PROTOCOLO PARA CONOCER LA VIABILIDAD DE PLATYMISCIUM PINNATUM CON FINES DE CONSERVACIÓN Y RESTAURACIÓN ECOLÓGICA

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1 PROTOCOLO PARA CONOCER LA VIABILIDAD DE PLATYMISCIUM PINNATUM CON FINES DE CONSERVACIÓN Y RESTAURACIÓN ECOLÓGICA Árbol fructificando de Platymiscium pinnatum Coordinación Ecoforestal, Pronatura Veracruz José Sabas Espinoza Chávez

2 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA Reino: División: Clase: Orden: Familia: Nombre científico: Nombre común: Plantae Tracheophyta Magnoliopsida Fabales fabaceae Platymiscium pinnatum Chagame CARACTERÍSTICAS ECOLÓGICAS Distribución en México: Por el Golfo se ubica en Hidalgo, Veracruz y Tabasco. En el Pacifico se encuentra en Oaxaca y Chiapas. Ecosistema: Bosques Tropicales. Altitud: msnm Hábitat: Claros y bordes. Árbol de crecimiento lento y recto, alcanza hasta 40 m y un diámetro de 1 m. Corteza color gris oscuro a blanco grisáceo, Historia de vida: fisurada longitudinalmente. Hojas ovadas a elíptico acuminadas de margen entero, ápice acuminado y base obtusa. Flores amarillas y el fruto es una vaina café oscuro con una semilla en forma de riñón. Dispersión: Auto-disperción y por el viento Usos: Medicina, construcción, melífera, artesanal y fijación de nitrógeno. NOM-059- SEMARANT-2010: No listada CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL LOTE RECOLECTADO Fecha de recolecta: 01/junio/2016 Código: BVB010616PLAPINVN01 Cantidad de fruto recolectado: Kilogramos Beneficiado: Se abrió manualmente la vaina y se extrajo la semilla. Como ya estaba seca no necesito deshidratación. Número de semillas por Kg.: 44, 000 Almacenado en: Bolsa al vacío en refrigeración a 3 C Kilogramos almacenados:.3605 Semillas almacenadas: 15, 856 Fecha de almacenado: 29/junio/2016

3 VIABILIDAD La viabilidad representa la cantidad de semillas de un lote capaces de germinar y llegar a un estado de reproductivo en condiciones de campo. El porcentaje de viabilidad permite saber la cantidad de semillas que deben ser sembradas para obtener un número específico de plántulas (De los santos-rodríguez, 2015). Las técnicas más usadas para conocer la viabilidad de las semillas son: 1) flotación en agua por 24 horas; 2) corte examen; 3) tinción con Tetrazolio y 4) germinación. Para realizar estas pruebas se toman muestras del lote, con el método de cuarteo. El tamaño de la muestra depende del tamaño del lote. Obtención de muestras por el método de cuarteo: 1. Extender el lote en una mesa y homogeneizarlo 2. Dividirlo en 4 partes 3. Extraer dos partes contrarias y homogeneizarlas 4. Repetir el cuarteo hasta obtener una muestra representativa. 5. El cálculo del número de semillas a tomar para la prueba de viabilidad se realiza con el programa estadístico en línea Raosoft Inc. Disponible en: 6. En caso de no contar con semillas suficientes, las muestras se reducen a 100 unidades realizando una repetición A) B) C) D) Figura 1. Obtención de muestra de Platymiscium pinnatum por el método de cuarteo, A) homogenización del lote; B) cuarteo del lote; C) extracción y homogenización de dos partes contrarias; D) muestra para pruebas de viabilidad.

4 Pruebas de viabilidad: 1). Flotación Se pone una muestra de 200 semillas en un contenedor con agua por 24 horas, transcurrido el tiempo las semillas vanas flotarán y las viables caerán al fondo del contenedor (De los Santos-Rodríguez, 2015). Figura 2. Prueba de flotación. Procedimiento de la prueba de flotación: 1. Extraer muestra de 200 semillas con una o tres repeticiones. Si son tres repeticiones se realizan tres veces los pasos siguientes. 2. Agregar 500 ml de agua a un contenedor. 3. Agregar la muestra de semillas al contenedor con agua. 4. Dejar remojar por 24 horas. 5. Contar las semillas que floten y anotarlas en el formato del anexo Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente formula: Para el caso de tres repeticiones se suman los resultados obtenidos y se dividen entre tres. Las semillas viables se utilizan en las siguientes pruebas. 2). Corte examen Se corta la semilla de manera longitudinal en dos partes o en más, para observar las condiciones sanitarias de la testa, endospermo y embrión. Se clasifican en semillas sanas, infestadas y vanas (De los Santos-Rodríguez, 2015). Material utilizado para la prueba de corte examen Bisturí Pinzas sencillas

5 Caja Petri Lupa Microscopio estereoscópico trinocular Amscope SM-1TSZ-144-5M Procedimiento de la prueba de corte: 1. Tomar una muestra de 30 semillas de la prueba de flotación. 2. Sujetar con pinzas de laboratorio y cortar longitudinalmente con bisturí las semillas para que las partes internas de la semilla puedan verse bien. 3. Observar las semillas con un microscopio o lupa para poder clasificarlas. 4. Registrar la clasificación en el formato que se muestra en el anexo Contar semillas sanas 6. Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente: Figura 3. Material listo para realizar la prueba de corte. Figura 4. Corte de semilla para observar el estado fitosanitario del embrión. Embrió Testa Figura 5. Observación de los cortes de semillas con lupa. Endosperm Figura 6. Cortes de semilla de Platymiscium pinnatum, la semilla, ésta viable.

