Guía de Trabajos Prácticos para Análisis Instrumental
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- Gerardo Torres Márquez
- hace 8 años
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1 Guía de Trabajos Prácticos para Análisis Instrumental Espectroscopia-AA-HPLC-GC- Profesores: Claudia Gimenez Eduardo Aprigliano
2 Trabajo Práctico N 1 Análisis Espectrofotométrica de una solución de Nitrato de Cobalto OBJETIVO Utilización del Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). Realización de curva de calibración (Abs.vs.λ), (Abs. vs. Conc.). Medición de muestras problemas. MATERIALES Matraces aforados de 100 ml. Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml. 1 vaso de precipitado de 500 ml. Pipetas de vidrio. Frasco lavador (pisetas). REACTIVOS Solucione de nitrato de Co de mg /L (ppm) (40 gr/l) Equipo: Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). MODO DE USO 1. Encender el equipo. 2. Precalentar por 15 minutos, para estabilizar el equipo. 3. Colocar la longitud de onda con la perilla. 4. Colocar en cada cubeta blanco, estándar 1,2, Abrir la tapa del equipo, insertar blanco + estándar 1, 2,3. 6. Cerrar la tapa. 7. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición (blanco). 8. Presionar el botón 100% transmitancia (T 100 %). 9. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe la Absorbancia (A 0.000). 10. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición muestra de referencia 40 g/l (40000 mg/l o ppm). La pantalla exhibe la absorción de la muestra. 11. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe Concentración. 12. Presionar el botón Arriba y Abajo, a los efectos de ingresar la concentración de la muestra de referencia. Presionar Enter.- (C 40). 13. Pantalla exhibe F (factor) -F Presionar Modo hasta C. 15. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición. M1 16. Medir la concentración de M Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición M2 18. Medir la concentración de M2. Departamento de Química Página 2
3 19. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición M Medir la concentración de M Retirar las cubetas, limpiar restos de solución. 22. Poner el porta cubeta en su posición de inicio. 23. Cerrar el cobertor. 24. Apagar el equipo. Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibración. CURVA DE CALIBRACIÓN A partir de solución de Co (NO 3 ) mg/l (ppm) se preparan, tres soluciones de ppm, ppm y ppm. Utilizo ppm como STD para obtener el factor. Diluciones: a partir de la solución madre (40000 ppm) preparar muestras incógnitas de: M 1 =10/25 (por duplicado), M 2 =10/50 (por duplicado), M 3 = 20/50 (por duplicado), M 4 =15/50. Determinar en forma teórica la concentración esperada. Informar. Usando la fórmula siguiente: V I.C I = V F. C F Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solución inicial (dato en línea punteada). Tener en cuenta que esto sólo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley Lambert Beer. SOLUCIONES A UTILIZAR ppm. = ml ppm. =.ml ppm. =.ml Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración (Abs.vs.Conc.) MEDIDA mg./l ABSORBANCIA (U.A) BLANCO 0 0 SOL SOL SOL SOL M1 10/25 M2 10/50 M3 20/50 M4 15/50 Departamento de Química Página 3
4 M 1 =10/25 (por duplicado), M 2 =10/50 (por duplicado), M 3 = 20/50 (por duplicado), M 4 =15/50. REALIZAR CURVA DE CALIBRACION: ABSORBANCIA VS. LONGITUD DE ONDA. Realizamos esta mediciones sucesivas desde los 460 nm hasta 600 nm para observar a qué longitud de onda se produce la mayor absorbancia (Co (NO 3 ) 2 : 510 nm). Concentración (mg/l) Absorbancia , , , ,666 Departamento de Química Página 4
