MACROPROCESO GESTIÓN DE

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1 MACROPROCESO GESTIÓN DE INFRAESTRUCTURA PROCESO EJECUCIÓN DEL MANTENIMIENTO INSTRUCTIVO MANEJO DEL REVISADO POR Asistente de Investigación APROBADO POR Director Instituto de Errores Innatos del Metabolismo

2 1. OBJETIVO Describir las instrucciones para el adecuado manejo en el servicio de rutina del analizador de aminoácidos Biochrom 20 HPLC, utilizado para la determinación de aminoácidos en muestras de LCR, plasma y orina en el Instituto de Errores Innatos del Metabolismo. 2. CONDICIONES GENERALES Este equipo es de manejo exclusivo del personal capacitado para su uso, previo entrenamiento respectivo. Dicho personal, esta en la obligación de cumplir las instrucciones descritas en el presente documento. 3. DEFINICIONES Cromatógrafo: equipo de separación cuyas partes principales para este procedimiento son: el inyector, bombas, sistema de flujo, la columna, el coil de reacción y fotómetro. Capsula de Inyección: capsulas de polipropileno con una capacidad de carga de 120 µl dentro de la cual se inserta la muestra a analizar. Inyector: parte del cromatógrafo donde se introduce la capsula de inyección cargada con la muestra. Sistema de flujo: Está constituido por un sistema de tuberías de pequeño calibre. Columna: pieza capilar que contiene resina de intercambio catiónico con un tamaño de partícula de 9µm ± 0.5µm. Coil de Reacción: pieza del cromatógrafo en donde se lleva a cabo la reacción entre la muestra que ha pasado previamente por la columna y el derivatizante a altas temperaturas. Fotómetro: sistema de detección que permite medir el cambio de la intensidad de la luz que pasa a través de una muestra. Elaborado por la Oficina de Organización y Métodos Página 2 de 6

3 4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO 1. Enciende el equipo y verifica que el tanque de nitrógeno ultra alta pureza y la válvula de entrada al equipo, se encuentren abiertas. Acciona el interruptor ubicado en la parte lateral izquierda del equipo. 2. Selecciona en el computador el icono correspondiente a Biochrom 20, con lo cual aparecerá la pantalla denominada Amino Acid Analyser Programmer. 3. Enciende el Coil de reacción seleccionando la casilla Coil en la ventana inicial del Biochrom 20, para aumentar la temperatura a 130 C. Verifica la temperatura actual del Coil, seleccionando la opción Temperatures. 4. Verifica las presiones de acuerdo a las siguientes actividades: a) Selecciona en la pantalla inicial del Biochrom 20 la opción Pressures para observar el rango óptimo de presión del Buffer, Ninhidrina y el Coil de Reacción. b) Selecciona la opción Manual seguida de la opción Manual Operation - Buffer-1-Enter para encender la bomba del Buffer e iniciar el flujo de este. c) Selecciona la casilla NIN para encender la bomba e iniciar el flujo de ninhidrina (El flujo de ninhidrina no empieza hasta que el coil se encuentre por encima de los 100 C). d) Observa las barras de presión del Buffer, Ninhidrina y Coli, las cuales deben en estar en la zona blanca indicadora. En caso contrario, alguna de las presiones el equipo automáticamente detiene el flujo e indica el error. 5. Inserta los datos de la muestra mediante las siguientes instrucciones: a) Selecciona en la pantalla inicial del Biochrom 20 Samples, la cual muestra una nueva ventana denominada Sample List Editor. b) Selecciona la opción Insert, la cual muestra nueva ventana denominada Program Details. c) Selecciona la opción Filename y el nombre del programa que desea utilizar, en este caso NOV2002. d) Escribe el nombre del paciente en la casilla Title y selecciona la opción OK, con lo cual aparecen los datos en al ventana Sample Last Editor. e) Selecciona la opción Close Elaborado por la Oficina de Organización y Métodos Página 3 de 6

4 6. Carga la cápsula del auto-inyector con la muestra. Selecciona la opción Unload en la ventana Manual Operation, para que se mueva el carro del automuestreador e introduce la capsula en la ranura. Selecciona la opción Capsule Load seguida de Colse. 7. Selecciona en la pantalla inicial del Biochrom 20 las casillas Lamp, Recorder y Override. 8. Inserta los datos de la muestra en el programa de análisis de datos, seleccionando el icono Ezchro Chromatography Data Analysis opción Bio en el escritorio. 9. Selecciona el ícono Samples ubicado en la parte superior derecha y coloca los siguientes datos: Nombre del paciente y el tipo de muestra en la casilla Sample ID. Código de identificación de la muestra en la casilla Save Run As. Selecciona la opción Start Run y vuelve a la pantalla principal del Biochrom Inicia la corrida de la muestra seleccionando la opción Run. 11. Ubica la ventana Ezchro Chromatography Data Analysis y selecciona la opción OK. Al finalizar la corrida aparece una ventana indicando que la corrida fue exitosa. Selecciona la opción Ok, con lo cual abre el carro del automuestreador y libera la cápsula de inyección cargada. Toma la capsula y la colca en agua destilada. 12. Realiza el análisis de los datos, de acuerdo al POE Análisis de aminoácidos por HPLC (SE-P31-POE19). 13. Apaga el equipo accionando el interruptor en la parte lateral inferior del equipo. Cierra la llave de entrada de nitrógeno al equipo. 14. Registra en el Formato de uso HPLC (IF-P20-F03) las condiciones y parámetros de control del equipo. Elaborado por la Oficina de Organización y Métodos Página 4 de 6

5 5. PRECAUCIONES GENERALES La ninhidrina es mutagénica por lo cual el equipo debe ser manipulado con guantes de nitrilo. Tenga cuidado en caso de destapar el equipo, tenga en cuenta que el coil de reacción usualmente se mantiene a temperaturas superiores a 100 C. Verifique con frecuencia el nivel de Nitrógeno en el tanque, el de los Buffers y la Ninhidrina. Para la limpieza y mantenimiento del equipo, comuníquese con los técnicos representantes de la casa comercial. Elaborado por la Oficina de Organización y Métodos Página 5 de 6

6 6. RELACIÓN DE REGISTROS NOMBRE Formato de uso HPLC CÓDIGO IF-P20-F03 Elaborado por la Oficina de Organización y Métodos Página 6 de 6