CARACTERIZACIÓN DE LA ESTRUCTURA POLIFENÓLICA DE VINOS TINTOS DE TEMPRANILLO Y GARNACHA DE DIFERENTE TIPOLOGÍA CUALITATIVA

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1 CARACTERIZACIÓN DE LA ESTRUCTURA POLIFENÓLICA DE VINOS TINTOS DE TEMPRANILLO Y GARNACHA DE DIFERENTE TIPOLOGÍA CUALITATIVA A, Casp; I. Abril; M. Vera; I. Arozarena; M. Navarro Tecnología de Alimentos. Escuela Técnica Superior de Ingenieros Agrónomos. Universidad Pública de Navarra Campus Arrosadía Pamplona (España) Tel.: Fax: acasp@unavarra.es Resumen En este trabajo se analizó la composición fenólica (antocianos, polifenoles totales, proantocianidinas, etc.) y el color (d520, intensidad del color, tonalidad, etc.) en vinos jóvenes de Tempranillo y Garnacha elaborados con uva de diferente calidad. Los vinos producidos con uva de alta calidad, particularmente los de Tempranillo, presentaron valores superiores en la mayor parte de los parámetros analizados que aquellos procedentes de uva de baja calidad. Se observó una intensa correlación entre las variables con un papel más importante en la diferenciación de los vinos. Es decir, variables como antocianos totales, antocianos libres, intensidad del color, polifenoles totales, flavonoides no antociánicos, etc., variaron de una forma pareja en el conjunto de muestras. Por otro lado, el nivel de copigmentación de los anthocianos en los vinos estudiados fue bajo, y no se pudo verificar una relación clara entre el mismo y el color. Résumé On a étudié la composition polyphénolique (anthocyanes, polyphénols totaux, proanthocyanidines, etc.) et la couleur (d520, intensité colorante, teinte, etc.) de vins jeunes de Tempranillo y Garnacha élaborées avec raisins de différente qualité. Les vins produits avec raisins de haute qualité, en spécial les vins de Tempranillo, présentent valeurs supérieures aux vins qui procèdent de raisin de basse qualité dans la majorité des paramètres analysées. On a observé une corrélation intense entre les variables qui présentent un rôle plus important dans la différentiation des vins. C est à dire, variables comme anthocyanes totaux, anthocyanes libres, intensité colorante, polyphénols totaux, flavonoïdes no anthocyaniques, etc. varient de la même façon dans l ensemble de vins. D un autre coté, le niveau de copigmentation des anthocyanes des vins analyses est bas et on n a pas pu vérifier une claire relation avec la couleur du vin. Abstract In this work, the phenolic composition (anthocyanins, total phenolics, proanthocyanidins, etc.) and color (d520, color intensity, tone, etc.) of Tempranillo and Garnacha young wines were analysed. These wines were produced from grapes of different quality. Those from highquality grapes, particularly Tempranillo wines, showed larger values in most of the parameters than wines from low-quality grapes. A high correlation was observed between those variables with the most important role in the differentiation of wines. That is, the 258

2 parameters intensity of color, total and free anthocyanins, total phenolics, non-anthocyanic flavonoids, etc., varied in a similar way in the sample set. On the other hand, the level of copigmented anthocyanins in the wines was low, and it was not possible to verify a clear relationship between this level and wine color. Introducción Los compuestos fenólicos juegan un papel primordial en la calidad de los vinos, al contribuir decisivamente en la definición del color y de la mayor parte de las características gustativas de los mismos. La concentración de estos compuestos en el vino está determinada fundamentalmente por su presencia en la uva y, en menor medida, por el método de extracción-vinificación empleado. A su vez, en la uva, la composición polifenólica varía ampliamente en función de la variedad, el clima, suelo, prácticas culturales, etc. El objetivo de este trabajo es estudiar la composición polifenólica y el color de vinos de dos variedades