UNIVERSIDAD DE LAS PALMAS DE GRAN CANARIA
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- Domingo Palma Salazar
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1 UNIVERSIDAD DE LAS PALMAS DE GRAN CANARIA DEPARTAMENTO DE QUÍMICA TESIS DOCTORAL DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN. ESTUDIO CUALITATIVO Y CUANTITATIVO DE AMINOÁCIDOS LIBRES EN ALGAS Y SU VARIACION POR CONDICIONES DE CULTIVO Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Biblioteca Digital, 2003 JUANA ROSA BETANCORT RODRÍGUEZ Las Palmas de Gran Canaria, septiembre de 1997
2 Título de la tesis: DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN. ESTUDIO CUALITATIVO Y CUANTITATIVO DE AMINOÁCIDOS LIBRES EN ALGAS Y SU VARIACION POR CONDICIONES DE CULTIVO Thesis title: DETERMINATION OF AMINOACIDS BY LIQUID CHROMATOGRAPHY OF HI-RES. QUALITATIVE AND QUANTITATIVE STUDY OF FREE AMINOACIDS IN SEAWEED AND THEIR VARIATION BY CONDITIONS OF CULTURE Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Biblioteca Digital, 2003
3 Resumen En el presente trabajo se establece un método analítico, usando la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, para la determinación cualitativa y cuantitativa de aminoácidos libres en algas y se estudia la aplicación de surfactantes para la mejora del método. Se estudia el efecto de la disponibilidad de nitrógeno en el medio de cultivo sobre la composición de aminoácidos libres, pigmentos y proteínas en la macroalga Ulva rígida y se comprobó que la limitación de nitrógeno en el medio de cultivo provoca una disminución muy marcada los contenidos de clorofilas a y b, proteínas totales y aminoácidos libres y que estos actúan como almacenamiento de nitrógeno cuando éste está disponible en el medio, para ser utilizado posteriormente cuando las condiciones se vuelven limitantes. Además se estudia el efecto de la variación del perfil de aminoácidos de la microalga Chlorella pyrenoidosa variando la fuente de carbono y por otro lado variando la fuente de nitrógeno. Se comprueba que la fuente de carbono varía considerablemente el contenido total en aminoácidos libres, así como su perfil y que la limitación de CO2 en los cultivos de Chlorella produce una reducción de los contenidos intracelulares de ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico y asparagina. El contenido total en aminoácidos libres alcanza su valor máximo para los cultivos con amonio, seguido de los de nitrato y por último con urea. Sin embargo, el perfil no se ve afectado por la naturaleza de la fuente nitrogenada. Se determinan las características espectrofluorimétricas convencionales del derivado OPA-lisina en presencia de los surfactantes Brij 35, Brij 96, POLE, TX-100, HDTAB, NaLS y se comparan con las obtenidas en medios acuosos. Se observa que todos los surfactantes empleados aumentan considerablemente la señal de fluorescencia del derivado, obteniéndose los valores más elevados para el TX-100 y el POLE. Se establece un método analítico, usando la Cromatografía Líquida de Alta Eficacia, para la determinación cualitativa y cuantitativa de aminoácidos en presencia del surfactante POLE. El método puesto a punto presenta una serie de ventajas con respecto al método en ausencia de surfactante, por una parte se redujeron los porcentajes de error en la determinación de todos los aminoácidos derivados, y por otra, se reducen los límites de detección de los aminoácidos lisina, histidina, y valina. El método propuesto se aplicó a una muestra del alga Ulva rígida cultivada en condiciones de invernadero. Con el empleo de surfactante se pueden determinar los aminoácidos glicina, tiroxina, valina, fenilalanina, isoleucina, leucina y lisina, los cuales, en las mismas condiciones de cultivo, no pueden ser detectados por el método establecido en ausencia de POLE. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Biblioteca Digital, 2003
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