VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE BACITRACINA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE UNA

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1 VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE BACITRACINA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE UNA INDUSTRIA FARMACÉUTICA VETERINARIA JOHANNA CAROLINA VELANDIA CASTELLANOS PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL BOGOTÁ D.C. COLOMBIA 2008 i

2 Articulo 23 de la R resolución N o 13 de Julio de 1946 La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo vela por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia. ii

3 VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE BACITRACINA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE UNA INDUSTRIA FARMACÉUTICA VETERINARIA JOHANNA CAROLINA VELANDIA CASTELLANOS TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para adoptar al titulo de Microbióloga Industrial DIRECTORA VIVIANA PEÑA PÁEZ Microbióloga Industrial CO-DIRECTORA JANETH ARIAS PALACIOS Bacterióloga M.Sc- M.Ed PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL BOGOTÁ D.C. COLOMBIA 2008 iii

4 VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE BACITRACINA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE UNA INDUSTRIA FARMACÉUTICA VETERINARIA AUTOR JOHANNA CAROLINA VELANDIA CASTELLANOS APROBADO Viviana Peña Páez Microbióloga Industrial DIRECTORA Janeth Arias Palácios Bacterióloga M.Sc- M.Ed CO-DIRECTORA Cindy Fernández López Microbióloga Industrial JURADO Jazmín Andréa Castellanos Química JURADO iv

5 VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE BACITRACINA EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE UNA INDUSTRIA FARMACÉUTICA VETERINARIA AUTOR JOHANNA CAROLINA VELANDIA CASTELLANOS APROBADO Ingrid Schuler Ph.D Bióloga Decana Académica Janeth Arias Palacios Bacterióloga M.Sc - M.Ed Directora de Carrera v

6 AGRADECIMIENTOS A mis padres y hermana, gracias por su constante, incondicional e invaluable apoyo emocional, intelectual y económico, que me permitió llevar a cabo este proyecto. Buscando en todos y cada uno de los segundos de mi vida nunca defraudar su confianza. Gracias por que me han dado todo, desde la vida, educación, formación intelectual, personalidad creativa y competente. A la Microbiologa Industrial Viviana Peña Páez, por ser una gran directora de tesis. No me habría sido posible llevar a cabo esta investigación sin su ayuda, sus conocimientos, su orientación, guía, perspicacia, su apoyo, dedicación y por su gran amistad. A la Doctora Janeth Arias Palacios, por sus conocimientos, orientación, apoyo y respaldo durante el tiempo de realización de este trabajo y por creer en este proyecto. A los Doctores Sergio Enrique Castro Ureña y Sergio Castro Brandon, de la empresa VICAR FARMACEUTICA S.A., por su incondicional respaldo, apoyo económico, por permitirme hacer uso del laboratorio y los implementos en el, hospitalidad y amabilidad. A la Química Farmacéutica Johanna Garcia, por su oportuna e invaluable colaboración en textos guía y sus conocimientos, por ser ficha clave y esencial en la realización y conclusión de esta investigación y por su gran amistad. A la Química Sofía Mariana Riaño Torres, por su incondicional apoyo, orientación y ayuda. Por su oportuna e invaluable colaboración, sus conocimientos, siendo ficha clave y esencial en la realización de esta investigación y por su gran amistad. vi

7 TABLA DE CONTENIDO Pagina 1. RESUMEN 1 ABSTRACT 2 2. INTRODUCCIÓN 3 3. REVISIÓN DE LITERATURA ANTIBIÓTICOS Definición Clasificación de los antibióticos Espectro de acción Mecanismo de acción Antibióticos que interfieren con la biosíntesis de la pared celular Antibióticos que actúan sobre la membrana celular Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas Antibióticos que actúan sobre la síntesis de ácidos nucleicos Estructura química Aminoglucosidos Anfenicoles Antimicobacterianos Cefalosporinas y otros B-lactamicos Glucopeptidos Lincosaminas Macrólidos Penicilinas Quinolonas Sulfamidas y diaminopirimidinas Tetraciclinas 12 vii

8 Polipeptidicos BACITRACINA Descubrimiento Sinónimos Formula empírica Formula estructural Peso molecular Descripción, Solubilidad, Conservación, Estabilidad Espectro antimicrobiano de acción Tipo y mecanismo de acción Farmacocinética Indicaciones y administración Interacciones Efectos adversos BACITRACINA ZINC Descripción, solubilidad, conservación Estabilidad Incompatibilidades Acción farmacológica Indicaciones de uso, dosis recomendadas, vías de aplicación Condiciones de almacenamiento BACITRACINA METILEN DISALICILATO Descripción, solubilidad, conservación Indicaciones de uso Micrococcus luteus Clasificación científica Características 20 viii

9 3.5.3 Bioquímica Patogénesis Usos industriales VALIDACION DE METODOS ANALITICOS Definición Definición General Definición Analítica Métodos Susceptibles a ser Validados Entorno Legal Norma de Correcta Fabricación de Medicamentos Farmacopeas Fases en el desarrollo de un método analítico y criterios de validación Definición de las características de practicabilidad Estudios de estabilidad de la muestra preparada para análisis Puesta a punto. Características de idoneidad Características de fiabilidad CARACTERÍSTICAS DEL DESEMPEÑO ANALÍTICO SELECTIVIDAD Definición Ámbito de aplicación Según el objetivo de ensayo Según la técnica analítica aplicada LINEALIDAD Definición Ámbito de aplicación PRECISION Definiciones 30 ix

10 Diferentes tipos de estudio en la precisión Repètibilidad Repetibilidad del sistema instrumental Repetibilidad del método Precisión inmediata Reproducibilidad Ámbito de aplicación EXACTIDUD Definición Ámbito de aplicación Procedimiento de determinación de la exactitud Determinación LIMITE DE DETECCION Y LÍMITE DE CUANTIFICACION Definición Ámbito de aplicación Procedimientos de determinación del LD y LQ ROBUSTEZ Definición Ámbito de aplicación ESPECIFICIDAD Definición Determinación VALORACION MICROBIOLOGICA DE ANTIBIOTICOS Generalidades Definiciones Valoración de antibióticos Potencia real Potencia asignada 40 x

