Redalyc. Imperiale, Belén; Morcillo, Nora; Bernardelli, Amelia

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1 Redalyc Sistema de Información Científica Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal Imperiale, Belén; Morcillo, Nora; Bernardelli, Amelia Identificación fenotípica de micobacterias Bioquímica y Patología Clínica, vol. 71, núm. 2, 2007, pp Asociación Bioquímica Argentina Argentina Disponible en: Bioquímica y Patología Clínica ISSN (Versión impresa): info@abaonline.org.ar Asociación Bioquímica Argentina Argentina Cómo citar? Número completo Más información del artículo Página de la revista Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

2 REVISTA BIOQUIMICA Y PATOLOGIA CLINICA VOL 71 Nº Trabajo: págs Pág 47 MONOGRAFÍA Identificación fenotípica de micobacterias Belén Imperiale 1 Nora Morcillo 1 Amelia Bernardelli 3 1 Bioquímico 2 Bioquímica Especialista 3 Bioquímica Especialista 4 Bioquímica 5 Bioquímica Lugar de Trabajo: 1 Laboratorio de Referencia del Programa de Control de la Tuberculosis de la Provincia de Buenos Aires, Hospital Dr. Antonio A. Cetrángolo. 2 Laboratorio de Referencia en Tuberculosis Bovina (OIE), Laboratorio de Referencia en Paratuberculosis (OIE) DILAB Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) Revista ByPC. Incorporada al Latindex. ISSN Código Bibliográfico: RByPC Trabajo Recibido: Aceptado: La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa producida por Mycobacterium tuberculosis. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial se encuentra infectada con dicha micobacteria, y que dos millones de personas mueren anualmente en todo el mundo por esta enfermedad. 1 En la Argentina la TB es considerada una enfermedad endémica. Con la epidemia del HIV/SIDA ha habido un aumento importante en el número de enfermos de TB. 2 La infección con el HIV, no sólo ha llevado a un aumento de la incidencia de TB, sino que también produjo un aumento de enfermedades producidas por las micobacterias no tuberculosas (NTM), llamadas micobacteriosis. 3 Este hecho lleva frecuentemente a la necesidad de la identificación micobacteriana. Dentro del Complejo M. tuberculosis se encuentran las siguientes especies: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. africanum, M. microti, M. caprae, M. canetti y M. pinnipedii. 4 El M. bovis es el agente etiológico de la TB bovina, pero puede también producir enfermedad en el hombre, convirtiendo a la enfermedad en una zoonosis. Por tal motivo, es necesario contar con herramientas adecuadas para diferenciar M. bovis de M. tuberculosis en aquellos casos donde el enfermo en estudio posea características epidemiológicas compatibles con una tuberculosis causada por M. bovis. Una de las causas por la que es importante saber si la enfermedad esta causada por M. tuberculosis o M. bovis es por el tratamiento. M. bovis es intrínsecamente resistente a pirazinamida, una de las principales drogas utilizadas en el tratamiento de la TB causada por M. tuberculosis. 5 Las micobacterias no tuberculosas son microorganismos ambientales que pueden producir desde colonización hasta enfermedad en el huésped susceptible. Las personas están habitualmente en contacto con las micobacterias ambientales, las cuales son comúnmente ingeridas, inhaladas o hasta pueden estar en la piel. Según su patogenicidad y virulencia, las micobacterias se clasifican en tres grupos. El primero incluye a los patógenos estrictos altamente virulentos. Estos no son encontrados en el medio ambiente. Algunos ejemplos de este grupo son el complejo M. tuberculosis, M. leprae. En el segundo grupo se encuentran las micobacterias potencialmente patógenas, de virulencia intermedia. La mayoría se encuentran en la naturaleza y se convierten en patógenas en circunstancias especiales del huésped, es decir se comportan como oportunistas. Como ejemplo de este grupo se encuentra el complejo Mycobacterium aviumintracellulare. Pertenecen al tercer grupo las especies normalmente saprófitas, avirulentas, que son no patógenas o lo son sólo excepcionalmente. Como ejemplo se encuentran M. gordonae, M. fortuitum. Otra clasificación de las micobacterias es la que fue descrita por Runyon, y se basa en caracteres como el tiempo de crecimiento y la cromogenicidad de las colonias obtenidas en cultivo. 6 Los grupos son: I. Fotocromógenas: son de crecimiento lento. Colonias no pigmentadas en la oscuridad, los cultivos jóvenes adquieren color amarillo al exponerlos a la luz. II. Escotocromógenas: Son de crecimiento lento. Colonias pigmentadas, amarillentas o anaranjadas, aunque desarrollen en la oscuridad. III. No cromógenas: Crecimiento lento. Colonias no cromógenas generalmente. En algunos casos los cultivos viejos adquieren color amarillento. IV. De crecimiento rápido: Desarrollan colonias en los medios de cultivo en menos de una semana.

3 Identificación fenotípica de micobacterias Las enfermedades causadas por micobacterias se diagnostican generalmente por exámenes bacteriológicos, baciloscopía y cultivo. A través de la baciloscopía no es posible identificar la especie causal y solo se informa presencia de bacilos ácidoalcohol resistentes, en cambio el cultivo permite continuar con el proceso de identificación micobacteriana. En el caso de diagnosticar a un paciente con TB o con micobacteriosis el comportamiento clínico debe ser completamente distinto, ya que la implicancia epidemiológica y el tratamiento eficaz deben ser diferentes en ambos casos. Hasta el presente no ha sido demostrada la transmisión persona a persona, especialmente por vía aerógena, de las NTM. Además, la resistencia intrínseca de la mayoría de es Identificación a partir de aislamientos obtenidos en cultivos sólidos en base de huevos. Velocidad de crecimiento Rápida (< 7 días) Pigmentado No Pigmentado Fotocromógena / Escotocromógena Catalasa SC Catalasa 68ºC Catalasa SC Catalasa 68ºC / Arilsulfatasa (3 y 14 días) / Crecimiento en ClNa 5% M. smegmatis M. fortuitum M. peregrinum (M. fortuitum se colorea con el verde de malaquita) M. phlei M. vaccae M. chelonae M. chelonae SC: Semicuantitativa