distintas, procedentes de uvas de diferente calidad. Se pretende analizar las diferencias entre los distintos vinos y la relación existente entre las distintas variables analíticas analizadas Materiales y métodos Material. En este trabajo se estudian quince vinos tintos jóvenes monovarietales, ocho de Tempranillo y siete de Garnacha, correspondientes a la vendimia del año Todos ellos fueron aportados por la Bodega Piedemonte, de Olite (Navarra). Cada vino se elaboró con uva de una sola parcela. La bodega, en base a la experiencia acumulada a lo largo de los años, clasificó los vinos en tres categorías de acuerdo a la calidad de la uva. Las muestras se han codificado mediante una letra, indicativa de la variedad (T de Tempranillo, G de Garnacha), seguida de dos dígitos. El primero hace referencia a la calidad: alta (1), media (2), y baja (3). El segundo permite diferenciar los vinos dentro de cada categoría. Métodos analíticos. Se presentan los datos correspondientes a 21 variables analíticas. En la tabla 1 aparecen dichas variables, el código para su identificación, la unidad de medida y la referencia del método de análisis empleado. Todos los análisis se realizaron por triplicado. El equipo utilizado para el análisis de los antocianos libres mediante HPLC consta de un Módulo de Separación Waters 2690 acoplado a un Detector PDA Waters 996. El control, captación y tratamiento de los datos se realizó con el programa Millenium. Se empleó la columna Nova-Pak C 18 (150 mm x 2. mm., 4μm de tamaño de partícula). Se inyectaron 20 μl de cada vino, previamente concentrado. El flujo de la fase móvil fue de 0.2 ml/min. El eluyente A fue ácido fórmico en agua (5:95), y el B, acetonitrilo. Gradiente de concentraciones del eluyente B: 0-20 min, 10% hasta 20%; min, isocrático al 20%; y min, 20% hasta 24.2%. La elución de los distintos compuestos se monitorizó entre 250 y 550 nm. Su identificación se realizó en base al orden de elución y a las características espectrales, comparándolas con la literatura (Hebrero et al, 1988, 1989; Castia et al, 1992; Dallas y Laureano, 1994; Hmamouchi et al., 1995). La cuantificación se realizó a 525 nm, expresada como mg l -1 de monoglucósido de malvidina (Polyphenol Laboratories, Noruega). 259

3 Tabla 1. Variables analizadas Variable Código Unidades Método Intensidad colorante IC Densidad óptica a 520 nm d520 CEE, 1990 Contribución de la absorbancia a 420 nm a la IC %420 Contribución de la absorbancia a 420 nm a la IC %520 Contribución de la absorbancia a 420 nm a la IC %620 Tonalidad Tonal Indice de ionización I_ioniz Glories y Rossi, 1984 Antocianos libres totales A_libres mg l- 1 Monoglucósidos totales A_mg mg l- 1 HPLC Suma acetatos de los monoglucósidos A_ac mg l- 1 Suma cinnamatos de los monoglucósidos A_cn mg l- 1 Antocianos totales A_tot mg l- 1 Ribereau y Stonestreet, 1965 % antocianos copigmentados %Copig % antocianos monoméricos %Monom Boulton % antocianos polimerizados %Polim Polifenoles totales Pol_tot g l- 1 Singleton y Rossi, 1965 Flavonoides totales Fla_tot g l- 1 Flavonoides no antociánicos Fla_No A g l- 1 Di Stefano et al., 1989 Flavonoides antociánicos Fla_A g l- 1 Proantocianidinas Proant g l- 1 Indice de Polifenoles totales IPT Blouin, 1992 El resto de determinaciones se llevó a cabo en un espectrofotómetro UV-VIS Cintra 20. Los antocianos totales se analizaron mediante el método de Ribéreau por decoloración con bisulfito. La acidificación con ácido clorhídrico y la decoloración con bisulfito permitió la determinación del índice de ionización. Los polifenoles totales se analizaron por medio del reactivo de Folin-Ciocalteu. Así mismo se determinó el índice de polifenoles totales definido como la absorbancia a 280 nm. Por otra parte se emplearon las metodologías de tipo gráfico descritas por Di Stefano (1989) para analizar los flavonoides totales (y sus dos fracciones, antociánica y no antociánica) y el contenido en proantocianidinas. Se