OBTENCIÓN DE EXTRACTOS DE BREZO (Calluna vulgaris) CON FLUIDOS SUPERCRÍTICOS Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD FRENTE AL VIRUS DE LA HEPATITIS C

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Clara Rubio de la Cruz
hace 6 años
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1 OBTENCIÓN DE EXTRACTOS DE BREZO (Calluna vulgaris) CON FLUIDOS SUPERCRÍTICOS Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD FRENTE AL VIRUS DE LA HEPATITIS C Departamento de Producción y Caracterización de Nuevos Alimentos Grupo Ingredientes Alimentarios Funcionales Centro Biología Molecular Severo Ochoa

INTRODUCCIÓN VIRUS HEPATITIS C 2,8% POBLACIÓN INFECTADA 350.

2 INTRODUCCIÓN VIRUS HEPATITIS C 2,8% POBLACIÓN INFECTADA MUERTES/AÑO NO EXISTE VACUNA INTERFERÓN (IFN-) + RIBAVIRINA efectos secundarios Síntomas ~ gripe Anemia hemolítica Efectos teratológicos Necesidad de nuevos agentes con alto índice terapéutico y pocos efectos secundarios

3 INTRODUCCIÓN HO OH O Acido oleanólico HO OH O Acido ursólico ANTIINFLAMATORIA ANTI-TUMORAL ANTI-REUMÁTICO HEPATOPROTECTORA ANTIVIRAL HEPATITIS C

INTRODUCCIÓN Cicatrizante Antiinflamatorio Afecciones infecciosas vías urinarias Antiespasmódico Brezo (Calluna vulgaris) FITOQUÍMICOS: ANTIOXIDANTES,

4 INTRODUCCIÓN Cicatrizante Antiinflamatorio Afecciones infecciosas vías urinarias Antiespasmódico Brezo (Calluna vulgaris) FITOQUÍMICOS: ANTIOXIDANTES, ANTIINFLAMATORIOS, ANTICANCERÍGENOS Quercetina Acido clorogénico kaempferol-3-o-β-dgalactosido α,β-amirina Sitosterol Acido ursólico (52 mg/g) Acido oleanólico (11 mg/g)

5 INTRODUCCIÓN Szakiel y col µg/g extracto flores 125 µg/g extracto hojas 75 µg/g extracto flores 398 µg/g extracto hojas Zhao, 2011 Extractos SFE: Taraxasterol, Friedelinol, α,β- amirin SFE OBTENCIÓN DE NUTRACEUTICOS E INGREDIENTES ALIMENTARIOS Celda de extracción 2 L Separadores (S1, S2) 0.5 L Recirculación CO 2 Bomba cosolvente A. Szakiel, B. Nizynski and C. Paczkowski. Natural Product Research (15) J. Zhao. The extraction of high value chemicals from heather (Calluna vulgaris) and bracken (Pteridium aquilinum). PhD Thesis, University of, 2011.

6 CONDICIONES DE EXTRACCIÓN Ext. P T Tiempo Caudal CO 2 co-solvente (MPa) (ºC) (h) (g/ min) (% etanol) Ext. P T Tiempo Caudal CO 2 co-solvente (MPa) (ºC) (h) (g/ min) (% etanol) 11a S b S2 12a Etapa b Etapa

7 P (bar) RESULTADOS SFE: EFECTO DE LA PRESIÓN ºC P (bar) ºC OA UA mg/g extrato

8 T (ºC) Rendimiento (%) RESULTADOS SFE: EFECTO DE LA TEMPERATURA Rendimiento Variación del rendimiento con la Tª de extracción a presión constante de 400 bar Tª (ºC) Concentración de triterpenos Variación de extracción triterpenos con la Tª de extracción a presión constante de 400 bar OA UA mg/g extrato

9 cosolvente (%) Rendimiento (%) RESULTADOS SFE: EFECTO DEL % COSOLVENTE Rendimiento Variación del rendimiento con el % de cosolvente a presión y Tª constantes (300 bar, 50ºC) Cosolvente (%) Concentración de triterpenos Variación de extracción triterpenos con el % de cosolvente a presión y Tª constantes (300 bar, 50ºC) OA UA mg/g extrato

10 RESULTADOS SFE: FRACCIONAMIENTO Ext. Rendimiento Ácido oleanolico Ácido ursolico (%) (mg/g extracto) (mg/g extracto) 11a S b S El fraccionamiento en línea del extracto (Ext.11) produce: rendimiento S2 >S1, [triterpenos] >S1. Ext. Rendimiento Ácido oleanolico Ácido ursolico (%) (mg/g extracto) (mg/g extracto) 12a Step b Step Cuando la extracción se lleva a cabo en dos etapas (Ext.12) el uso de etanol en la segunda etapa da como resultado: rendimientos, [triterpenos]. En el brezo ursólico>oleanólico (ratio ursólico/oleanólico 4), sin embargo solubilidad oleanólico>ursólico en etanol produce: uso cosolvente ratio (ratio ursólico/oleanólico 0.7).

11 RESULTADOS: ACTIVIDAD ANTI-HCV CC50 Ext. OA (mg/g extracto) UA (mg/g extracto) Indice Terapéutico (CC50/IC50) Diluciones extractos SFE-brezo Células Huh7.5 no infectadas Diluciones extractos SFE-brezo Células Huh7.5 infectadas con HCVcc IC a b OA UA 5.00 Actividad Anti-HCV extractos IT>1 Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (CSIC-UAM), Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC)

12 mg/g oleanolic + ursoli acids Therapeutic Index (TI) TI (CC50/IC50) TI (CC50/IC50) RESULTADOS: ACTIVIDAD ANTI-HCV mg/g olenolic acid mg/g ursolic acid Uso etanol como cosolvente aumenta la concentración de ácidos triterpénicos en los extractos pero reduce el TI ethanol/heather ratio

13 CONCLUSIONES La SFE permite obtener extractos con altas concentraciones de ácidos triterpénicos (oleanólico y ursólico) (2-22 % en peso). Los extractos supercríticos de brezo presentan actividad anti-hcv. Algunos extractos presentan índices terapéuticos cercanos a los del ácido ursólico aunque dos veces menores que los del ácido oleanólico. Aunque es necesario continuar con las investigaciones, los extractos supercríticos de brezo podrían presentar una alternativa terapéutica contra el virus de la Hepatitis C.

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