4 REVISTA BIOQUIMICA Y PATOLOGIA CLINICA VOL 71 Nº Trabajo: págs Pág 49 tas micobacterias a los agentes activos contra M. tuberculosis hace imprescindible incorporar otros fármacos al régimen terapéutico adecuado. Debido a estos motivos es que surge la imperiosa necesidad de efectuar una correcta identificación micobacteriana cuando el caso clínico lo requiera. En presencia de un aislamiento clínico de una NTM, se deben considerar las características del mismo y la frecuencia del aislamiento. En los pacientes no infectados por el HIV es necesario aislar la micobacteria por lo menos tres veces en un cultivo abundante y relacionarlo con el estado clínico de la persona para definir la micobacteriosis. En cambio, en los pacientes infectados por el HIV o con alguna otra inmunosupresión severa, un único aislamiento de una NTM aporta un dato relevante para el diagnóstico de una micobacteriosis oportunista como causa de enfermedad. Existen distintos métodos para la identificación de micobacterias: los fenotípicos y los genotípicos. Las pruebas fenotípicas constituyen el principal método para identificar micobacterias en laboratorios clínicos, especialmente en establecimientos de medianos o bajos recursos y complejidad. Los métodos genotípicos son mucho más rápidos, también son más costosos y complejos, quedando solamente disponibles para laboratorios de alta complejidad. Además estos métodos no reemplazan a los fenotípicos, sino que aportan datos complementarios para la correcta identificación micobacteriana. Las micobacterias más frecuentemente aisladas de pacientes atendidos en el Laboratorio de Referencia del Programa de Control de TB del Hospital Dr. Antonio Cetrángolo, resultaron ser M. gordonae en pacientes no infectados con el HIV y M. avium en pacientes infectados con HIV. Sobre la base de estos hallazgos clínicos y a la posibilidad de nuestro laboratorio de realizar las pruebas fenotípicas de identificación, se presenta el siguiente algoritmo destinado a la rápida y correcta aproximación de la identificación de las principales NTM encontradas en la población que concurre a nuestro servicio de salud. El algoritmo esta basado en la observación de las características culturales de las micobacterias y en las pruebas bioquímicas que revelan la presencia de enzimas asociadas a alguna vía metabólica de estos microorganismos. 6, 7 Algunas veces se utiliza la sensibilidad o resistencia a antibióticos como indicación de la especie bacteriana. Cultivos en medio sólido Características culturales: colonias secas, rugosas, no pigmentadas, de crecimiento lento, mayor de 15 días Probable complejo M. tuberculosis Niacina TCH: sensible Pirazinamidasa: negativa M. bovis M. tuberculosis TCH: resistente Pirazinamidasa: positiva

5 Identificación fenotípica de micobacterias Cultivos en medio líquido ZiehlNeelsen Formación de cuerdas Probable complejo M. tuberculosis Probable NTM Niacina TCH: sensible Pirazinamidasa: negativa M. bovis M. tuberculosis TCH: sensible Pirazinamidasa: positiva La observación microscópica es el primer control que se debe realizar de todo cultivo que se quiera identificar. Mediante la coloración de ZiehlNeelsen se puede observar la presencia de microorganismos ácido alcohol resistentes, su morfología y tamaño. Es importante también la observación de las características culturales de las colonias del aislamiento obtenido. Este trabajo fue realizado como producto del curso Clasificación Fenotípica de Micobacterias concretado en el Departamento de Micobacterias, DILABSENASA, Martínez Pcia. de Bs. As.,9 al 11 de octubre de BIBLIOGRAFÍA 1. The WHO/IUATLD Global Project on Antituberculosis Drug Resistance Surveillance: Antituberculosis drug resistance in the world, report number 2 volume. Geneva; Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias Emilio Coni. Tuberculosis Notificación de casos de tuberculosis en Argentina. Situación nacional y por provincias. Año PRO.TB.44/03 3. Pitchenik, A. E., Fertel D. Medical management of AIDS patients: tuberculosis and nontuberculous mycobacterial diseases. Med. Clin. North Am. 1992; 76: Practical Handbook for the phenotypic and genotypic identification of mycobacteria. Cardoso Leao, S., Martin A., Mejía G., et al World Health Organization (WHO). Emerging and another communicable diseases, surveillance and control. 1996; WHO/EMC/ZOO/ Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO, OPS/OMS). Nota técnica número 11 Bacteriología de la tuberculosis. Kantor I Material bibliográfico del curso Clasificación Fenotípica de Micobacterias.DILAB SENASA, 911 de octubre de 2006.

6 REVISTA BIOQUIMICA Y PATOLOGIA CLINICA VOL 71 Nº Trabajo: págs Pág 51 Identificación a partir de aislamientos obtenidos en cultivos sólidos en base de huevos Velocidad de crecimiento Lenta (>7 días, no M. tuberculosis) Pigmentado No Pigmentado Fotocromógena Escotocromógena Catalasa SC Catalasa 68ºC Catalasa SC Catalasa 68ºC Catalasa SC Catalasa 68ºC Reducción de Telurito (3 y 9 días) Reducción de Telurito (3 y 9 días) Red. Telurito (3 y 9 días) Red. Telurito 3 días 9 días Complejo M. aviumintracellulare PRA M. kansasii M. gordonae M. scrofulaceum M. avium M. intracellulare