realizó una estimación del contenido relativo en antocianos copigmentados, monoméricos y poliméricos mediante el método sugerido por Boulton. Las medidas de absorbancia a 420, 520 y 620 nm sirvieron para determinar los parámetros restantes: densidad óptica a 520 nm, la intensidad colorante, y la tonalidad, Así mismo se analizó la contribución de cada una de dichas medidas de absorbancia a la intensidad colorante. Análisis estadístico. Los tratamientos estadísticos presentados en este trabajo, análisis de la varianza, análisis cluster y análisis de componentes principales, se llevaron a cabo mediante el programa Statgraphics Plus para Windows versión 5.0. Resultados y discusión En primer lugar se presentan los resultados del análisis de la varianza realizado sobre los datos obtenidos en las 3 repeticiones de cada análisis. En la tabla 1 aparecen, para cada variable, las medias correspondientes a cada vino y el parámetro F obtenido. No se muestran los intervalos de confianza de dichas medias, ni se detalla entre qué vinos existen diferencias significativas. Se trata de un primer análisis exploratorio con el objetivo de observar en qué parámetros existe una mayor variabilidad entre los vinos objeto de estudio. 260

4 Las variables que presentan, con diferencia, los mayores valores F son la intensidad del color y la densidad óptica a 520 nm, variables evidentemente relacionadas. Se observa claramente que, dentro de cada variedad, el valor que toman ambos parámetros es mayor en los vinos clasificados como de alta calidad que en los vinos de baja o media calidad. Si se analiza la composición del color en sus componentes amarillo (%420), rojo (%520) y azul (%520), se observa que aquellos vinos con mayor intensidad del color tienden a presentar una proporción decreciente de componente amarillo y una contribución relativamente creciente del azul. El componente rojo es elevado, superior siempre al 50%, lo cual resulta lógico en vinos jóvenes. No obstante, a diferencia de los otros dos componentes, no se observa una relación definida entre el valor que toma la proporción roja con la intensidad del color. Aquellos vinos con mayor intensidad del color no presentan necesariamente una contribución del componente rojo mayor que aquellos vinos con menor intensidad del color. Tabla 2. Análisis de la varianza en función del vino. Valores medios de cada vino y parámetro F a Vino IC d520 % % % Tonal I_ionz A_libres A_mg A_ac A_cn mg l -1 mg l -1 mg l -1 mg l -1 T T T T T T T T G G G G G G G F a Todos los valores p obtenidos son menores de

5 Tabla 2. Continuación Vino A_tot % % % Pol_tot Fla_tot Fla_noA Fla_A Proant IPT mg l -1 Copig Monom Polim g l -1 g l -1 g l -1 g l -1 g l -1 T T T T T T T T G G G G G G G F La tonalidad, cociente de las densidades ópticas a 420 nm y 520 nm, varía entre 0.54 (T-12) y 0.72 (G-31), y, lógicamente, sigue una pauta relativamente pareja al parámetro %420 e inversa a la intensidad del color. El índice de ionización es una estimación de la proporción de los antocianos totales decolorables con SO 2 que están presentes en el vino en su forma coloreada, es decir, que aportan color. Esta proporción oscila entre un 13.4 % (G-22) y un 38 % (T-11). Como en el caso de la intensidad del color, se observa una cierta tendencia dentro de cada variedad, en el sentido de que los vinos de alta calidad presentan un índice de ionización superior a los vinos de baja calidad, con la excepción del vino T-32. En la tabla 1 aparecen también las medias correspondientes a los antocianos libres totales, determinados mediante HPLC, así como sus tres fracciones, el conjunto de los monoglucósidos de las antocianidinas, y sus respectivos derivados cinámicos y acéticos. Los tres primeros parámetros muestran una tendencia muy similar, con concentraciones más altas en los vinos de alta calidad respecto a los de baja o media, aunque con importantes excepciones como T-22, T-31 o G-32. Cabe