TEMA 3. RECOGIDA Y MANIPULACIÓN N DE MUESTRAS. COLORANTES EN HEMATOLOGÍA

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1 TEMA 3. RECOGIDA Y MANIPULACIÓN N DE MUESTRAS. COLORANTES EN HEMATOLOGÍA NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA #Punción venosa Región antecubital, yugular o femoral en RN, dorso de la mano y pie en ancianos y obesos Punción limpia. Evitar coágulos En pacientes con terapia de anticoagulante se debe presionar la herida durante 10 min. Procedimiento Brazo caliente y cinta elástica en el brazo Cerrar el puño para ver las venas Limpiar con solución desinfectante Realizar punción limpia Liberar el compresor Abrir puño y extraer aguja. Presionar 1

2 NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA #Punción venosa Tubos estériles al vacío con anticoagulante En el caso de jeringa y aguja se llenan de sangre los tubos (que llevan anticoagulante), quitando previamente la aguja y resbalando la sangre por la pared de los tubos, y se mezcla por inmersión Tubos bien identificados. Botón rojo muestras infectocontagiosas NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA #Punción capilar Muestras de sangre pequeñas o dificultades para realizar la venopunción Pulpejo del dedo, lóbulo oreja o talón del pie (RN) Lancetas estériles con un tope Técnica: Vasodilatación Desinfectar y secar Pinchar con la lanceta, desechar las primeras gotas y llenar el capilar o pipetas Extensiones de sangre periférica, Hematocrito, Hb 2

3 ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA #Utilidades anticoagulantes Obtener plasma o muestras de sangre total Estudiar características morfológicas Realizar recuentos celulares #Propiedades anticoagulantes No alterar la morfología de los leucocitos No alterar el tamaño eritrocitario No producir hemólisis Impedir agregación plaquetaria Máximo tiempo de conservación de la muestra ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA #EDTA Efecto quelante sobre el Ca EDTA-Na 2 EDTA-K 3. Para recuento celular en autoanalizador #Heparina Impide el paso protrombina trombina No modifica las características celulares de leucocitos y eritrocitos, pero proporciona color azul en los frotis de tinciones panópticas 3

4 ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA #Citrato sódico Impide ionización del Ca Se utiliza en: Pruebas de hemostasia (1:9) VSG (1:4) #Oxalato sódico Pruebas de hemostasia (1:4) #ACD (Ácido cítrico 0,9 g; Citrato sódico 2 g; Dextrosa 2 g; H 2 O 120 ml) Bancos de sangre (1:4) EXTENSIONES DE SANGRE Materiales: Portaobjetos esmerilados, limpios y libres de grasa Cubreobjetos Método de los dos portaobjetos: Depositar una gota de sangre en un extremo del portaobjetos Colocar otro portaobjetos sobre el anterior con la gota de sangre, con una inclinación de 45º Desplazarlo hacia atrás hasta entrar en contacto con la gota y permitir que, por capilarización, la gota se extienda a lo largo del canto del portaobjetos Deslizar el segundo portaobjetos inclinado sobre el primero de manera suave y rápida, para permitir que la gota de sangre queda extendida A mayor inclinación, extensión más gruesa. Menor inclinación = extensión más fina Secado a temperatura ambiente 4

5 EXTENSIONES DE SANGRE Realización de un frotis EXTENSIONES DE SANGRE Partes de un frotis Método de los dos cubreobjetos Métodos de los dos cubreobjetos: Dos cubres sin grasa limpios y secos Colocar en uno una pequeña gota de sangre Sujetarlo por los vértices e invertirlo colocándolo sobre el otro rotándolo 45 º Por capilaridad se extiende la gota Secar 5

6 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS #Para el laboratorio de hemostasia (citrato Na) PPP (1500 g 15 min.): TP, TTPA, fibrinógeno PRP (<500 g 15 min.): Determinación de plaquetas #Para el laboratorio de hematimetría (EDTA-K 3 ) Recuentos celulares Recuento de reticulocitos Índices eritrocitarios Índices plaquetarios Hb Hematocrito COLORANTES EN HEMATOLOGÍA #Fijación calor seco alcoholes formaldehído acetona metanol (el mejor para morfología) #Objetivo de las tinciones Identificar células Identificar estructuras subcelulares #Formas de transmitir el color un colorante Su propio color Un color distinto Metacromasia Más de un color Alocromasia 6

7 COLORANTES EN HEMATOLOGÍA #Tipos de colorantes Básicos (catiónicos): basofilia Ácidos (aniónicos): acidofilia Neutros (aniónicos y catiónicos): acidofilia o basofilia #Tipos de tinciones Tinción pancromática: azul de metileno, eosina, Wright Tinción panóptica: May-Grünwald-Giemsa #Terminología COLORANTES EN HEMATOLOGÍA Acidofilia: Avidez por colorantes ácidos (e.g. eosinófilos) Basofilia: Avidez por colorantes básicos (e.g. basófilos) Azurofilia: Coloración violácea-rojiza (y no azul) Hipocromía: Falta de intensidad en la coloración (e.g. Anemia ferropénica) Hipercromía: Refuerzo de la tinción Anisocromía: Distintas intensidades de la coloración en el mismo tipo de células Policromasia: Distinto color en el mismo tipo celular 7