Este método describe un procedimiento de cromatografía de gas para analizar residuos de Diquat y Paraquat en suelo y forrajes.
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- Felisa Vera Vega
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1 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 1 de 6 1. OBJETIVO Este método describe un procedimiento de cromatografía de gas para analizar residuos de Diquat y Paraquat en suelo y forrajes. 2. ALCANCE DE LA APLICACIÓN Este método describe un procedimiento de cromatografía de gas para analizar bajos niveles de residuos de Diquat y Paraquat en suelo, incluye parámetros cromatográficos, procedimiento de limpieza. 3. FUNDAMENTO TEÓRICO En resumen el método envuelve la extracción por hidrólisis ácida, limpieza y concentración por cromatografía de intercambio iónico, seguido por una reducción con borohidruro de sodio y luego el producto de reducción es medido por cromatografía de gas usando detector de Nitrógeno y fósforo (NPD). 4. ASPECTOS DE SALUD Y SEGURIDAD LABORAL Manipúlese con precaución muestras y reactivos, evitando el contacto con piel y ropa. Utilícese, bata, guantes de protección, gafas de seguridad, cabinas de extracción y máscara para vapores. 5. EQUIPOS 5.1. Mantas de calentamiento 5.2. Baño de agua 5.3. Rotavapor 5.4. Papel filtro 5.5. Cromatógrafo de gases 5.6. Columna cromatográfica de 15 m*0,53 mm ID methylsilicone (DB-1) 5.7. Cromatógrafo de gases con Detector NPD. Programación: Temperatura del inyector: 250 ºC Temperatura del horno: 150 ºC Temperatura del detector: 300 ºC Flujo del gas: Helio 10 ml/min Gas de make-up: 20 ml/min Flujo de hidrógeno: 3,5 ml/min Flujo de aire: 110 ml/min 6. REACTIVOS 6.1. Agua desionizada
2 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 2 de Dietil éter grado reactivo 6.3. Hexano calidad pesticidas 6.4. Borohidruro de sodio 6.5. Metanol grado HPLC 6.6. Acido sulfúrico, grado reactivo 6.7. Acido clorhídrico, grado reactivo 6.8. Hidróxido de sodio, grado reactivo 6.9. Cloruro de amonio, grado reactivo Resina de intercambio Dowex 50W-X8: Prepare una suspensión de 20 g de resina en 30 ml de agua Cloruro de sodio, grado reactivo Estándar de referencia de Diquat y Paraquat 7. MATERIALES E INSUMOS 7.1. Matraz de fondo redondo de 500 ml 7.2. Condensadores 7.3. Columna de vidrio 200 mm de largo por 10 mm de diámetro con llave de teflón 7.4. Embudos de separación de 500 ml o 1000 ml Embudo buchner 12,5 cm de diámetro 7.6. Matraz de filtración con desprendimiento lateral de 500 ml 7.7. Papel filtro cualitativo de 15 cm de diámetro 7.8. Beakers de 500 ml 8. CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA Véase protocolo Toma y Preservación de Muestras y Limpieza de Material para Determinación de Plaguicidas Almacene las muestras en recipientes de PVC de alta densidad ámbar o vidrio ámbar silanizado y refrigere a 4ºC. Proteja de la luz los analitos son sensibles a la luz Extraiga las muestras dentro de los 7 días después de la toma de muestra y analice los extractos dentro de los 21 días después de extraídos. 9. LIMPIEZA DE MATERIAL Véase protocolo Toma y Preservación de Muestras y Limpieza de Material para Determinación de Plaguicidas.
3 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 3 de PREPARACIÓN DE MUESTRAS Extracción Transfiera 50 g de muestra previamente homogenizada a un matraz de ebullición Tome también 50 g de muestra de control y fortifique con estándar de 1 5 mg/ml de catión de Diquat y Paraquat en agua Añada 100 ml de de acido sulfúrico 13 N y lleve a reflujo por 5 horas Si se presenta espuma añada un poco de alcohol caprílico y agite hasta que el suelo se humedezca completamente Permita que se enfríe y añada 100 ml de agua destilada Filtre la mezcla a través de papel filtro con succión a través de un embudo buchner Lave el matraz de digestión y la torta filtrada con porciones de 100 ml de agua Transfiera la muestra a una probeta graduada y ajuste el volumen a 500 ml con agua Mezcle y luego transfiera la muestra un recipiente plástico con tapa rosca Si se requiere reportar el resultado en base seca por separado determine el contenido de humedad a 10g de la muestra Limpieza con Columna de Intercambio Iónico Coloque un tapón de lana de vidrio en el fondo de la columna de intercambio y añada 4 ml de resina sedimentada en agua y encima ponga otro poco de lana de vidrio. Mantenga la columna cubierta con agua por encima del nivel de la resina todo el tiempo. Use una columna recién preparada para cada muestra Transfiera una alícuota de 100 ml del extracto de la muestra a la columna. Use vacío si es necesario para hacer pasar el extracto a una velocidad de 10 ml/min Realice un lavado con 25 ml de agua y permita que la resina se re-sedimente Lave con una porción adicional de 25 ml de agua Lave la columna con 25 ml de ácido clorhídrico 2N Lave la columna con 25 ml de cloruro de amonio 1/10, seguido por 50 ml de agua. Descarte todos los eluatos de la columna Añada una pequeña cantidad de cloruro de amonio sólido en la superficie de la columna Eluya la columna con solución saturada de cloruro de amonio a una velocidad de 0,5-1 ml/min, colecte exactamente 25 ml de eluato Reducción y Extracción Añada aproximadamente 1 g de borohidruro de sodio a un beaker que contiene 15 ml de hidróxido de sodio acuoso y mezcle Añada lentamente el eluato de la columna a la mezcla de borohidruro con agitación continua. (Se liberaran vapores de amonio se recomienda trabajar en cabina de extracción) Lleve la muestra a un baño de agua a ºC por 10 minutos.
