Prácticas fisiología sangre y sistema inmunitario.

Transcripción

1 Prácticas fisiología sangre y sistema inmunitario. Práctica 1: extracción de sangre Material Jeringuilla Agujas endovenosas Tubos de vacío o Vacutainer Algodón Cinta elástica Gasas Alcohol etílico 70% Guantes Contenedor para residuos biológicos 1. Colocar al paciente sentado, poner su brazo encima de la mesa 2. Localizar la vena para la extracción. Si no se localiza a simple vista, se puede palpar para asegurar donde vamos a pinchar. 3. Colocamos la cinta elástica de manera que apriete el brazo y podamos quitarla bien al finalizar la extracción 4. Una vez nos aseguremos de haber localizado la vena, desinfectamos la zona con el alcohol y esperamos que se seque la zona antes de pinchar. 5. Introducimos la aguja con el bisel hacia arriba con un ángulo de 45º de inclinación aproximadamente. 6.Una vez dentro, sabremos que estamos en la vena cuando veamos un reflujo en la aguja, extraemos la sangre lentamente teniendo el cuenta el flujo para no colapsar ni lesionar la vena 7. Cuando hayamos extraído la cantidad de sangre que nos interesa, quitar el compresor del brazo y, posteriormente, sacar la aguja. 8. Finalmente pedimos al paciente que presione la herida con un algodón y flexione el brazo para evitar que salgan hematomas. 9. Introducir la sangre en los tubos de análisis, dependiendo de cuál sea la petición de pruebas que nos haya solicitado el médico. 10. Recoger el material utilizado y depositarlo en el contenedor correspondiente

2 Práctica 2: Obtención del frotis sanguíneo: Material Lanceta Dos portaobjetos Un cubreobjetos Una cubeta el portaobjetos Microscopio Guantes Tinción con colorante Giemsa Alcohol metílico absoluto (sin acetona) Tampón de PBS Agua destilada Procedimiento: 1.Limpiar el dedo con una gasa mojada en alcohol etílico 70% 2. Realizar la punción con la lanceta en la yema del dedo (a ser posible en un lateral) 3. Limpiar el dedo, colocar una tirita y tirar en el contenedor correspondiente el material utilizado. 4. Colocamos la gota obtenida de la punción encima del portaobjetos. 5. En el otro portaobjetos haremos el frotis: colocaremos un portaobjetos a unos 45o y lo deslizaremos suavemente sobre la gota de sangre. 6. Tenemos que obtener un frotis donde visualicemos la cabeza, el cuerpo y la cola. 7. Dejamos secar el frotis unos minutos. 8. Fijamos el frotis en el alcohol metílico durante 3 minutos. 9. Para teñirlo lo sumergiremos en una solución de Giemsa/tampón PBS (1volumen colorante/9 volúmenes de PBS) durante 10 minutos.

3 10. Pasado el tiempo, lavamos el frotis con abundante agua destilada. 11. Colocaremos el cubreobjetos en el cuerpo del frotis, donde mejor lo observaremos, 12. Colocamos el frotis bajo el microscopio y observamos. Práctica 3: Recuento leucocitario. Materiales: Lanceta. Micropipetas Un cubreobjetos. Tubos Eppendorf. Cámara cuentaglóbulos o de Neubauer. Líquido de dilución o líquido de Türck. Microscopio Guantes 1. Limpiaremos la zona donde realizaremos la punción con una gasa empapada en alcohol 70% 2. Realizamos la punción con la lanceta en la yema del dedo (a ser posible en un lateral). 3. Cogemos 5 µl de sangre con la pipeta y la introducimos en un Eppendorf. 4. Limpiamos el dedo y colocaremos si es necesario una tirita. Recogemos el material utilizado y lo tiramos en el contenedor correspondiente 5. Se aspira el líquido de solución hasta 10µL y se ponen dentro del Eppendorf usado. 6. Aspiraremos la mezcla del tubo con la micropipeta y lo colocaremos encima de la cámara de Neubauer. 7. Colocaremos un cubreobjetos encima. 8. Colocamos la camara de Newbawer bajo el microscopio y hacemos el recuento leucocitario con un aumento de x40