5 X= (y+0,157)/0,160 ppm ANALISIS DE LA MUESTRA Se procederá la medición de las muestras problema. Muestra Problema N 1=.. (g/l) Muestra Problema N 2=.. (g/l) Se expresar el dato en mg/l (ppm). Departamento de Química Página 5
6 Trabajo Práctico N 2 Análisis Espectrofotométrico de una solución de Sulfato de Cobre OBJETIVO Utilización del Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). Realización de curva de calibración (Abs.vs.λ), (Abs. vs. Conc.). Medición de muestras problemas. MATERIALES Matraces aforados de 100 ml. Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml. 1 vaso de precipitado de 500 ml. Pipetas de vidrio. Frasco lavador (pisetas). REACTIVOS Solución de Sulfato de Cobre de mg /L (ppm) (40 gr/l) Equipo: Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). CURVA DE CALIBRACIÓN A partir de solución de CuSO mg/l (ppm) se preparan, tres soluciones de ppm, ppm y ppm. Utilizo ppm como STD para obtener el factor. Diluciones: a partir de la solución madre (40000 ppm) preparar muestras incógnitas de: M 1 =10/25 (por duplicado), M 2 =10/50 (por duplicado), M 3 = 20/50 (por duplicado), M 4 =15/50Determinar en forma teórica la concentración esperada. Informar Usando la fórmula siguiente: V I.C I = V F. C F Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solución inicial (dato en línea punteada). Tener en cuenta que esto sólo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley Lambert Beer. Departamento de Química Página 6
7 SOLUCIONES A UTILIZAR ppm. = ml ppm. =.ml ppm. =.ml Se procede a medir en 640 nm cada patrón para obtener la curva de calibración (Abs.vs.Conc.) MEDIDA mg./l ABSORBANCIA (U.A) BLANCO 0 0 SOL SOL SOL SOL M1 10/25 M2 10/50 M3 20/50 M4 15/50 M 1 =10/25 (por duplicado), M 2 =10/50 (por duplicado), M 3 = 20/50 (por duplicado), M 4 =15/50. ANALISIS DE LA MUESTRA Se procederá la medición de las muestras problema. Muestra Problema N 1=.. (g/l) Muestra Problema N 2=.. (g/l) Se expresar el dato en mg/l (ppm). Departamento de Química Página 7
8 Trabajo Práctico N 3 Análisis Espectrofotométrico de Ácido salicílico OBJETIVO Cuantificar Ácido salicílico a partir de la síntesis de ácido acetil salicílico obtenido en el laboratorio de química orgánica II MATERIALES Matraces aforados de 50 ml. Vasos de precipitado de 100 ml. Probetas de 50ml Pipetas de vidrio. Tubos de Hemólisis Micro pipetas Frasco lavador (picetas). REACTIVOS Solución de 0,5 % m/v ligeramente ácido Equipo: Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibración. CURVA DE CALIBRACIÓN A partir de una solución de Ácido acetil Salicílico de 1.0g/l, preparar cuatro soluciones de 20 PPM, 30PPM, 40PPM y 60 PPM. Usar la fórmula siguiente: V I.C I = V F 1. C F Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales. Tener en cuenta que esto sólo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley Lambert Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia) 1 El volumen final serán tubos de 5ml. Departamento de Química Página 8
9 Técnica a realizar: Tubo Bco. Tubo estándar Tubo Mtra. Estándar ml Muestra ml Reactivo FeCl 3 2 ml 0.22 ml 0.22 ml Dejar de 2 a 5 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotómetro a 560 nm Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración. MEDIDA PPM ABSORBANCIA (U.A) BLANCO 0 0 estándar 1 20 estándar 2 30 estándar 3 40 estándar 4 60 Muestra1 Muestra 2 Muestra 1: Pipetear 1 ml de sc 20PPM más 2 ml sc de 30 PPM Muestra 2: Pipetear 1 ml de sc 60 PPM más 2 ml de sc de 40PPM Calcular la concentración teórica y comparar el resultado obtenido en forma práctica ANALISIS DE LA MUESTRA Una vez realizada la curva de calibración por Excel se procederá la medición de las muestras problema utilizando la fórmula lineal de dicha gráfica. Muestra Problema N 1=.. (PPM) Muestra Problema N 2=.. (PPM) Por ejemplo: concentración Absorbancia g/l blanco 0 0 Muestra problema Estándar 1 0,25 0,444 1 ml sc,,,,,,,0,25g/l Estándar 2 0,3 0,518 2ml sc..0,3 g/l Muestra 0, ,493 Departamento de Química Página 9