11 Potencia estimada Limites de confianza (Intervalo de confianza) METODO Validación Linealidad Repetibilidad (Precisión) Exactitud Selectividad FORMULACIÓN DEL PROBLEMA JUSTIFICACION OBJETIVOS MATERIALES Y METODOS Estándar de Referencia Muestras de estudio Preparación y estandarización de la suspensión del microorganismo de ensayo Cultivo bacteriano Preparación del inoculo Determinación de la cantidad de suspensión madre para inoculo Preparación del estándar (Método de la curva patrón) Diluciones del patrón Diluciones finales del patrón Preparación de la muestra Dilución de la muestra Dilución de prueba de la muestra Obtención del placebo Preparación de placas de valoración Validación del método de cuantificación del principio activo (USP, 30) Especificidad 52 xi

12 7.8.2 Selectividad Linealidad del sistema Linealidad del método Precisión del método Exactitud Limite de detección Limite de cuantificación RESULTADOS Y DISCUCION Especificidad del método Selectividad del método Linealidad del sistema Linealidad del método Bacitracina Zinc Linealidad del método Bacitracina Metilen Disalicilato Precisión del método Exactitud del método Limite de detección Limite de cuantificación CONCLUIONES RECOMENDACIONES REFERENCIAS ANEXOS 74 xii

13 LISTA DE FIGURAS Pagina Figura 1. Bacitracina (Según Maier y Groger, 1972) 14 Figura 2. Diferentes tipos de estudio en la precisión 30 xiii

14 LISTA DE TABLAS Pagina Tabla 1. Espectro de acción de la Bacitracina (Según Wege, 1969) 16 Tabla 2. Datos Requeridos para la Validación de Métodos Analíticos (USP 30) 26 Tabla 3. Variación de factores en el estudio de la precisión 31 Tabla 4. Diluciones de la curva patrón (intervalo de concentraciones 0.1 a 0.25 UI/ml) 50 Tabla 5. Diluciones de la curva patrón (intervalo de concentraciones 0.5 a 2.5 UI/ml) 51 Tabla.6 Diluciones del las muestras para la evaluar la Exactitud 55 Tabla. 7 Diluciones del las muestras para determinar el limite de detección 56 xiv

15 LISTA DE ANEXOS Pagina ANEXO 1. CALDOS, MEDIOS DE CULTIVO Y BUFFERS 74 ANEXO 2. LINEALIDAD DEL SISTEMA 75 ANEXO 3, LINEALIDAD DEL MÉTODO BACITRACINA ZINC 80 ANEXO 4. LINEALIDAD DEL MÉTODO BACITRACINA METILEN DISALICILATO 85 ANEXO 5. ESPECIFICIDAD BACITRACINA ZINC 90 ANEXO 6. ESPECIFICIDAD BACITRACINA METILEN DISALICILATO 91 ANEXO 7. SELECTIVIDAD BACITRACINA ZINC 92 ANEXO 8. SELECTIVIDAD BACITRACINA METILEN DISALICILATO 96 ANEXO 9. PRECISIÓN DEL METODO BACITRACINA ZINC 100 ANEXO 10. PRECISIÓN DE METODO BACITRACINA METILEN DISALICILATO 110 ANEXO11. PRECISION DEL SISTEMA 120 ANEXO 12. EXACTITUD METODO BACITRACINA ZINC 121 ANEXO 13. EXACTITUD DEL METODO BACITRACINA METILEN DISALICILATO 127 ANEXO 14. LIMITE DE CUANTIFICACION 133 ANEXO 15. LIMITE DE DETECCIÓN 136 xv

16 1. RESUMEN Se realizo la validación del método analítico para la cuantificación de Bacitracina, para ser utilizado en el control de calidad de materias primas y en los productos farmacéuticos con este principio activo. En el presente trabajo se describió y desarrollo el proceso de validación de la valoración microbiológica de antibióticos en cilindro-placa (difusión en agar), para la determinación cuantitativa de Bacitracina Zinc al 15% y Bacitracina Metilen Disalicilato al 11%, que incluye los requisitos exigidos en la determinación de parámetros analíticos de linealidad del sistema, linealidad del método, especificidad, exactitud, selectividad, limite de detección, limite de cuantificación y la precisión expresada en sus dos formas: repetibilidad y reproducibilidad. Se demostró mediante el diseño experimental, con la evaluación estadística de los resultados experimentales y teniendo como base los criterios de aceptación permitidos, que el método analítico es específico, selectivo, lineal (r linealidad del sistema, r linealidad del método Bacitracina Zinc y r linealidad del método Bacitracina Metilen Disalicilato), preciso (CV< 5%), exacto (Sesgo < 3% y t exp. <t tab. ) en el intervalo de concentraciones estudiadas. Se obtuvo el límite de cuantificación en la concentración 0.02 UI/ml y el límite de detección en la concentración UI/ml. De esta forma mediante los estudios realizados se establece que las características de desempeño analítico cumplen con los requisitos para la aplicación analítica propuesta siendo confiable para ser utilizado en la comprobación de las especificaciones de calidad. 1

17 ABSTRACT The validation of the analytical methods method for the quantitative of Bacitracin was carried out to be used in the quality control in a raw material and the pharmaceutical products finished with this active principle. In this work was described and developed the validation process of microbiological cylinder-plate determination method for antibiotics (diffusion in agar) for the quantitative determination of Bacitracin Zinc 15% and Bacitracin Methylene Disalicylate 11%, it includes the necessary requirements in the determination of the analytic parameters: method linearity, system linearity, specificity, exactness, selectiveness, detection limit, quantification limit and accuracy, which was expressed in its 2 forms: repeatability and reproducibility. It was demonstrated by through experimental design, with the statistical evaluation of the experimental data and having like base the allowed approaches of acceptance that the analytic method is specific, selective, lineal (r system linearity, r method linearity of Bacitracin Zinc y r method linearity Bacitracin Methylene Disalicylate), precise (CV< 5%), exact (Sesgo < 3% y t exp. < t tab. ) in the interval of studied concentrations. The quantification limit and detection limit was 0.02 UI/ml and UI/ml respectively. For that reasons, states that the characteristics of analytic acting fulfill the requirements for the application analytic proposal, therefore, they are reliable and may be used in the checking of the quality specifications of the raw material and the pharmaceutical products finished with this active principle. 2

