Diagnosticando el dengue. Juan E. Ludert Departamento de Infectómica y Patogénesis Molecular CINVESTAV-IPN; Ciudad de México
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- Rosa Maestre Quintana
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1 Diagnosticando el dengue Juan E. Ludert Departamento de Infectómica y Patogénesis Molecular CINVESTAV-IPN; Ciudad de México
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3 , Casos de Dengue (Región de las Américas, ) Fuente:
4 El dengue se expande a nuevos habitats
5 Curso clínico de la infección: n: Síntomas clínicos y hallazgos de laboratorio durante la infección por el virus dengue y sus posibles complicaciones, fiebre hemorrágica y síndrome de choque por dengue.
6 Contra el dengue: NO HAY: Vacunas Tratamientos específicos PERO SI HAY: Diagnóstico específico
7 Síntomas de la fiebre por dengue: Malaria Fiebre amarilla Leptospirosis Tifus
8 Diagnóstico de dengue: Aislamiento del virus en cultivos celulares Detección del genoma viral Detección de la antígenos virales (proteína NS1 circulante) Detección de inmuglobulinas específicas (IgM,IgA, IgG)
9 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones: Peeling et al. 2010
10 Aislamiento viral: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos Cultivos celulares (C6/36 o Vero); Ratones lactantes Sueros Sangre completa Especificidad Identificación de serotipos Costos altos Tiempo (1 semana) Periodo de recolección de la muestra ( 5 días) No distingue entre infección primaria o secundaria Vigilancia epidemiológica Ensayos de vacunas
11 Detección n del genoma viral: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos PCR (simple, anidada, multiplex) Sueros Sangre completa Tejidos Especificidad y sensibilidad Identificación de serotipos Resultados rápidos Costos altos Periodo de recolección de la muestra ( 5 días) Requiere de experticia Requiere laboratorios bien equipados No distingue entre infección primaria o secundaria Vigilancia epidemiológica Ensayos de vacunas Inoculaciones experimentales
12 Tasas de detección de distintos marcadores en relación al curso de la infección: IgM NS1 RT-PCR Aislamiento viral Kumarasamy et al., 2007
13 Relación inversa entre viremia y positividad a IgM específica Viral load [DENV (PFU eq/ml)] IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) n=26 n=7 n=48 n=14 n=51 n=26 n=53 n=44 n=18 n=47 n=5 n= Day after onset of fever
14 Diagnóstico de dengue: Aislamiento del virus en cultivos celulares Detección del genoma viral Detección de la antígenos virales (proteína NS1 circulante) Detección de inmuglobulinas específicas (IgM,IgA, IgG)
15 Proteínas codificadas por el virus del dengue Lumen RE Citoplasma
16 Proteína NS1 de dengue: Muller y Young, 2013
17 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones (µg/ml): Peeling et al. 2010
18 Detección n de NS1: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos Ensayos comerciales (ELISA, inmunocromatografía) Sueros Sangre completa Especificidad Resultados rápidos Facilidad de realización Periodo de recolección de la muestra ( 6 días) Sensibilidad (distintos serotipos, infección primaria versus secundaria) No distingue entre infección primaria o secundaria Diagnostico clínico Inoculaciones experimentales
19 Variaciones en sensibilidad según el serotipo: Ramírez et al., 2009
20 Variaciones en los niveles de NS1 circulantes: De La Cruz Hernández et al. 2013
21 Felix et al. 2012
22 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? Libraty et al. 2000
23 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? Avirutnan et al. 2006
24 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? De La Cruz Hernández et al. 2013
25 Detección n de IgM/IgA: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Ensayos comerciales (ELISA, inmunocromatografía) Sueros Sangre completa Resultados rápidos Facilidad de realización Periodo de recolección de la muestra (> 6 días) Especificidad Sensibilidad en infecciones secundarias Usos Diagnostico clínico Vigilancia epidemiológica
26 Detección de IgA específica en sueros: De la Cruz Hernández et al. 2012
27 Tasas de detección de distintos marcadores en relación al curso de la infección: IgM NS1 RT-PCR Aislamiento viral Kumarasamy et al., 2007
28 Detección combinada de NS1 e IgM para el diagnóstico del dengue: La combinación n de pruebas = 91,9% de sensibilidad Dussart et al. 2006
29 Medición n de la relación n IgM/IgG: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Ensayos comerciales (ELISA) Sueros Sangre completa Permite distinguir infecciones primarias de secundarias Sensibilidad en infecciones secundarias (IgM) Usos Diagnostico clínico Vigilancia epidemiológica
30 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones: Peeling et al. 2010
31 Resumiendo: Métodos directos Métodos indirectos IgA Peeling et al. 2010
32 Resumiendo: Métodos directos Métodos indirectos IgA NS1+ IgM o IgA Peeling et al. 2010
33 Necesidades en diagnóstico de dengue: Desarrollo de estuches capaces de reconocer a la NS1 de los 4 serotipos con igual eficiencia. Aumentar la sensibilidad para la detección de NS1 en infecciones secundarias. Desarrollar estuches de NS1 cuantitativos? Desarrollo de estuches que combinen la detección de NS1 con IgM, IgA ó IgG. Evaluación/validación externa e independiente de estuches comerciales desarrollados por las compañías de biotecnología.
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35 Muchas gracias por su atención
36 Muchas gracias por su atención
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38 Curso de la infección: n: Xia, 2008
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