10 1000 ml,,,,,,,,,0,25 g Aas 1 ml 0,00025gr Soluto total 0, ,00025= 0,00085 gr Aas 1000ml,,,,,,,0,3 gr Aas 2 ml,,,,,,,,,0,0006 gr Aas Valor Teórico 0,283 gr /l Valor práctico 0,2822 gr/l 3 ml,,,,,,,,,0,00085 gr Aas 1000 ml,,,,,,,0,283 gr /l Curva de Calibración de Ac Salicílico Departamento de Química Página 10
11 Trabajo Práctico N 4 Análisis Espectrofotométrico de Nitritos en Agua OBJETIVO Cuantificar Nitritos a partir de una muestra de agua recolectada de una pecera del laboratorio de Biología. MATERIALES Vasos de precipitado de 100 ml. Pipetas de vidrio. Tubos de Hemólisis Micro pipetas Frasco lavador (picetas). REACTIVOS Solución de Acido Sulfanilico: Se pesan 3.3gramos de Acido Sulfanilico y se diluye con 800 ml de agua destilada caliente y se le agregan 200 ml de Acido Acético Glaciar. Solución de Acetato de Alfa Naftilamina: Se pesan 0.5 gr. de Alfa Naftilamina y se diluyen con 100 ml de agua destilada, se pone a hervir durante 5 minutos y se filtra atraves de un algodón, luego se agregan 200 ml deacido Acético Glaciar y se lleva a 1 litro con agua destilada, se debe guardar en una botella color caramelo. Equipo: Espectrofotómetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm). Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibración. CURVA DE CALIBRACIÓN Dilución del patrón de 1000 PPM: Realizar diluciones obteniendo concentraciones de 0.4 ppm, 0.6ppm, 0.8 y 1,0 ppm Usar la fórmula siguiente: V I.C I = V F 2. C F 2 El volumen final será de matraces de 100ml. Departamento de Química Página 11
12 Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales. Tener en cuenta que esto sólo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley Lambert Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia) Técnica a realizar: Tubo Bco. Tubo estándar Tubo Mtra. Estándar 0.4 ppm ml Estándar 0.6 ppm ml Estándar 0.8 ppm ml Estándar 1.0 ppm ml Muestra ml Reactivo A 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml Reactivo B 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml Dejar 15 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotómetro a 540 nm Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración. MEDIDA PPM ABSORBANCIA (U.A) BLANCO 0 0 estándar estándar estándar estándar Muestra1 Muestra 2 ANALISIS DE LA MUESTRA Una vez realizada la curva de calibración por Excel se procederá la medición de las muestras problema utilizando la fórmula lineal de dicha gráfica. Muestra Problema N 1=.. (PPM) Muestra Problema N 2=.. (PPM) Departamento de Química Página 12
13 Por ejemplo: concentración Absorbancia PPm blanco 0 0 Estándar 1 0,4 0,273 Estándar 2 0,6 0,366 Estándar Estándar Muestra 0,493 Departamento de Química Página 13
14 Espectroscopia de Absorción Atómica Pasos a seguir en el encendido del equipo 1. Elegir la opción a la que se va a trabajar (absorción o generador de hidruros) 2. En este caso absorción; y va haber dos opciones por absorción o emisión. 3. Si tenemos lámpara del elemento trabajamos por absorción. 4. Calibrar lámpara del elemento a medir. 5. Si esta seleccionada emisión de llama, se debe comprobar lo siguiente: 6. Contiene la solución aspirada, una elevada concentración del elemento que se está determinando (normalmente, el estándar más concentrado). 