18 2. INTRODUCCIÓN La validación es el proceso establecido para la obtención de pruebas documentadas, mediante estudios sistemáticos de laboratorio y demostrativos, de que un método de análisis es lo suficientemente fiable y reproducible para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos. El proceso de validación permite el conocimiento de las características de funcionamiento del método y proporciona un alto grado de confianza en el mismo y en los resultados obtenidos al aplicarlo. (AEFI, 2001) Se define como método analítico a la adaptación específica de una técnica analítica para un propósito de medición seleccionado. La validación de un procedimiento analítico es un procedimiento para establecer por medio de estudios laboratoriales una base de datos que demuestren científicamente que un método analítico tiene las características de desempeño (exactitud, precisión, especificidad, límite de detección, límite de Cuantificación, linealidad y intervalo de linealidad) que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas pretendidas. Implica la demostración de la determinación de las fuentes de variabilidad y del error sistemático y al azar de un procedimiento, no solo dentro de la calibración sino en el análisis de muestras reales. (USP, 30) La valoración microbiológica de antibióticos es un método analítico que permite bajo las condiciones adecuadas demostrar la actividad (potencia) de los antibióticos por medio de su efecto inhibidor sobre los microorganismos. Se utilizan dos métodos generales: la valoración en difusión en gel de agar (cilindro placa) y la valoración turbidimetrica en tubo. (USP, 30) básicamente en los dos métodos la potencia de un antibiótico se estima mediante la comparación de la actividad de un producto (problema) y la de un muestra Estándar de referencia (patrón) en presencia de un microorganismo testigo. (AEFI, 2001) VICAR FARMACEUTICA S.A. fabrica y comercializa productos farmacéuticos veterinarios, posee una línea de más de cuarenta productos en el mercado para la sanidad animal. Dentro de estos productos se encuentra Bactran, antibiótico cuyo principio activo dependiendo su presentacion es la Bacitracina Zinc o Bacitracina Dimetil Salicilato. Posee un espectro antimicrobiano de acción activa frente algunas bacterias Gram Positivas como estafilococo, estreptococo (particularmente el estreptococo del grupo A) 3

19 y clostridio. Es también activa frente a Actnomyces, Treponema pallidum y algunas especies Gram negativas, como Neisseria y Haemophilus influenzae; sin embargo, la mayoría de los microorganismos Gram. Negativos son resistentes. (Sweetman, C. 2003). Su espectro de acción abarca también, algunos corinebacterias, espiroquetas, Nocardidia, Entamoeba histolytica. (Trolldenier, 1985). Las salmonellas, E.coli, Proteus, los hongos y los virus son resistentes. Los gérmenes sensibles son inhibidos por una concentración comprendida entre 0,005 y 2,0 UI/mg. Los que necesitan 50 UI/mg o mas se consideran resistentes. (Trolldenier, 1900). La acción de la bacitracina es bacteriostática y bactericida. La dosis requerida para que sea bactericida es 5 10 veces mayor. La bacitracina influye sobre importantes sistemas enzimáticos. Impide la construcción de la pared celular bloqueando la desfosforilizacion (Parthier, 1969). La Bacitracina interfiere en la síntesis de la pared celular bacteriana al bloquear las funciones de las moléculas transportadoras de lípidos que transfieren las subunidades de la pared celular a través de la membrana. La Bacitracina se une al undecaprenolpirofosfato, bloqueando su desfosforilación, e impidiendo por lo tanto, la regeneración del transportador de membrana.. (Sweetman, C. 2003). En los estafilococos inhibe la incorporación del acido glutámico durante la fase de proliferación. (Trolldenier, 1984) La Bacitracina y la Bacitracina zinc se aplican por vía tópica, a menudo junto con otros antimicrobianos como la Neomicina o Polimixina B, y algunas veces con corticosteroides, en el tratamiento de las infecciones locales. La bacitracina se emplea en infecciones de piel (piodermitis, heridas infectadas, Impetigo contagioso, foliculitis, furunculosis, ulcera decubitus, dermatitis infecciosa eczematoid, escabiosis, y dermatofitosis), conjuntivas (causadas por S. aureus, S. pyogenes, entre otros), sinusitis, faringitis, traqueobronquitis, infecciones mandibulares (actinomicosis), oculares, entre otros. La bacitracina ha sido efectivamente usada oralmente para el manejo de amebiasis intestinal, pero se encuentran disponibles otros amebicidas más potentes. (Remington s. 1980) La misión de VICAR FARMACEUTICA S.A. es contribuir al progreso de la Sanidad Animal y de la Medicina Veterinaria en los países hispanoamericanos, suministrando a los médicos veterinarios productos farmacéuticos de la más alta calidad en el momento oportuno. Para alcanzar el propósito de la misión, la validación de cada uno de los métodos analíticos (como por ejemplo la valoración microbiológica de Bacitracina) aplicados en un laboratorio específico, podrá demostrar con un alto grado de confianza, por medio de evidencia documentada que el proceso producirá de forma consistente y permanente productos que poseen las características de calidad predefinidas, 4

20 compitiendo y generando valor al cliente. Con métodos de análisis validados se alcanzan las metas de calidad que se haya trazado como parte de los procesos de mejoramiento continúo del sistema de calidad, formando una empresa cada vez más líder en la industria farmacéutica veterinaria del país. El presente trabajo tiene como objetivo describir el proceso de validación del método analítico para la cuantificación de Bacitracina efectuado en el laboratorio de VICAR FARMACEUTICA S.A. mediante estudios de laboratorio que permitan la determinación y el estudio de las característica de desempeño analítico para la validación del método. 5