señalar que el contenido en derivados cinámicos de los cuatro vinos de Tempranillo clasificados como de alta calidad es estadísticamente superior al contenido medio del resto de vinos. Los acetatos se comportan de forma distinta. El elevado valor F obtenido para esta variable parece deberse, sobretodo, a que los vinos de Tempranillo, independientemente de su calidad, presentan, en general, mayor concentración en acetatos que los de Garnacha. La variable antocianos totales mide conjuntamente los antocianos libres o monoméricos y los antocianos polimerizados sensibles a la decoloración con SO 2. El valor que toma este parámetro, por tanto, debe ser mayor al valor que toma la variable antocianos libres. No obstante, en los vinos estudiados, ambas variables presentan valores similares, e incluso, la 262

6 concentración en antocianos totales parece ser menor que en antocianos libres. Esto se puede deber a dos razones. Por una parte, los métodos analíticos empleados son completamente diferentes. Por otro lado, al tratarse de vinos jóvenes cabe esperar que el grado de polimerización de los antocianos sea bajo, de forma que la mayor parte de los mismos se encuentre en forma libre, con el resultado de que exista poca diferencia entre el valor de ambas variables (Rivas-Gonzalo et al., 1992). Así, el coeficiente de correlación lineal encontrado entre ambas variables es de El estudio de la distribución de los antocianos en sus fracciones copigmentada, monomérica y polimérica, determinadas mediante la metodología aportada por Boulton, parece corroborar lo señalado en el párrafo anterior. En los vinos estudiados predomina largamente la forma libre o monomérica con porcentajes que oscilan entre un 47.6 % (T-22) y un 63.2 % (G-11). La fracción polimérica es más bien baja, en la mayor parte de los vinos entre un 20 y un 25 % del total. La proporción correspondiente a los antocianos copigmentados oscila entre un 12.7 % (T-32) y un 27 % (G-22). Estos porcentajes son sensiblemente inferiores a los observados por otros autores. Así, Mazza et al. (1999), en vinos jóvenes de Merlot y Cabernet Franc, obtuvieron valores de copigmentación de alrededor del 45%, en detrimento de la fracción monomérica (alrededor del 30 %), puesto que la polimérica fue del mismo orden que la observada en este trabajo. Boulton (2000) señala que la copigmentación es responsable del 40 % de la formación de color de los vinos tintos en los seis primeros meses, y que el nivel de copigmentación está controlado por la cantidad de copigmentos incoloros (ácidos cinámicos, catequinas y epicatequinas, mirecitina, quercetina, etc.) presentes en las uvas. Cabría suponer, aunque carecemos de datos para afirmarlo, que el contenido en copigmentos en las uvas con las que se elaboraron los vinos estudiados en este trabajo fuera insuficiente para alcanzar los niveles de copigmentación observados por los autores citados. En cuanto al resto de parámetros analizados, polifenoles totales, flavonoides totales y sus fracciones antociánica y no antociánica, así como el contenido en proantocianidinas, los valores F correspondientes son, en general, menores que los observados en otras variables. Las concentraciones obtenidas en las variables polifenoles totales, flavonoides totales y proantocianidinas no son comparables en términos absolutos, puesto que el método analítico empleado en cada caso y la forma en que están expresadas son diferentes. Así, los parámetros polifenoles totales y flavonoides totales son indicativos del contenido global en compuestos fenólicos del vino. El primero se mide mediante un método clásico, ampliamente difundido y contrastado. El método de Di Stefano et al. (1989) ofrece valores menores que el anterior en los vinos estudiados, y quizá menos ajustados a la realidad, aunque por otra parte, puede tener un alto interés práctico al permitir estimar el estado de los polifenoles en el vino, diferenciando dos