitácora o registro primario Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación considerados y los resultados obtenidos y hacer las observaciones correspondientes. Efectuar una conclusión final en donde se señale que el método se ajusta al uso propuesto (Numeral ) Referencias utilizadas. Los que aplique: Bases de datos utilizadas Cromatogramas, espectros, resultados impresos, etc. Certificados de análisis o pureza. Certificados de trazabilidad Certificados de calibración de material. Formatos de verificación de material Gráficos de control, etc. Nota: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. 6.0 NOTIFICACIÓN DE VIGENCIA Se otorga un periodo de transición de 180 días contados a partir de la fecha de publicación para que los laboratorios que se encuentren autorizados o en proceso del mismo se apeguen a estos criterios. Para los laboratorios que soliciten autorización posterior a la fecha de publicación, deberán cumplir estos criterios de inicio. Estos criterios se aplicarán en todos los procesos de evaluación que se realicen a los 180 días naturales, a partir de la fecha de publicación del documento en la página web de la COFEPRIS. 18 / 20

19 ANEXOS Anexo A. Guía para considerar los niveles del intervalo lineal Determinación Contenido o principio activo Cuantificación de una impureza Uniformidad de contenido Prueba de disolución Residuos y contaminantes Intervalo recomendado 80 a 120 % del contenido del marbete o especificación 50 a 120 % el valor de la especificación 70 a 130 % la concentración declarada en el marbete Mínimo ± 20% el intervalo establecido 0 a 150 % el valor de la especificación. Anexo B.- Criterios de aceptación Recuperación para contenido en alimentos y agua Concentración del analito Criterio de aceptación 0.1 a 1 % % 1 a 10 % % 10 a 99 % % 100 % % Recuperación para residuos y contaminantes en alimentos y agua. Concentración del analito Criterio de aceptación < 1 µg/kg ó µg/l % 1 a 10 µg/kg ó µg/l % 10 a 100 µg/kg ó µg/l % 0.1 a 100 mg/kg ó mg/l % 100 a 1000 mg/kg ó mg/l % Recuperación en productos farmacéuticos Prueba Criterio de aceptación Cromatográfica % Volumétrica % Espectrofotométrica % 19 / 20

20 Repetibilidad y reproducibilidad para contenido en alimentos y agua. Concentración del analito Repetibilidad ( r) Reproducibilidad (R ) 0.1 a 1 % CVr 3% CVR 6% 1 a 10 % CVr 2% CVR 4% 10 a 99 % CVr 1.5 % CVR 3 % 100 % CVr 1% CVR 2% Repetibilidad y reproducibilidad para residuos y contaminantes en alimentos y agua. Concentración del analito Repetibilidad ( r) Reproducibilidad (R ) < 1 µg/kg ó µg/l CVr 35% CVR 53% 1 a 10 µg/kg ó µg/l CVr 30% CVR 45% 10 a 100 µg/kg ó µg/l CVr 20% CVR 32% 0.1 a 100 mg/kg ó mg/l CVr 15% CVR 23% 100 a 1000 mg/kg ó mg/l CVr 10 % CVR 16% Repetibilidad y reproducibilidad en productos farmacéuticos Prueba Repetibilidad Reproducibilidad Cromatográfica CVr 2 % CVR 2 % Volumétrica CVr 2 % CVR 2 % Espectrofotométrica CVr 3 % CVR 3 % 20 / 20