21 3. REVISION DE LITERATURA 3.1. ANTIBIÓTICOS Definición El primero que expresó el concepto de antibiótico fue Waksman (1942): los antibióticos son sustancias de acción antimicrobiana producidas por microorganismos o plantas superiores en el curso de su metabolismo normal, sustancias que inhiben el crecimiento de otros microorganismos en concentraciones mínimas. Esta definición ha sido ampliada posteriormente en virtud de los conocimientos adquiridos sobre su obtención, y con objeto de deslindar otros productos metabólicos: un antibiótico es una sustancia químicamente definida, producida en el metabolismo de células vivas y aislada de ellas por primera vez, o uno de sus derivados producidos por métodos sintéticos o biosintéticos, el cual ejerce su acción bacteriostática o bactericida en pequeña concentración contra microorganismos vegetales y animales.( Brunner y Machek, 1962). Algunos de los antibióticos mas empleados son producidos por actinomicetales (Estreptomicina, Cloranfenicol, Tretraciclinas, Eritromicina), hongos (Penicilina, Griseofulvina) y bacterias (Polimixinas, Bacitracina). (Trolldenier, 1900) Bacteriostatico: Inhibición o interrupción de la multiplicación microbiana tras un periodo variable de latencia, en general reversible Estos antimicrobianos inhiben la multiplicación, no destruyen, son antibióticos bacteriostáticos de tal manera que cuando el microorganismo desaparece puede volver a crecer, el fin es que el sistema inmune acabe con ellos después de haber tomado el antibiótico. (Thrum y Bocker, 1971) Bactericida: Eliminación irreversible de los gérmenes en periodo de reproducción o reposo sin daño para el microorganismo. Las condiciones previas son: dosificación óptima, necesaria duración terapéutica, concentración suficiente donde esté localizada la infección. La acción bactericida in Vitro se desarrolla en tres fases: 1. fase de latencia: generalmente corta, dura unos 5 15 minutos. Es probable que entonces tenga lugar la penetración en la célula bacteriana. 6

22 2. fase de muerte: inhibición del crecimiento o muerte de los gérmenes. El número de bacterias que sobreviven disminuye espontáneamente mientras dura la acción letal si la concentración es constante. 3. fase tardida: la reducción de gérmenes disminuye, pero sin que cesé por completo. Esta fase también se puede llamar persistencia. (Thrum y Bocker, 1971) Clasificación de los antibióticos Espectro de acción Todos los antibióticos poseen un espectro de actividad conocido sobre los gérmenes patógenos en virtud a su mecanismo de acción específica. Por los microorganismos o agentes afectados, dividimos los antibióticos en bacteriostáticos, bactericidas, fungistáticos, virostáticos, rickettsiostáticos y citostáticos. En cuanto al número de especies o familias sensibles el espectro de los antibióticos puede ser reducido, medio o amplio. El espectro es muy variable siendo la mayoría de tipo amplio el mayor en cefalosporinas de 4ª generación, carbapenemas y piperacilina-tazobactam, seguido de cefalosporinas de 3ª generación incluyendo Gram Negativos, Gram Positivos y espiroquetas. De espectro más reducido destacan la bencilpenicilina y fenoximetilpenicilina (estreptococos y Neisseria), cloxacilina (antiestafilococo) y aztreonam (sólo Gram negativos) y los de espectro medio suelen ser activos frente a gérmenes Gram Positivos y Gram negativos y a ellos pertenecen las penicilinas, los antibióticos macrólidos, algunos polipeptídicos y los aminoglucosídicos, la amoxicilinaclavulánico y cefalosporinas de 1ª y 2ª generación.(trolldenier, 1900) Mecanismo de acción Otra forma de agrupar los antibióticos es en función de las "dianas" sobre las que actúan y con las que interfieren: Antibióticos que interfieren con la biosíntesis de la pared celular Su acción esta limitada a la fase de proliferación. La mayoría de los antibióticos inhibe la síntesis de diferentes compuestos celulares. Algunos de los fármacos más empleados interfieren con la biosíntesis de peptidoglicanos (PG), el principal componente de la pared celular. Ejercen su efecto bactericida sobre bacterias en crecimiento. Inhibe determinados pasos en el ciclo de la síntesis y ensamblaje del PG, provocan la acumulación de precursores de PG desencadenando autolisinas de la bacteria, que degradan el PG provocando la lisis celular por ingreso de agua a la célula. Estos 7

23 antibióticos no lesionan las células humanas ya que éstas no poseen pared celular. (Pareja Iañez, 1998) En conclusión esta clase de antibióticos, inhiben la síntesis de peptidoglicanos. Una vez que se inhibe la síntesis de la pared celular puede ocurrir autolisis enzimática de la pared celular. Sin la influencia restrictiva de la pared celular, la elevada presión osmótica dentro de la célula hace estallar a la membrana interna y/o externa de la bacteria. Por lo tanto estos antibióticos son generalmente bactericidas. (Figueroa, P y Luna Torres, L. 2006). Algunos antibióticos que presentan esa actividad son: - Betalactámicos que dependiendo de su estructura química, se clasifican en penicilinas, cefalosporinas o carbapénem. Todos los antibióticos betalactámicos comparten una estructura química similar en forma de anillo. Este anillo impide la unión de los péptidos a las cadenas laterales en el proceso de formación de la pared celular. Estos compuestos inhiben la síntesis de peptidoglicanos pero no interfieren con la síntesis de componentes intracelulares. De este modo, continúan formándose materiales dentro de la célula que aumentan la presión sobre la membrana hasta el punto en que ésta cede, el contenido celular se libera al exterior, y la bacteria muere. (Pareja Iañez, 1998). - Fosfomicina: Inhibe el primer estadio de la síntesis de peptidoglicano al competir por analogía estructural con el PEP. (Pareja Iañez, 1998). - Cicloserina: Se comporta la D-alanina, inhibiendo la actuación de la racemasa que convierte la L-ala a D ala, así como la reacción de unión de dos D-ala. (Pareja Iañez, 1998). - Vancomicina y ristocetina: inhiben la segunda transglucosidación, es decir la unión de diversas unidades disacarídicas. (Pareja Iañez, 1998). - Bacitracina: se une al undecaprenol-pirofosfato, bloqueando su desfosforilación, e impidiendo por lo tanto, la regeneración del transportador de membrana. (Pareja Iañez, 1998) Antibióticos que actúan sobre la membrana celular A diferencia de los antibióticos que actúan a nivel de pared, los que interfieren con la membrana celular ejercen sus efectos independientemente de que el microorganismo 8

