Biocromatografía: intercambio iónico

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1 Biocromatografía: intercambio iónico Intercambio Iónico Columnas TSK-GEL El método más utilizado en la purificación de proteínas y otras moléculas que presenten carga eléctrica es la Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC). Las claves del poder de esta técnica se hallan en su elevada capacidad, gran poder de resolución y a su facilidad de escalado desde el nivel analítico al preparativo. Se calcula que aproximadamente el 70% de los protocolos de análisis y purificación de proteínas incluyen un paso en el que aparece la Cromatografía de Intercambio Iónico. El mecanismo operativo de la IEC se basa en el ligado reversible de las moléculas cargadas sobre la superficie del soporte cromatográfico. La fuerza con la que se produce este ligado está gobernada por la fuerza de la carga del sustrato, el pka de la matriz de intercambio iónico y por las propiedades del eluyente acuoso: ph y fuerza iónica. La gama de rellenos TSK para intercambio iónico incluye cuatro tipos de intercambiadores: aniónicos fuertes, aniónicos débiles, catiónicos fuertes y catiónicos débiles. La selección del intercambiador adecuado permitirá distinguir entre las específicas propiedades de ionización (pi) de cada proteína e incluso diferenciar proteínas con el mismo pi a través de sus diferentes cargas localizadas. nalizado con una estructura reticular de grupos poliamina. La capacidad de estas columnas se ha demostrado independiente del tamaño de la proteína y garantiza también una máxima velocidad de transferencia, además de una mínima pérdida de adsorción. Ligado y elución de proteínas en resinas intercambiadoras aniónicas TSK-gel y Toyopearl LIGADO DE PROTEÍNAS Baja concentración salina ELUCIÓN DE PROTEÍNAS Elevada concentración salina TEKNOKROMA Fax gratuito para pedidos Toso ofrece una línea completa de rellenos de sílice y poliméricos para intercambio iónico, IEC, diseñados para una amplia variedad de aplicaciones: alta capacidad, alta resolución, alta velocidad, etc. Columnas base sílice Las columnas TSK-gel DEAE-2SW basadas en una micropartícula de sílice son ideales para la resolución de biopolímeros de bajo peso molecular (péptidos, nucleótidos, oligómeros). Las columnas TSK-gel DEAE-3SW y TSK-gel CM-3SW, también en base sílice, por su mayor tamaño de poro son recomendables para el análisis de biomoléculas de peso molecular medio (polipéptidos, enzimas, etc.) Columnas poliméricas Las columnas poliméricas TSK-gel DEAE-5PW, Q-5PW y SP-5PW, basadas en una matriz de polimetacrilato de 1000 Å de tamaño de poro son la solución perfecta para la resolución de grandes biopolímeros (proteínas, ácidos nucleicos, etc). Son especialmente recomendables cuando se trata de analizar biopolímeros en fluidos biológicos, ya que su extremada resistencia a valores extremos de ph (2-12) permite lavar la columna con soluciones alcalinas (0.1N NaOH). Las nuevas columnas BIOASSIST se componen de un relleno de metacrilato de aprox 4000 Å de poro y funcio- Resinas no porosas (NPR) El desarrollo de pequeñas partículas no porosas ha permitido reducir espectacularmente los tiempos de análisis en las separaciones de HPLC. Con estos rellenos no porosos el factor limitante de la velocidad de difusión en el interior de los poros se ha eliminado, con lo que es posible reducir el tiempo de análisis en más de un 80%, pasando de tiempos de 2 horas a únicamente 15 minutos, sin que ello comporte ninguna pérdida de resolución. Las recuperaciones pueden llegar a ser superiores al 90% incluso con cargas de menos de 50 ng. Para más detalles de aplicaciones, modos de operación y características de las columnas, solicite el catálogo de Toso. Más de 250 páginas dedicadas exclusivamente a la biocromatografía. 580

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5 Biocromatografía: intercambio iónico TEKNOKROMA Fax gratuito para pedidos Capacidad de las columnas intercambiadoras TSK-GEL porosas y no porosas Muestras puras Crudos TSK-GEL Tipo de Poroso No poroso Poroso No poroso muestra (mg) (µg) (mg) (µg) DEAE Proteína DNA SP Proteína Estabilidad al ph de TSKgel DEAE-5PW y TSKgel SP-5PW Capacidad de intercambio Intercambiador Acido/Base Antes de la Después de exposición la exposición DEAE-5PW 0.5M NaOH 0,09 0,09 0,5M HCI 0,09 0,09 20% CH3COOH 0,09 0,08 SP-5PW 0,5M NaOH 0,13 0,13 0,5M HCI 0,13 0,13 20% CH3COOH 0,13 0,13 Nota: Los rellenos fueron expuestos a las soluciones ácidas o básicas durante 10 días a 25ºC 584

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