6 3). Tinción con Tetrazolio El Cloruro de 2, 3, 5-trifeniltetrazolio es un reactivo químico utilizado para diferenciar tejidos metabólicamente activos de aquellos metabólicamente inactivos de las semillas, mediante la tincion de color rojo en los tejidos vivos de la semilla. Cuadro 4. Material utilizado en la prueba de tetrazolio. Bisturí Pinzas sencillas Vaso de precipitado Cajas Petri Cloruro de Tetrazolio Frasco color ámbar con tapa Microscopio estereoscópico trinocular (Amscope SM- 1TSZ-144-5M). Papel aluminio Procedimiento de la prueba de tinción con tetrazolio: 1. Se prepara la solución química de Cloruro de Tetrazolio al 0.3, 0.5 y 1 % Pesar 3, 5 o 10 gramos, de cloruro de 2, 3, 5 trifenil-tetrazolio en un vaso de precipitado. La cantidad depende de la concentración con que se va a preparar Añadir 1 L de agua destilada y disolver Colocar la solución en frasco ámbar, etiquetarlo, sellarlo, envolver con papel aluminio y volver a etiquetar Guardar en refrigeración a 3-5 C y evitar contacto con la luz. 2. Tomar una muestra de 30 semillas de la prueba de flotación. 3. Hacer los cortes a modo de que el embrión quede expuesto. 4. Colocar la mitad de cada semilla de la muestra en cajas Petri. 5. Agregar la solución de Cloruro de Tetrazolio a la muestra de semillas con el embrión expuesto

7 6. Dejar las semillas en la solución por 24 horas a 24 C en un lugar oscuro o envolver la caja Petri con papel aluminio. 7. Transcurrido el tiempo, enjuagarlas con agua y colocarlas en cajas Petri 8. Observar la tinción de cada semilla en microscopio 9. Contabilizar las semillas teñidas de acuerdo al formato del anexo Calcular el porcentaje de viabilidad aplicando la siguiente formula: Figura 7. Izquierda: 2, 3,5 trifenil-tetrazolio; Centro: equipo para preparar la solución; Derecha: frasco con la solución. Figura 8. Tinción de semillas viables de Platymiscium pinnatum.

8 4). Germinación Es la manera más confiable de evaluar la viabilidad de las semillas. Consiste en poner a germinar semillas sobre un contenedor con sustrato esterilizado (arena, tierra de monte o papel filtro). Las semillas que germinan se cuentan como viables (De los Santos Rodríguez, 2015). Procedimiento de la prueba de germinación: 1. Esterilizar el contenedor del sustrato (cajas Petri, charola de unicel o plástico). 2. Agregar sustrato (arena, papel filtro, composta, agar) al contenedor. 3. Tomar una muestra de 100 semillas de la prueba de flotación. 4. Sembrar las semillas 5. El rango de temperatura es de 23 a 26 C y de 73 a 76 % de humedad. 6. Monitorear la germinación cada tercer día y anotar las observaciones en el formato del anexo Calcular el porcentaje de Viabilidad con la siguiente formula: Figura 9. Izquierda: remojo en agua por 24 horas; Centro e izquierda: germinación de semillas de Platymiscium pinnatum.

9 RESULTADOS La viabilidad promedio de Platymiscium pinnatum fue de 94 % (cuadro 5). Para la prueba de germinación es preferible usar arena como sustrato para un mejor desarrollo de la plántula. La temperatura promedio fue de 25 C y la humedad promedio fue de 74 %. La germinación comienza 5 días después de la siembra y dura semana y media para alcanzar el máximo porcentaje. Resultados de las pruebas de viabilidad. PRUEBA RESULTADO (%) Flotación: 100 Corte examen: 90 Test de tetrazolio: 86 Germinación: 100 Viabilidad promedio: 94 REFERENCIAS De los Santos Rodríguez, Clara I. (2015). Propuesta metodológica para el manejo de germoplasma de Carpinus carolinianus con fines de conservación y restauración ecológica. Reporte Técnico. Pronatura Veracruz A.C. Galindo Gamundi, Ana C. (2016). Procedimiento de pruebas de viabilidad de semillas en la reserva comunitaria de semillas de biodiversidad del golfo de México. Reporte técnico. Pronatura Veracruz A.C. Árboles de cetroamerica. CATIE. Recuperado el 10/agosto/2016 en:

10 Anexo 1. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de corte examen y flotación. Especie: Código: Repetición: N: Fecha: Tiempo: Responsable: Proyecto: Número de semillas flotantes: Número de semillas viables: N Testa sana Endospermo sano Embrión sano Semilla viable Total de semillas viables *la semillas es viable cuando tiene sus tres componentes sanos.

11 Anexo 2. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de Tetrazolio Especie: Código: Repetición: N: Fecha: Temperatura: Responsable: Proyecto: N Patrón de tinción (1, 2 o 3) Semilla viable (si/no) Total de semillas viables: 1= semillas totalmente teñida que son viables. 2= semillas sin tinción que no son viables. 3= semillas parcialmente teñidas que producirán plantas normales o anormales.

12 Anexo 3. Formato para evaluación de viabilidad por germinación. Especie: Código: Repetición: N: Tratamiento pre-germinativo: Sustrato: Fecha : Tiempo: Responsable: Proyecto: N Germinaron Sin germinar sanas infestadas Sanas infestadas Semillas viables Total de semillas viables