24 esté o no creciendo. Suelen carecer de especificidad (afectan a membranas de procariotas y de organismos superiores), por lo que resultan más o menos tóxicos para los mamíferos y, en general, han encontrado escasa aplicación clínica. Algunos de los antibióticos que pertenecen a este grupo son: Polienos, Polimixinas, Imidazoles, entre otros. (Pareja Iañez, 1998). La Estreptomicina, la Polimixina B y la Colistina, perturban las funciones de la membrana citoplasmática que regula las condiciones de permeabilidad, de tal modo que puede producirse la muerte de la célula por desregulaciones osmóticas. Esta acción no exige división celular y es posible también en la fase de reposo. (Trolldenier, 1984) Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas Los antibióticos que interfieren en la síntesis de proteínas son muy variados y abundantes, y la mayoría de ellos funcionan interfiriendo con el ribosoma, sobre todo los que se unen a proteínas ribosómicas y/o a alguno de los ARN ribosómicos. Los más útiles son aquellos que tienen efectos selectivos frente a los ribosomas 70S procarióticos, pero no sobre los 80S eucarióticos. Dentro de ellos y siguiendo el orden natural del funcionamiento de la elongación de la cadena polipeptídica, podemos agruparlos según la fase concreta de la elongación sobre la que actúan: Inhibición del reconocimiento de un aminoacil-arnt (aa-arnt) hacia el sitio A del ribosoma; Introducción de errores en la lectura de los ARNm; Inhibición de la reacción de formación del enlace peptídico; Inhibición de la traslocación del peptidil-arnt (pp-arnt) desde el sitio A al sitio P. Bloqueo de los factores de elongación. Esta acción inhibidora del metabolismo no depende tampoco de la división celular, pero se desarrolla con mayor rapidez y seguridad durante la fase de proliferación. (Trolldenier, 1900). Algunos de los antibióticos que pertenecen a este grupo son: Tetraciclinas, Aminoglucósidos, Anfenicoles, Lincosamidas, Macrólidos, entre otros. (Pareja Iañez, 1998) Antibióticos que actúan sobre la síntesis de ácidos nucleicos. Son antibióticos de síntesis química, su toxicidad selectiva es baja y son bacteriostáticos. Estos antibioticos operan sobre las enzimas que actúan en el proceso. 9

25 Sus mecanismos de acción son: a). Por bloqueo de la trascripción:- Impide que actué la ARN polimerasa bacteriana que es la que sintetiza el ARN. - Rifampicina. b). Por bloqueo de la duplicación del ADN:- Actúan inhibiendo la acción de las enzimas que enrollan y desenrollan la cadena de ADN, estos antibióticos impiden que la cadena se desenrolle. - Quinolonas: Oflozacino, cinoxacino, norfloxacino. - Novobiocina: Benzamida. c) Por interferencia en la síntesis de bases nitrogendas:- Impiden la síntesis de bases nitrogenadas, Adenina, timina, etc. (método exclusivo de las bacterias). - Sulfamidas - Diaminopirimidinas. Algunos de los antibióticos que pertenecen a este grupo son: Quinolonas, Ansamicinas, Sulfonamidas, entre otros. (Pareja Iañez, 1998) Estructura química Una forma de estudiarlos es agrupándolos por clases según su naturaleza química. Desde el punto de vista químico, se clasifican en grandes familias: Aminoglucosidos Grupo de antibióticos bactericidas estrechamente relacionados, derivados de bacterias del orden Actinomicetales o, mas concretamente, del genero Streptomyces( Framicetina, Kanamicina, neomicina, paromomicina, estreptomicina y tobramicina) y del genero Micromonospora (gentamicina y sisomicina). Los aminoglucosidos poseen un espectro antimicrobiano similar y actúan interfiriendo en la síntesis proteica bacteriana. Son más activos frente a bacilos gramnegativos que en los grampositivos. (Sweetman, 2003) Anfenicoles El cloranfenicol (y tianfenicol) son inhibidores de la síntesis proteica por acción en el ribosoma a nivel de la subunidad 30S y 50S respectivamente. El cloranfenicol por el contrario está limitado a su uso en preparados tópicos, pero en el pasado fue utilizado para el tratamiento de múltiples cuadros infecciosos, desde banales hasta muy graves, pero se ha ido retirando por la potencial toxicidad hematológica. (Delgado-Iribarren, 2001) Antimicobacterianos Constituyen un grupo variado de antibacterianos cuyo espectro de actividad incluye Mycobacterium spp. Forman parte del grupo, las rifamicinas, también conocidas como ansamicinas, un grupo de antibióticos aislados a partir de una cepa de Amycolatopsis mediterranei (Nocardida mediterranei;streptomyces mediterranei).estos antibióticos se 10

26 utilizan para el tratamiento de tuberculosis, la lepra y otras infecciones micobacterianas. (Sweetman, 2003) Cefalosporinas y otros B-lactamicos Las cefalosporinas son antibacterianos semisinteticos derivados de la cefalosporina C, un antibiótico natural producido por el moho Cephalosporium acremonium. Las cefalosporinas son bactericidas y actúan inhibiendo la síntesis de la pared bacteriana. Las nuevas generaciones de cefalosporinas generalmente poseen un incremento de actividad frente a las bacterias gramnegativas y grampositivas Glucopeptidos Poseen una estructura glucopeptidica. Actúan interfiriendo la síntesis de la pared bacteriana y es activa frente a cocos grampositivos. Algunos antibióticos que pertenecen a este grupo son: Avoparcina, ramoplanina, teicoplanina, vancomicina, entre otros. (Sweetman, 2003) Actúan sobre la segunda fase de la síntesis de la pared bacteriana inhibiendo la formación de peptidoglucano, interfieren en la formación del precursor D- alanyl D-alanina, afectan la permeabilidad de la membrana citoplasmática de los protoplastos y alteran la síntesis de RNA. (Pareja Iañez, 1998) Lincosaminas Es un antibiótico producido por una cepa de Streptomyces lincolnensis. Las lincosaminas son bacteriostáticas o bactericidas, según la concentración, y son activas principalmente frente a bacterias grampositivas y Bacteroides spp. Al parecer tambien poseen cierta actividad antiprotozoaria. Las lincosamidas poseen una actividad antimicrobiana actuando sobre el ribosoma bacteriano para suprimir la síntesis proteica. (Sweetman, 2003) Macrólidos Es un amplio grupo de antibióticos, principalmente producidos por Streptomyces spp. Los macrólidos pueden ser bacteriostáticos o bactericidas, según su concentración y el tipo de microorganismo y se cree que interfiere en la síntesis proteica bacteriana. Son activos frente a microorganismos como Legionella pneumophila,micoplasma pneumoniae y algunas rickettsias y clamidias Penicilinas La penicilina fue el primer antibiótico utilizado terapéuticamente y se obtuvo en un 11