4 Recuento: -Debemos localizar un cuadrado con 16 cuadrados pequeños en la esquina superior izquierda. -Cuando tengamos el número de leucocitos en un cuadrado aplicaremos la siguiente fórmula: (Número de leucos x 4 x 20 x 10)/4 Cuando tenemos el recuento de leucocitos totales por 1ml de sangre valoramos si está entre los valores normales ( ). Mi recuento leucocitario da un resultado de: 6700, por tanto está entre los valores normales. Práctica 4: Visualización del frotis sanguíneo Material: Frotis sanguçineo Aceite de inmersión Microscopio de inmersión Aplicamos gotas de aceite de inmersión al frotis sanguíneo de la pràctica anterior Colocamos el portaobjetos en el microscopio de inmersión y visualizaremos los elementos celulares (4000 aumentos) Práctica 5: Hematocrito Material Jeringas y agujas endovenosas. Tubos de vacío o Vacutainer algodón Alcohol etílico 70 % cinta elástica Toalla Contenedor para residuos Biológicos Guantes

5 Oxalato sódico Centrífuga de alta velocidad ( rpm) Plastilina Tubos capilares de 75 mm de largo y 2mm de diámetro interior y heparina desecada Lector de hematocrito s: 1.Extracción de sangre venosa. 2.Abrir el tubo que contiene la sangre obtenida e introducir una punta del capilar. 3.Inclinar el capilar e ir moviendolo hasta llenarlo. 4.Tapar el extremo del capilar con el dedo 5. Clavamos el capilar en plastilina para tapar el otro extremo. 6.Colocaremos el tubo en la centrifugadora unos 5 min. 6.Calcular el hematocrito con el resultado obtenido en el capilar: -Medimos con una regla la parte del tubo ocupada por el plasma (y) y lo mismo con la porción corpuscular (x). -Se calcula el hematocrito mediante una regla de tres: (y 100)/x -Los valores normales se encuentran entre 40 y 50 (varía un poco según el sexo.) Práctica 6: Velocidad de Sedimentación globular Materiales Sangre total Solución anticoagulante: citrato trisódico (109mmol/L) Pipeta de eritrosedimentación (pipeta de Westergreen) Soporte que inmovilice la pipeta en posición vertical Cronómetro 1.Extracción de sangre. 2.Colocación en un soporte vertical

6 3.Dejamos la sangre una hora para hacer una primera observación de VSG y esperamos otra hora para hacer una segunda medición. 3.La sedimentación globular consta de tres etapas: - hemaglutinación: se forman pilas de monedas -sedimentación de los hematíes en el fondo del tubo -acúmulo de los hematíes. 5.Se diferenciaran los hematíes del plasma. Valores normales Niños <15mm Hombres <14mm Mujeres <20mm Causas más frecuentes de los valores elevados de VSG: 1.Causas fisiológicas: embarazo,envejecimiento, crecimiento normal... 2.Causas patológicas: anemias internas, IAM (infarto agudo de miocardio), insuficienciarenal, neoplasias, tumores, gammapatías monoclonales, enfermedades inflamatorias cómo la arteritis de Horton (su prueba de diagnóstico es la VSG). Práctica 7: Fisiología de la hemostasia Material: Plasma pobre en plaquetas a partir de sangre recogida en citrato sódico 0.1 mol/l en proporción 1 volumen de citrato 9 volúmenes de sangre Suspensión de tromboplastina hística Aparato de incubación clot 1 A Imán activador del coágulo Pocillos especiales para colocar muestra en incubación 1. Extracción de sangre con anticoagulante citrato 2. Centrifugación durante diez minutos para evitar la coagulación 3. Se pipetea la fase con fibrina sin hematíes y plaquetas 4. Se incuba la muestra hasta 37ºC

7 5. Se añade tromboplastina y se calcula el tiempo de coagulación 6. Finalmente se interpretan los datos teniendo en cuenta que los calores normales osculan entre 12 y 14. Práctica 8: Determinación del grupo sanguíneo: Materiales: Jeringa con EDTA (material de extracción venosa) Tres portaobjetos (A, B, D) Pipeta Punta de p1000 Anticuerpo A Anticuerpo B Anticuerpo Rh : 1. Se realiza una extracción venosa 2. Ponemos una gota de anticuerpo A en el porta rotulado con la A, Otra gota de anticuerpo B en el porta B, una gota de anticuerpo Rh+ en el porta D. 3. Con la pipeta ponemos una gota de sangre (con cuidado de no tocar la punta de la pipeta con el anticuerpo del porta) y removemos con las puntas p Interpretamos los datos según la aglutinación de la sangre de los portas: - Aglutina A, aglutina B aglutina D AB+ - Aglutina A, aglutina B, no aglutina D AB- - Aglutina A, no aglutina B, aglutina D A+ - Aglutina A, no aglutina B, no aglutina D A- - No aglutina A, aglutina B, aglutina D B+ - No aglutina A, aglutina B, no aglutina D B- - No aglutina A, no aglutina B, Aglutina D 0+ - No aglutina A, no aglutina B, no aglutina D 0- Mi resultado fue: Grupo sanguíneo 0+