4 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 4 de Permita que la muestra se enfríe y transfiérala a un embudo de separación Lave el beaker y el extracto de la muestra con 25 ml de dietiléter Descarte la capa inferior acuosa Extraiga la capa etérea con 10 ml de ácido clorhídrico 1N Drene el ácido en un segundo embudo de separación y añada 3 ml de hidróxido de sodio 5 N y 5 ml de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio Mezcle y extraiga la muestra con 20 ml de hexano al 50% en dietileter Transfiera la capa acuosa a otro embudo de separación y re-extraiga con 10 ml de hexano al 50% en dietileter Combine los extractos orgánicos en un matraz de fondo plano y evapore a sequedad usando rotavapor y un baño a temperatura ambiente Disuelva la mezcla en 2 ml de metanol básico (diluir 2,6 ml de hidróxido de sodio 5N a 50 ml con metanol) Preparación del Estándar de Referencia Añada 1 ml de estándar de Diquat y de Paraquat de 5 µg/ml en 24 ml de cloruro de amonio saturado Proceda con los pasos de reducción y extracción Disuelva el extracto seco en 5 ml de de metanol básico para obtener una concentración de 1 µg/ml. Diluya el estándar de Diquat y Paraquat con metanol básico para obtener estándares de concentración de 0,05-0,1-0,25 0,40 y 0,50 µg/ml 11. PROCEDIMIENTO ANALÍTICO Transfiera las soluciones a viales Inyecte las muestras en el siguiente orden: Estándares, lavado con metanol, muestra control, muestra fortificada, estándar, lavado de metanol, muestra, muestra, Estándar Se debe inyectar 1 µl de muestra. 12. METODOLOGÍA DE CÁLCULO Para calcular la concentración de Diquat y Paraquat en las muestras aplique la siguiente ecuación: concentrat ion g / kg x V D x S : masa del analito (ng) calculada en la alícuota de la muestra introducida en el instrumento. V : Volumen total del extracto concentrado (µul). Para purga y trampa Vt es 1. t s W t s V i
5 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 5 de 6 D : Factor de dilución, si la muestra o extracto fue diluido antes del análisis. Si no se hizo dilución, el valor es 1. V i : Volumen de extracto inyectado en µl. El volumen de inyección nominal para las muestras y estándares de calibración deben ser la misma. Nota: si se usan unidades de concentración en el cálculo del factor de calibración, el factor Vi no debe ser tenido en cuenta en la ecuación. W : Peso de la muestra extraída o purgada en g. Se puede usar tanto el peso seco como s el peso húmedo, dependiendo de la aplicación que se le va a dar a los datos. 13. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ANALÍTICA Ver el documento Aseguramiento de la Calidad y Estandarización de Métodos Cromatográficos Recomendaciones Generales para Aplicación del Método a. El límite de detección determinado por la referencia es de aproximadamente 0,01 mg/l para una muestra de 50 g de suelo. b. Todos los estándares de Diquat y Paraquat deben ser almacenados en la oscuridad cuando no se usan. El estándar de fortificación en agua es preparado en materiales plásticos para reducir la adsorción. c. Una muestra fortificada debe ser analizada con cada grupo de muestras. Las recuperaciones del método deben estar entre % como rango aceptable. Las muestras fortificadas que no cumplan con el criterio de recuperación deben ser reanalizadas. d. Para suelos o sedimentos con alto contenido de arcilla, incremente el tiempo de reflujo con ácido sulfúrico a 10 horas, ya que se obtienen bajas recuperación cuando el reflujo se realiza por 5 horas. e. La linealidad del sistema de medida debe ser verificada diariamente. El coeficiente de variación de los factores de respuesta de los cinco estándares preparados debe ser menor al 10%. f. El coeficiente de variación de las mediciones del estándar debe ser máximo del 5%. g. Las soluciones de lavado con metanol están incluidas en la secuencia para prevenir la contaminación de los extractos de las muestras con Diquat y Paraquat de los estándares. h. Este procedimiento separa Diquat de Paraquat. El producto de reducción del Diquat tiene un tiempo de retención de 3,7 minutos y producto de reducción del Paraquat tiene un tiempo de retención de 4,3 minutos. i. La reducción del Diquat y Paraquat genera 4 productos, la cuantificación se realiza con el producto que da mayor respuesta, el cual tiene el mayor tiempo de retención. Los experimentos preliminares han demostrado que la reproducibilidad de la reacción de reducción es suficiente para estimar bajos niveles de Diquat y Paraquat en suelo.
6 Código: XXXXXX 31/12/2008 Versión: 01 Página 6 de PROPUESTA DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO Ver el documento Aseguramiento de la Calidad y Estandarización de Métodos Cromatográficos. 15. BIBLIOGRAFÍA Chevron Chemical Company. Agricultural Chemicals Division. Development Research Department. Richmond California. Determination of Diquat Residues in soil by gas chromatography method. Method RM-SG-1. July Determination of Diquat and Paraquat in Drinking Water by liquid-solid extraction and High Performance Liquid Chromatography Ultaviolet Detection. Revision 1 June 1997.
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