27 principio como una mezcla de penicilinas conocidas como F, G, X y K, a partir del moho Penicillium notatum. Se obtuvieron mejores rendimientos utilizando P. chrysogenum. Son bactericidas por medio de su acción inhibitoria sobre la síntesis de la pared bacteriana. La bencilpenicilina puede considerarse el compuesto original de las penicilinas y es activa principalmente frente a bacterias grampositivas y Neisseria spp. Algunas penicilinas son activas frente algunos microorganismos gramnegativos (ejemplo ampicilina, mecilinam, temocilina, entre otros). (Sweetman, 2003) Quinolonas Inhiben la girasa (topoisomerasa II, genes gyra y gyrb) y la topoisomerasa IV (genes parc y Par E, con mayor importancia en gram positivos) por unión al complejo ADNgirasa. Si bien estos compuestos se obtienen por síntesis química su mecanismo de acción no es nuevo en la naturaleza puesto que existen también algunos compuestos naturales que la presentan como por ejemplo la Novobiocina (producida por Streptomyces), cumermicinas y ciclotilidina. Las topoisomerasas son enzimas implicadas en el desarollamiento y decatenación del ADN lo que es necesario para su replicación. El espectro de estos antimicrobianos ha evolucionado desde una limitación a infecciones del tracto urinario y actividad limitada a gramnegativos hasta los compuestos actuales con actividad en grampositivos y anaerobios, menor selección de mutantes y mejora en la farmacocinética. (Delgado-Iribarren, 2001) Sulfamidas y Diaminopirimidinas Son normalmente bacteriostáticas e interfieren en la síntesis de ácido fólico de microorganismos sensibles. Estos se emplean en el tratamiento de la profilaxis de algunas infecciones por protozoos. El empleo clínico de las sulfamidas es sumamente reducido, en general están indicadas únicamente para el tratamiento de las infecciones de las vías urinarias y algunos trastornos como la nocardiosis. Las sulfamidas como la sulfaguanidina, el succinilsulfatiazol y el ftalilsulfatiazol se han utilizado para el tratamiento de infecciones gastrointestinales. (Sweetman, 2003) Tetraciclinas Son un grupo de antibacterianos, inicialmente derivados de ciertos Streptomyces spp. Interfieren en la síntesis proteica en organismos sensibles, poseen un amplio espectro de actividad frente a bacterias grampositivas y gramnegativas, clamidias, rickettsias (rickettsias tificas y maculosas), micoplasmas (neumonía atípica, enfermedad inflamatoria pélvica, la enfermedad de Lyme, la brucelosis, la turalemia, la peste, el 12

28 colera, acne), espiroquetas, algunas micobacterias y algunos protozoos. (Sweetman, 2003) Polipeptidicos Es un grupo de antibióticos que se diferencia de los demás en cuanto a su mecanismo de acción y su espectro antibacterial. Son antibióticos producidos por especies de Bacillus durante las primeras fases de la esporulación. Se trata de moléculas con aminoácidos en configuraciones L y D, y con presencia de ciertos aminoácidos "raros" (no proteinogenéticos). Algunos de estos antibióticos son polipéptidos cíclicos. Su síntesis no se realiza en los ribosomas, sino que se produce por una secuencia de reacciones enzimáticas que nada tienen que ver con el proceso de traducción de los mensajeros genéticos. Suelen ser antibióticos de efecto bactericida. Su mecanismo consiste en que se unen a la cara externa de la membrana citoplásmica y, además, a la membrana externa de las bacterias Gram.-negativas, alterando su estructura y su permeabilidad osmótica; ello condiciona la inhibición de procesos básicos de la membrana, así como la salida de metabolitos del citoplasma. Algunos antibióticos que pertenecen a este grupo son: polimixina, tirocidina-a y gramicidina-s. (Pareja, 1998) 3.2 BACITRACINA Descubrimiento En Junio de 1943, Una niña de 7 años llamada Margaret Tracy, ingreso a la sala de urgencias del Hospital Presbiteriano de Columbia de la ciudad de Nueva York, pues la había atropellado un coche, ocasionándole una fractura abierta en la tibia. De esta herida se tomo una muestra y en el análisis microbiológico inicial se determino la presencia de Staphylococus aureus. Sin embargo, a su vez otras muestras fueron enviadas al laboratorio de bacteriología, donde su directora, Balbina Jonson, describió que el Staphylococus aureus visto en el examen inicial microscópico había desaparecido de la noche a la mañana. Con la ayuda de Fran L. Meleney y H. Anker, consiguieron aislar a partir de la muestra de la herida una cepa de un bacilo muy activo frente S. Aureus, al que dominaron Tracy I. Tras filtrar el caldo de cultivo se detecto la presencia de un potente antibiótico a este antibiótico le dieron el nombre de Bacitracina, de la combinación del termino bacilo y tracy, apellido de esta niña. (Martín, 2005) Sinónimos Aifivina, Baxi-max, Penitracina, Zutracina (Negwer, 1971). Asociación con neomicina: Nebacetina. (Trolldenier, 1900) 13

29 3.2.3 Formula empírica Bacitracina A: C 66 H 103 N 17 O 16 S Bacitracina B: C 71 H 112 N 18 O 17 S Bacitracina F: C 66 H 97 N 15 O 17 S (Trolldenier, 1900) Formula estructural Figura 1. Bacitracina (Según Maier y Groger, 1972) Peso molecular Bacitracina (mezcla): 1500 Daltons Bacitracina A: 1470 Daltons (Trolldenier, 1900) Descripción, Solubilidad, Conservación, Estabilidad Según Farmacopua Europea 2002: la Bacitracina esta compuesta de uno o mas polipéptidos antimicrobianos producidos por ciertas cepas de Bacillus lincheniformis y B. subtilis var. Tracy. La potencia no es inferior a 60 UI/mg, calculándola con respecto a la sustancia seca. Según USP 30 tiene una potencia no inferior a 40 UI/mg. Es un polvo higroscópico de color blanco a amarrillo pálido, inodoro o con ligero olor. Fácilmente soluble en agua; soluble en alcohol, acido acético glacial y metanol; la solución en disolventes orgánicos a menudo presenta un residuo insoluble; insoluble en acetona cloroformo y éter. Estas soluciones se deterioran fácilmente a temperatura ambiente. Precipita en estas soluciones y se inactiva por sales de algunos metales 14