fracciones, la antociánica y la no antociánica. La figura 1 es el dendograma del análisis cluster realizado sobre el conjunto de datos expuestos en la tabla 1. Este análisis combina las observaciones formando grupos (clusters) con similares características. En este caso se pueden diferenciar tres agrupaciones de vinos principales. El primer grupo está constituido por los cuatro vinos de Tempranillo clasificados como de alta calidad, junto al vino de Garnacha G-11, y a uno de los vinos de Tempranillo de calidad media (T-21). En el segundo se localizan dos vinos de Tempranillo, de calidad media y baja, y cuatro de Garnacha, los dos de calidad alta que restan, junto a G-21 y G-32. Los tres vinos restantes, T-32, G-22 y G-31, se localizan en un tercer grupo, aunque las distancias entre los tres vinos son bastante acusadas. En este sentido, el grupo más interesante es el primero, puesto que las distancias entre las observaciones son, en algunos casos, pequeñas, destacando la gran similitud que parece existir entre los vinos de Tempranillo T-12 y T

7 8 Distancia T-11 T-12 T-14 G-11 T-21 T-13 T-22 T-31 G-12 G-13 G-32 G-21 T-32 G-22 G-31 Figura 1. Análisis Cluster. Dendograma de los vinos estudiados A continuación, con los mismos datos, se aplicó un análisis de componentes principales (PCA). El fundamento de esta técnica estadística es parecido al anterior. Permite simplificar el estudio del conjunto de datos, agrupando las observaciones en función de sus características analíticas. Este método, no obstante, aporta una mayor información que el análisis cluster. El PCA permite reducir el número de dimensiones del sistema, al crear unas nuevas variables, los componentes principales, que son funciones lineales de las variables originales. El peso de estas últimas en cada componente es indicativo de la influencia que ejercen en el agrupamiento o localización de las observaciones, así como de la relación existente entre las propias variables. En la tabla 3 se observa que, de los 21 componentes principales posibles, los cuatro primeros son significativos, con valores propios superiores a 1, sumando cerca del 85% de la varianza total. En la tabla 4 aparece el peso de las variables analíticas en los dos primeros componentes principales que suman el 50% y el 17% de la variabilidad total, respectivamente. La mayor parte de los parámetros tienen una importancia similar en el PC1, con la excepción de las variables IPT, A_ac, %620, % antocianos poliméricos y % copigmentados, y tonalidad, con un peso menor que el resto. Dejando aparte estas variables, el mayor peso corresponde al parámetro %420 con un coeficiente negativo. Todas las demás presentan un coeficiente positivo con valores en un rango relativamente estrecho que oscila entre (Fla_no A) y (IC). Esto indica que todas estas variables están relacionadas entre sí, lo que significa que, en general, aquellos vinos que tuvieron altos valores en alguna de estas variables, tendieron a mostrar altos valores también en las restantes. No obstante, el análisis de los coeficientes de las variables en el segundo componente permite matizar lo anterior y diferenciar, dentro de este gran conjunto de variables, grupos más reducidos en los que las variables están más íntimamente relacionadas. En la tabla 4 es diferencian mediante líneas discontinuas. Así, la intensidad colorante está, evidentemente, muy correlacionada con la absorbancia a 520 nm. Ambos parámetros se correlacionan también con el índice de ionización, lo cual tiene una explicación sencilla: el aumento de la proporción de antocianos libres y combinados presentes en su forma coloreada en el vino implica un incremento de la absorbancia a 520 nm, y por ende, de la intensidad del color. Estas tres variables tienen un coeficiente positivo en el PC2. El resto presenta pesos de signo negativo, pudiendo diferenciar dos grupos de variables. 264