7. Establecer las condiciones recomendadas (alineación del nebulizador, optimizado del quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener la mayor concentración de átomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA antes de las mediciones de emisiones). NO SE USA LAMPARA. 8. Ir a herramientas- condiciones recomendadas y ver cuál es el rango en la concentración característica para realizar mi curva de calibración. 9. Ir a herramientas- Crear un método 10. Parámetros-Cargar los valores de estándar elegidos y el modo de lectura (en concentración o absorbancia) 11. Pasar a la pestaña Lámpara, seleccionar el elemento a trabajar. 12. Y por último ir a la pestaña Analizar. Como ajustar la velocidad de aspiración Antes de realizar cualquier medición en el equipo se debe chequear el ajuste del nebulizador: Aspirar una solución de Cobre 4PPM (Con su respectiva lámpara).entonces paso el blanco con agua y luego ajusto la medición con el nebulizador (perilla roja) hasta llevarlo a su máxima absorbancia Esto se realiza porque si la muestra pasa muy rápido no le da tiempo a absorber la luz. Tratamiento de la muestra Como habíamos dicho anteriormente la muestra debe ser atomizada pero para que esto suceda los minerales deben estar en solución Mostramos aquí dos tipos de digestión Digestión en base húmeda Hidrólisis ácida, sistema abierto. Se toma 1 gramo de la muestra a procesar (ej. Harina, para la medición de hierro) 7 ml de +4 ml Mechero suave o Manta eléctrica e ir subiendo la temperatura gradualmente va a liberar humo marrón (se libera el óxido nitroso) y sacarlo antes de que se seque. Si tiene mucha materia grasa se puede filtrar. Departamento de Química Página 14
15 Digestión en base seca-sistema cerrado Ej. Tomo 1 gr de galletita de agua light o salchicha para medir el contenido de sodio. En mechero carbonizo de 5 a 6 hs Luego en Mufla 0-500º C gradualmente /12 hs Mínimo Una vez que tengo las cenizas blancas le coloco unas gotas de nítrico concentrado con piceta, luego lo llevo a un volumen de 100 ml con agua bidestilada. Nota: El tiempo de mechero y mufla va a depender del material que quiero procesar. Cómo realizar una curva de calibración? Tengo un testigo de Cobre con una concentración de 1000 ppm Mis condiciones recomendadas que me marca el equipo para Cobre, me indican un parámetro lineal que va desde 0.5 a 2 ppm Tengo matraz de 100 ml. Ahora bien; si ya conocemos el parámetro de concentración que respeta la ley de Beer- Lambert. Sabemos que los estándares a preparar tienen que estar dentro de ese rango. Por ej. ST ppm ST ppm ST ppm Con la fórmula ya conocida vamos a calcular que volumen de testigo tenemos que tomar. Pasemos a los cálculos: Entonces mi primer estándar de calibración lo voy a preparar tomando 0.05 ml del testigo, con 100 ml de bidestilada. Logrando una concentración de 0.5 ppm. Realizamos lo mismo para el ST.2 y ST. 3- Sabiendo los pasos a seguir en el encendido del equipo; Como se realiza una curva de calibración y teniendo las técnicas de digestión. Estamos en condiciones de realizar mediciones de algunos minerales en distintos productos. Departamento de Química Página 15
16 Trabajo Práctico N 5 Análisis del Cu por Absorción Atómica OBJETIVO Determinación de una muestra de Cobre, por método de Absorción Atómica. MATERIALES Y REACTIVOS Matraces aforados de 100 ml. Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml. 1 vaso de precipitado de 500 ml. Pipetas de vidrio y Micro pipetas. Frasco lavador (pisetas). REACTIVOS Soluciones de patrones de Cu. De 1000 mg. /L. (ppm.) Ácido Nítrico HNO 3 H 2 0 Destilada. Equipo: Absorción Atómica Perkin Elmer AA200. Lámpara de Cátodo Hueco de Cu. Establecer las condiciones recomendadas (ajuste de lámpara, corriente de lámpara, ajuste del nebulizador, ajuste del quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener la mayor concentración de átomos en estado fundamental. Longitud de Onda Ranura (nm) Sensibilidad Lineal (mg/l) (nm) (mg/l) / / / / Oxidante Aire Flujo oxidante (l/min) 10 Flujo de acetileno (l/min) 2.5 Departamento de Química Página 16