30 pesados. (USP 30). Forma sales estables con el cinc y el manganeso, las cuales son relativamente insolubles (0,23 0,45 % a 25 o C). (Trolldenier, 1984) En solución de ph 5-7 es estable a 4 o C durante 4 semanas (Jawets 1956), y a 20 o C pierde del 33 al 50% de su actividad en 14 días. (Meyer- Jones. 1956). Posee máxima estabilidad en medio acido ph 4 5. La actividad biológica disminuye rápidamente a ph >9. (Trolldenier, 1984) De la mezcla se han aislado diversas (5 10) bacitracinas: A, A, B, C, D, E, F 1, F 2, F 3, G. La conservación requiere ausencia de aire y oscuridad. La sustancia seca se conserva durante 1,5 y 2 años a baja temperatura. (Patsch, 1975). En solución acuosa al 1% presenta un ph entre 6 y 7. Conservar a temperatura entre 8 y 15 o C en envases herméticos. (F. EUR). El ph en una solución acuosa que contiene UI/ml oscila entre 5,5 y 7,5. (USP 30) Espectro antimicrobiano de acción Es activa frente algunas bacterias Gram Positivas como estafilococo, estreptococo (particularmente el estreptococo del grupo A) y clostridio. Es también activa frente a Actinomyces, Treponema pallidum y algunas especies Gram negativas, como Neisseria y Haemophilus influenzae; sin embargo, la mayoría de los microorganismos Gram Negativos son resistentes. (Sweetman, C. 2003). Su espectro de acción abarca también, algunos corinebacterias, espiroquetas, Nocardidia, Entamoeba histolytica. (Trolldenier, 1900) Las salmoneras, E.coli, Proteus, los hongos son resistentes. Los gérmenes sensibles son inhibidos por una concentración comprendida entre 0,005 y 2,0 UI/mg. Los que necesitan 50 UI/mg o mas se consideran resistentes. (Trolldenier, 1900). En la tabla 1 se muestra el espectro de acción de la Bacitracina. 15

31 Tabla 1. Espectro de acción de la Bacitracina (Según Wege, 1969) Microorganismo Espectro de Microorganismo Espectro de Microorganismo Espectro de Microorganismo Espectro de acción acción acción acción Estreptococos +++ Salmonelas / Clostridios ++ Haemophilus + Estafilococos +++ E. coli / Pasterelas / Actinomyces ++ Neumococos ++ Shigelas / Brucelas + israeli Treponemas ++ Corinebacterias ++ Aerobacter aerogenes Listeria monocytogenes Erysipelothrix insidiosa Bac. Anthracis + Pseudomonas aeruginosa / Fusobacterium necrophorum / Leptospiras + / klebsielas / Vibriones / Toxoplasmas / / Proteus / Mycobacterium tuberculosis + = Grados de sensibilidad / = Resistencia o inactividad Tipo y mecanismo de acción / Coccidias / / Rickettsias / La acción de la Bacitracina es bacteriostática y bactericida. La dosis requerida para que sea bactericida es 5 10 veces mayor a la concentración mínima inhibitoria (la menor concentración capaz de inhibir el crecimiento). La Bacitracina influye sobre importantes sistemas enzimáticos. Impide la construcción de la pared celular bloqueando la desfosforilizacion (Parthier, 1969). La Bacitracina interfiere en la síntesis de la pared celular bacteriana al bloquear las funciones de las moléculas transportadoras de lípidos que transfieren las subunidades de la pared celular a través de la membrana la Bacitracina se une al undecaprenol-pirofosfato, bloqueando su desfosforilación, e impidiendo por lo tanto, la regeneración del transportador de membrana.(sweetman, C. 2003). En los estafilococos inhibe la incorporación del acido glutámico durante la fase de proliferación. (Trolldenier, 1900) Farmacocinética La Bacitracina no se absorbe de forma apreciable en el tubo digestivo. Cuando se administra en inyección intramuscular se absorbe rápidamente. Entre el 10 y el 40% de una dosis única inyectada se excreta por la orina en 24 horas. La Bacitracina difunde fácilmente hacia el líquido pleural y ascético, pero pasa en poca cantidad el LCR. Se ha descrito que la absorción es despreciable tras la aplicación tópica, pero puede producirse después de un lavado peritoneal. (Sweetman, C. 2003). 16

32 Indicaciones y administración La Bacitracina y la Bacitracina zinc se administra por vía tópica, en algunos casos se combina junto con otros antimicrobianos como la Neomicina o Polimixina B, y con corticosteroides, para el tratamiento de las infecciones locales. La Bacitracina se utiliza en infecciones de piel (piodermitis, heridas infectadas, Impetigo contagiosa, foliculitis, ecthyma, furunculosis, ulcera decubitus, dermatitis infecciosa eczematoid, scabies, y dermatofitosis), conjuntivas (causadas por S. aureus, S. pyogenes, entre otros), sinusitis, faringitis, traqueitis, traqueobronquitis, infecciones mandibulares (actinomicosis), oculares, entre otros. La Bacitracina ha sido administrada efectivamente de forma oral para el manejo de amebiasis intestinal, pero se encuentran disponibles otros amebicidas más potentes. Se pueden presentar o producir efectos adversos a partir de la absorción de esta en heridas abiertas y desde la vejiga o la cavidad peritoneal; sin embargo la toxicidad de la dosis restrictiva de preparaciones combinadas se considera que es debida a la Neomicina. (Sweetman, 2003) Bacitracina también ha sido usado de forma oral como un antiséptico intestinal. Su administración oral como suplemento alimenticio en algunas especies animales (pollos, pavos, cerdos y conejos) actúa como promotor del crecimiento y terapéutico para infecciones entéricas. La dosis de 2000 U/Kg de p.v. reduce moderadamente la flora intestinal y una dosis de U/Kg de p.v. ( peso vivo) la destruye en gran parte. La Bacitracina se elimina con la heces en el curso de hasta 3 días después de la ultima administración. (Trolldenier, 1900) Interacciones Puede producirse nefrotoxicidad adicional si se administra Bacitracina de forma sistemática con otros fármacos nefrotoxicos. Se ha descrito que la Bacitracina aumenta la acción de bloqueo neuromuscular de otros fármacos. (Sweetman, 2003) Efectos adversos Cuando se administra Bacitracina de forma sistemática puede producir nefrotoxicidad grave. Pueden aparecer repercusiones cutáneas, anorexia, nauseas y vómitos, así como dolores el lugar de inyección. Pueden producirse reacciones de hipersensibilidad, entre ellas exantemas y anafilaxia, tanto con administración sistémica como con administración tópica, aunque esta ultima es excepcionalmente. (Sweetman, 2003) 17