8 Tabla 3. Análisis de Componentes Principales Tabla 4. Pesos de las variables en los dos primeros componentes PC Valor propio % varianza % acumulado varianza Variable PC 1 PC IC d I_ioniz Fla_A A_tot A_libres A_mg A_cn % Pol_tot Fla_tot Fla_no A Proant IPT A_ac % %Monom %Polim % Tonal %Copig Uno está formado con todos los parámetros referidos a los antocianos más la variable %520. Las variables flavonoides antociánicos, antocianos totales, antocianos libres y monoglucósidos parecen estar muy íntimamente relacionados. Las dos primeras variables, aunque los métodos analíticos empleados son diferentes, conducen a resultados similares en términos relativos (el coeficiente de correlación lineal encontrado entre ambas variables es 0.860). Por otro lado, ya se ha discutido en párrafos anteriores que, dada la naturaleza de vinos jóvenes de los vinos estudiados, la mayor parte de los antocianos se encuentran en su estado libre o monomérico, lo que explica la escasa diferencia existente entre la información aportada por la variable antocianos libres y las dos anteriores. Por su parte, dentro de este mismo grupo, las variables %520 y derivados cinámicos (A_cn) muestran también una ligazón particularmente intensa. De ello cabe deducir que un alto contenido en monoglucósidos acilados con los ácidos cinámicos se traduce en una mayor contribución del componente rojo a la intensidad colorante. El tercer grupo de variables importante es el constituido por las variables polifenoles totales, flavonoides totales, flavonoides no antociánicos, proantocianidinas, y secundariamente, los derivados acéticos de los monoglucósidos y el índice de polifenoles totales. Los cuatro primeros parámetros varían de forma paralela en los vinos estudiados y no aportan una información diferenciada que permita una caracterización más profunda de los mismos. Las variables IPT y A_ac también están relacionadas con las anteriores aunque en menor medida. Su peso dentro del PC1 también es menor. Lo mismo ocurre con el resto de parámetros. Así, %620, el porcentaje de antocianos monoméricos y el % de antocianos poliméricos tienen un peso importante, de signo positivo, en el PC2. Por su parte el porcentaje de antocianos copigmentados parece estar en contraposición de los anteriores con un elevado coeficiente negativo en PC2. Boulton (2000) define la copigmentación como el aumento de color debido a la presencia de componentes 265

9 incoloros, siendo responsable del 40 por ciento del color de los vinos tintos jóvenes, así como de los tonos azules que en ocasiones se aprecian en dichos vinos. Paradójicamente, en nuestro caso, los resultados obtenidos tienden a contradecir lo anterior, puesto que se observa una relación moderadamente inversa entre la proporción de antocianos copigmentados y las variables índice de ionización, d520, intensidad colorante, y la contribución del componente azul a la intensidad del color (%620). No obstante, los niveles de copigmentación detectados en los vinos de este trabajo son inferiores a los observados por otros autores, y el número de muestras estudiado es muy reducido para extraer juicios concluyentes. Por último, en la figura 2 aparece la distribución de los quince vinos en el plano definido por los dos primeros componentes principales. Como cabría esperar, la representación es muy coherente con lo observado en la figura 1, correspondiente al análisis cluster. 