17 CURVA DE CALIBRACIÓN A partir de soluciones de Cu de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml. + solución de HNO 3 AL 1% P/V. (permite que sea estable la solución). Según las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango de la linealidad (Ley de Lambert Beer). V I.C I = V F. C F Podemos calcular, con esta fórmula, cuanto hay que utilizar de la solución inicial. PATRONES A UTILIZAR 0.5 ppm.= 5 mg. /L.= 0.05 ml. De solución (50 μl) 1 ppm. =.. 2 ppm. =... 3 ppm. = 4 ppm. = 5 ppm. =... Para preparar el estándar de 0.5 ppm., debemos hacer una dilución si no contamos con una Micro pipeta (de 20 μl- 200 μl). Tomar 10 ml. de la solución inicial (1000 ppm.) colocar la sustancia en el matraz aforado de 100 ml. Llevar a volumen, obtendremos una solución de 100 mg. /L. Luego usando la Formula V I.C I = V F. C F V I = V F.C F /C I = ml. 0.5 mg. /L / 100 mg. /L = V i = L= 0.5 ml. También podemos partir de una solución de 5 ppm. Hacer el cálculo.?? Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración. ANALISIS DE LA MUESTRA MEDIDA mg./l ABSORBANCIA (U.A) Se procederá la medición de las muestras problema. Muestra N 3=.. Muestra N 4=.. Se expresara el dato en mg/l. Departamento de Química Página 17
18 Trabajo Práctico N 6 Análisis de Na por Emisión Atómica Objetivo Determinación de SODIO, por método de EMISION, en aguas minerales DATO TEORICO (EN ETIQUETA): SIERRA DE LOS PADRES: Na. 219 ppm. DATO TEORICO (EN ETIQUETA): VILLAVICENCIO: Na: 128 ppm. MATERIALES Y REACTIVOS Matraces aforados de 100 ml. Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml. 1 vaso de precipitado de 500 ml. Pipetas de vidrio y Micro pipetas Frasco lavador (picetas) REACTIVOS Soluciones de patrones de Na. De 1000 mg. /L. (ppm.) H20 Bidestilada. Equipo: Absorción Atómica/ emisión Perkin Elmer AA200 Si esta seleccionada emisión de llama, se debe comprobar lo siguiente: Contiene la solución aspirada, una elevada concentración del elemento que se está determinando (normalmente, el estándar más concentrado). Establecer las condiciones recomendadas (alineación del nebulizador, optimizado del quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener la mayor concentración de átomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA antes de las mediciones de emisiones). NO SE USA LAMPARA. Longitud de Onda (nm) Ranura (nm) Sensibilidad (mg/l) Lineal (mg/l) / Oxidante Aire Flujo oxidante (l/min) 10 Flujo de acetileno (l/min) 2.5 Departamento de Química Página 18
19 CURVA DE CALIBRACIÓN A partir de soluciones de Na de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml. Según las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango de la linealidad (Ley de Lambert Beer). Podemos calcular, con esta fórmula, cuanto hay que utilizar de la solución inicial. PATRONES A UTILIZAR 0.3 ppm.= 0.3 mg. /L.= 0.03 ml de patrón/100 ml de solución (30 μl de Patrón /100 ml) 1 ppm. =... 3 ppm. = 5 ppm. = Para preparar el estándar de 0.3 ppm., debemos hacer una dilución si no contamos con una Micro pipeta (de 20 μl- 200 μl). Tomar 10 ml. de la solución 3 ppm colocar la sustancia en el matraz aforado de 100 ml. Llevar a volumen, obtendremos una solución de 0.3 mg. /L. Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración. ANALISIS DE LA MUESTRA Se procederá la medición de las muestras problema. MEDIDA mg./l UNIDAD DE INTENSIDAD 1 0 BLANCO REALIZAR CÁLCULO PARA QUE ENTRE EN RANGO 4 ppm conociendo los datos de la etiqueta: Usar formula Muestra N SIERRA DE LOS PADRES=.. Muestra N VILLAVICENCIO= Se expresara el dato en mg/l. Realizar el informe de los datos obtenidos. Departamento de Química Página 19