33 3.3 BACITRACINA ZINC Descripción, solubilidad, conservación Según la Farmacopea Europea es un complejo de Bacitracina y zinc. Su potencia no es inferior a 60UI/mg, calculada con respecto a la sustancia seca. Polvo higroscópico blanco o ligeramente verde amarillento. Poco soluble en agua o alcohol, muy poco soluble en éter. El filtrado de una solución saturada tiene un ph entre 6 y 7.5. Y según la USP 30, es una sal de zinc de un tipo de Bacitracina o mezcla de dos o más sales similares. Tiene una potencia no inferior a 40UI/mg. Contiene no menos de 2,0 por ciento y no mas de 10,0 por ciento de zinc. (Zn), calculado con respectó a la sustancia seca. Polvo higroscópico blanco o de ligero color marrón, inodoro o con un ligero olor. Bastante soluble en agua. El ph en una solución acuosa saturada oscila entre 6 y 7.5. Se Conserva en envases herméticos a una temperatura entre 8 y 15 o C Estabilidad La Bacitracina zinc es más estable que la Bacitracina y puede conservarse durante 18 meses a una temperatura superior a 40 o C sin pérdidas apreciables. Las tabletas de Bacitracina zinc, pomadas y comprimidos que contiene Bacitracina zinc con Neomicina son mas estables que las correspondientes preparaciones de Bacitracina. La Bacitracina zinc es más amarga que la Bacitracina y el sabor se enmascara más fácilmente. (Sweetman, 2003) Incompatibilidades La Bacitracina se inactiva ligeramente en bases que contienen alcohol este arílico, colesterol, derivados de polioxietileno y laurinsulfato sódico y se inactiva rápidamente en bases que contienen agua, macrogoles, propilenglicol, glicerol, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, ictamol, fenol y acido tanico. (Sweetman, 2003) Acción farmacológica Antibiótico polipeptídico. Inhibe la síntesis del mucopéptido que forma la pared celular. De esta manera, impide la formación de la pared celular y hace a la bacteria osmóticamente sensible, llevándola a la lisis. Su acción exige la presencia de cationes bivalentes como el Zinc. 18

34 3.3.5 Indicaciones de uso, dosis recomendadas, vías de aplicación. La Bacitracina de Zinc es el antibiótico más comúnmente utilizado en patologías digestivas, por ser activa frente a bacterias Gram positivas y por ser escasamente absorbible en el tracto digestivo. Para su actividad, este antibiótico precisa de cationes bivalentes como el Zinc. (King et al.1980), Existe la hipótesis de que la Bacitracina no se limita al control de patógenos intestinales, sino que también puede actuar sobre la cinética de absorción de nutrientes (Abecia et al. 2004), dado que en otras especies se ha observado que aquellos animales que la han ingerido presentan un menor grosor de su pared intestinal (King et al.1980), y por tanto pudieran favorecer la absorción de nutrientes Especies a las que se destina (Pollos, pavos, cerdos, conejos, entre otros) se emplea como promotor de crecimiento y terapéutico para infecciones entéricas y superficiales. Para mejorar la producción de huevo, la eficiencia alimenticia en la gallina y el peso de la carcasa o canal. (Abecia et al. 2004), (King et al.1980). Dosis indicativa en especies a las que se destina: 5 a 10 g por tonelada de alimento. (Abecia et al. 2004), Condiciones de almacenamiento En recipientes de cierre perfecto y al abrigo de la luz se mantiene estable. Mantiene su estabilidad hasta dos años a temperatura de 25 C 3.4 BACITRACINA METILEN DISALICILATO Descripción, solubilidad, conservación Antibiótico polipeptídico producido por ciertas cepas de Bacillus lincheniformis y B. subtilis var. Tracy. Es un polvo granular de color amarrillo a café, olor tenue, de sabor amargo, es insoluble en agua y soluble en alcohol y metanol. (Tianjin XinXing, 2007). Debe almacenarse en un lugar frío y seco protegido de la luz solar directa y la humedad. (Alpharma Inc. 2007) Indicaciones de uso La Bacitracina Metilen Disalicilato se ha administrado a pollos de engorde, pavos en crecimiento y cerdos sin presentar efectos adversos. En pollos de engorde para la prevención y control de la enteritis necrótica causada por Clostridium perfringens, agente sensible a la Bacitracina. En pavos se utiliza para el control de la enteritis 19

35 contagiosa (cresta azul, fiebre del lodo) en pavos, complicada por organismos susceptibles a la Bacitracina. En cerdos se administra para el tratamiento de la disentería porcina asociada a Treponema hyodysenteriae. También se está indicado su uso como mejorador del desempeño y para prevenir o controlar la enteritis necrótica en pollo de engorde, gallinas de postura y reproductoras, aves de reemplazo y pavos. Es eficaz en el control de bacterias Gram Positivas y altamente efectivo contra Clostridium perfringens, causante de enteritis necrótica. (Alpharma Inc. 2007). Como promotor del crecimiento y para mejorar la conversión alimenticia. Para el tratamiento de la enteritis necrótica de las aves por clostridios. (Alpharma Inc. 2007). No se absorbe a partir del tracto intestinal y no desarrolla residuos detectables en los tejidos. No causa resistencia transferible entre las bacterias contra el medicamento, Se administra en Broiler y pavos para mejorar la ganancia de peso, la conversión alimenticia y para el control de enteritis necrótica. En aves de postura: Aumenta la eficiencia en la producción de huevos, con un mejoramiento en la conversión alimenticia y aumenta el número de huevos producidos por ave. Se utiliza en cerdos produce un aumento en la ganancia de peso y mejora la conversión alimenticia, con un aumento en la uniformidad de los cerdos. Controla cuadros de enteritis producidos por Clostridium perfringes y en combinación con clortetraciclina se utiliza para la prevención y control de ileitis. En vacunos para aumentar la ganancia de peso diaria y reducción de abscesos hepáticos. (Farquímica, 2004) 3.5 Micrococcus luteus Clasificación científica Dominio: Bacteria Phylum Actinobacteria Orden: Actinomycetales Familia: Micrococcaceae Genero: Micrococcus Especie: M. luteus Características Micrococcus luteus es una bactéria Gram positiva de forma esférica, es un microorganismo saprófito, aeróbio obligado. M.luteus se encuentra en ambientes 20