6 4 T-32 2 PC2 (17.0 %) 0-2 G-22 G-31 G-13 T-22 T-31 G-12 G-21 T-21 T-13 G-11 T-12 T-14 T-11 G PC1 (50.3 %) Figura 2. Distribución de los vinos en función de los componentes principales 1 y 2 El grupo de muestras más definido corresponde al constituido por los vinos de alta calidad T- 12 y T-14, junto con T-11 y G-11, situados en el extremo positivo del eje definido por el PC1. Estos cuatro vinos presentan los mayores valores en las variables IC, d520 e índice de ionización, destacando también en el resto de variables con un peso positivo importante en el PC1 (antocianos libres, antocianos totales, polifenoles totales, proantocianidinas, etc.). Cercanos a este grupo se encuentran los vinos de tempranillo T-21 y T-13, con características parecidas a los anteriores, pero con intensidad del color, d520 e índice de ionización menor. En el extremo negativo del eje de abcisas se localizan los vinos de Garnacha G-31 y G-22 caracterizados por una tonalidad y %420 elevados, y bajos valores en intensidad del color, d520, %520, antocianos libres, proantocianidinas, etc. En la zona central de la figura se localiza el resto de vinos, distribuidos de forma dispersa, con características intermedias a las de los vinos citados con anterioridad. Conclusiones Los vinos estudiados se pudieron caracterizar en base a sus características polifenólicas. Se observó una gran interrelación entre las distintas variables analizadas, puesto que las tendencias de variación de las mismas en el conjunto de muestras fueron muy similares. 266

10 De forma genérica, los vinos de alta calidad tendieron a presentar valores y concentraciones en la mayor parte de los parámetros y fracciones fenólicas superiores a los de menor calidad. Se observó la misma tendencia en los vinos de Tempranillo respecto a los de Garnacha. Dado el reducido número de muestras y el bajo nivel de copigmentación encontrado en ellas, no se pudo verificar el posible papel de dicha copigmentación en el incremento del color de los vinos. Agradecimientos El presente trabajo se enmarca dentro del Proyecto VIN (INIA). A la empresa Bodegas Piedemonte de Navarra, por las muestras suministradas. Referencias bibliográficas Blouin, J Techniques d analyses des moûts et de vins. Ed. Bujardin-Salleron, Paris. Boulton R Estimation of copigmented anthocyanin content in red wines. Correspondencia personal. Boulton R Extracción y conservación del color en los vinos tintos. Procedente del II Foro Mundial del Vino, Rioja III Milenio, en Logroño, mayo de Editado por Gobierno de la Rioja, p Castia, T.; Franco, M.A.; Maitivi, F.; Muggiolu, G.; Sperlazzo, G. et Versini, G Caractérisation de cultivar en Sardaigne: méthodes chémometriques appliquées a l analyse fractionnée des anthocyanes. Sciences des aliments, 12, Dallas C, Laureano O (1994) Vitis 33:41-47 Di Stefano R., Cravero M.C., Gentilini, N Metodi per lo studio dei polifenoli dei vini. L enotecnico, maggio, Glories, Y. 1984a. La couleur des vins rouges. I les équilibres des anthocyanes et des tanins. Conn. Vigne Vin, 18 (3), Glories, Y. 1984b. La couleur des vins rouges. II mesure, origine et interpretation. Conn. Vigne Vin, 18 (4), Hebrero, E.; García-Rodriguez, C.; Santos-Buelga, C. and Rivas-Gonzalo, J.C Analysis of anthocyanins by High performance liquid chromatography-diode array spectroscopy in a hybrid grape variety (Vitis vinifera x vitis berlandieri 41B). Am. J. Enol. Vitic., 40 (4), Hebrero, E.; Santos-Buelga, C. and Rivas-Gonzalo, J.C High performance liquid chromatography-diode array spectroscopy identification of anthocyanins of Vitis vinifera variety Tempranillo. Am. J. Enol. Vitic., 39 (3), Hmamouchi, M.; Es-Safi, N.; Pellecuer, J. et Essassi, E.M Composition anthocyanique des pellicules de raisin de quatre cépages rouges cultivés au Maroc. Bulletin de l OIV, nº , Mazza, G.; Fukumoto, L.; Delaquis, P.; Girard, B. and Ewert, B Anthocyanins, phenolics, and color of Cabernet franc, Merlot, and Pinot noir wines from British Columbia. J. Agric. Food Chem., 47, Ribéreau-Gayon, P. y Stonestreet, E Le dosage des anthocyanes dans le vin rouge. Bull. Soc. Chim., 9, Rivas-Gonzalo J.C., Hebrero G.E., Santos-Buelga C Comparisons of methods for the determination of anthocyanins in red wines. Am. J. Enol. Vitic., 43, Singleton U.L., Rossi J.A Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents. Am. J. Enol. Vitic., 16, Unión Europea. Reglamento (CEE) nº 2676/90: Métodos de análisis aplicables en el sector del vino. Diario Oficial de las Comunidades Europeas, 2/XIII/