20 Trabajo Práctico N 7 Análisis de Fe y Na por Absorción- Emisión Atómica. OBJETIVO Determinación de Hierro en una Harina 000, por método de Absorción Atómica. Determinación de Sodio en una galletita light, por método de Emisión Atómica. Determinación de Sodio en salchichas, por método de Emisión Atómica. MATERIALES Matraces aforados de 25 ml. 50 ml. 100 ml. Vaso de precipitados 20, 50, 100 ml. Pipetas. Piceta. Crisoles, Triangulo de tierras pipas. Mechero. Tela metálica. Mufla. REACTIVOS Acido nítrico. Acido clorhídrico. Agua destilada. Equipo: Absorción Atómica Perkin Elmer AA200 Lámpara de Cátodo Hueco de Fe. AA 200 en modo Emisión Atómica. Análisis de Hierro por Absorción Atómica en Harinas. Seguimos los mismos pasos que con el Cobre; seleccionamos Hierro en el equipo Herramientas Condiciones recomendadas, y conocemos con que rango lineal trabajar. Sabiendo estos datos elegimos cuántos estándar de calibración y que concentraciones queremos realizar. (El equipo me permite cargar hasta ocho estándares). La concentración del testigo también es de 1000 ppm. Departamento de Química Página 20
21 Tratamiento de la muestra: Tomamos 1 gramo de harina y realizamos la digestión en base húmeda, como vimos anteriormente. Si nos fijamos en la información nutricional en el paquete de la muestra que vamos a trabajar; nos indica la concentración de hierro, en base a ese dato calculamos: Por ej. El paquete me da una conc. de Hierro de 30 mg/ Kg gr. mtra mg. Fe 1 gr. mtra mg. Fe Como lo voy a llevar a un volumen 25 ml de bidestilada. 25 ml sc mg Fe 1000 ml sc mg / lt Fe Es decir que el valor que me tendría que dar en mi equipo es de 1.2 ppm. Y de esta manera estaríamos corroborando que la información que nos da el envase es la correcta. Trabajo Práctico N 8 Análisis de Sodio en salchichas por método por Emisión Atómica. Una vez realizada la curva de calibración 3 conociendo los rangos de conc. a trabajar, ídem a técnicas anteriores; pasamos a la preparación de la muestra: Por ej. Tomamos 1 gramo de salchicha y realizamos una digestión en base seca y pasamos a los cálculos: El paquete me informa que tiene una concentración de sodio de 640mg/ 50 gr de mtra. Entonces: 50gr.mtra 640mgr Na 1.0 gr mtra mg Na Como lo voy a llevar a un volumen de 100 ml. 100ml sc. 1000ml sc 12.8 mg Na 128 mg Na / lt sc. 3 Las curvas de calibración a realizar pueden ser altas o bajas; en este caso es una curva alta. Por ej. No es lo mismo medir sodio en panceta que en zapallo, para este último deberíamos realizar una curva de baja concentración. Departamento de Química Página 21
22 Como mi curva va hacer; según indican las condiciones recomendadas hasta 45 ppm, voy a tener que hacer una dilución para que me entre en la curva de calibración. Es decir en este caso diluir la muestra 1/5 (128ppm/ 5=25.6ppm) Entra bien, siempre hay que buscar un valor que este centrado en mi curva de calibración. Ahora bien, tenemos dos opciones de realizar la lectura: Pasar la muestra y el valor que me da multiplicarlo por la dilución, en este caso por 5. O decirle al equipo que le realicé esa dilución y el automáticamente me da el resultado final. Si elijo la última opción me tendría que dar como resultado aproximadamente 128 ppm, de lo contrario 25.6 ppm. Si es así podría confirmar que tiene 640mg/50g de muestra como indica el envase. Trabajo Práctico N 9 Análisis de Sodio en una galletita light por método de Emisión Atómica. El envase dice por ej. 530mg/100gr mtra. Realizar la práctica como hicimos anteriormente yendo previamente a condiciones recomendadas, realizar los cálculos para verificar que el resultado entre en la curva de calibración de lo contrario realizar una dilución a la muestra. Con el objetivo de afianzar los conocimientos adquiridos en los pasos a seguir en una curva de calibración, realizar la misma por Excel tomando como dato las absorbancias e intensidades (en el caso de emisión) y calcular la concentración de las muestras desconocidas. Trabajo Práctico N 10 Análisis de Hierro en zapallo por método de Absorción Atómica. Investigar qué cantidad de hierro contiene el zapallo. Una vez obtenido el dato Realizar la práctica como hicimos anteriormente 4, yendo previamente a condiciones recomendadas, realizar los cálculos para verificar que el resultado entre en la curva de calibración de lo contrario realizar una dilución a la muestra. PATRONES A UTILIZAR 1 ppm. =.. 2 ppm. =... 5 ppm. = 10 ppm. = 4 En este caso la hidrolisis ácida se realiza tomando 1 gr de pulpa de zapallo, con 8 ml de HNO 3 más 2 ml de H 2 O volúmenes en manta. Departamento de Química Página 22
23 Cromatografía líquida HPLC Trabajo Práctico N 11 Preparar patrones de tolueno y benceno de 5000ppm, 10000ppm, 15000ppm, y ppm, conociendo los datos que figuran en las botellas de dichos reactivos: Por ej. Benceno 0.88kg/lt = ppm Tolueno 0.86kg/lt = ppm Tengo matraz de 25 ml y conociendo la fórmula Calculamos que volumen tomar para realizar dichas concentraciones. Una vez realizadas, hacemos las inyecciones en el HPLC con dichas variables: Caudal: 0.8 mv Presión: 3000 PSI Columna: Solvente: MeOH/ (70:30) Temperatura: 30 ºC Área (mv.s) (seg) 2 4 T En las inyecciones realizadas nos quedara un gráfico de este tipo; va a estar dado en función de tiempo en unidad de segundos y señal de respuesta en mili voltios, a mayor concentración, mayor señal en mv. Donde el tiempo de retención va a cambiar modificando algunas de las variables (ej.la conc. del solvente en la fase móvil). Una vez obtenidos los valores de área para cada concentración, por el programa Excel o el software clarity realizamos la curva de calibración para cada sustancia (tolueno y benceno). Nos aseguramos que cumpla la ley de beer-lamber. Departamento de Química Página 23
24 Por ej. TOLUENO Conc. área(mv.s) PPM , , ,8 Donde el eje de la abscisa representa los valores de la concentración en PPM y el eje de las ordenadas representa a los valores obtenidos de dicha área. Recordemos la guía anterior cómo hacer para sacar la fórmula y el coef. R que me marca la linealidad de la función. Hacer lo mismo para el benceno y luego se les dará una muestra problema de concentración desconocida. Sabiendo que dicha muestra se encuentra el tolueno y el benceno Calcular en que concentración se hallan e identificar cual de los picos encontrados en distinto tiempo de retención, representan a cada una de las sustancias. Para calcular ambas concentraciones el área obtenida llevarla a la formula que nos da Excel; en este ejemplo sería y=2,079x. Donde y= área muestra problema, X=??? nuestra concentración desconocida. Entonces despejamos X de dicha fórmula y nos da la conc. a saber. Por último cambiar la concentración del solvente (fase móvil) a 50:50 e inyectar cualquiera de las muestras anteriores, observar que pasa y sacar sus conclusiones. Departamento de Química Página 24
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