PROTOCOLO PARA CONOCER LA VIABILIDAD DE OREOMUNNEA MEXICANA CON FINES DE CONSERVACIÓN Y RESTAURACIÓN ECOLÓGICA

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1 PROTOCOLO PARA CONOCER LA VIABILIDAD DE OREOMUNNEA MEXICANA CON FINES DE CONSERVACIÓN Y RESTAURACIÓN ECOLÓGICA Fuste de Oreomunnea mexicana Coordinación Ecoforestal, Pronatura Veracruz Yusef Elip Chamlaty Fayad José Sabas Espinoza Chávez

2 CARACTERÍSTICAS ECOLÓGICAS Distribución en En las regiones montañosas de Veracruz, Oaxaca y Chiapas. México: Ecosistema: CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA Reino: División: Clase: Orden: Familia: Nombre científico: Nombre común: Plantae Magnoliophyta Magnoliopsida Fagales Junglandaceae Bosque mesófilo de montaña Oreomunnea mexicana Palo Zopilote Altitud: msnm Hábitat: Cañadas Árbol perennifolio de hasta de 40 m de altura y diámetro hasta de 105 cm; monoico, rectos y con la copa redondeada, Historia de vida: alargada y densa. Hojas paripinnadas y opuestas, hasta de 25 cm; frutos globosos a ovoides de 8 a 11 mm de largo por 6 a 8 mm de diámetro, rodeadas por una bráctea trilobada, coriácea y amarillenta de 2.4 a 5.7 cm de largo. Dispersión: Viento Viabilidad natural: No disponible Usos: Maderable, restauración ecológica. NOM-059- SEMARANT-2010: Protección especial (Pr) CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL LOTE RECOLECTADO Fecha de recolecta: Código: VQH010216OREMEXVN01 Cantidad de fruto recolectado: 1.5 Kilogramos Beneficiado: Secado el fruto se remuele con la mano y se tamiza para obtener semilla limpia. Número de semillas por Kg.: 930 Almacenado en: Bolsa al vacío en refrigeración a 3 C Kilogramos almacenados:.58 Semillas almacenadas: 2, 554 Almacenado:

3 VIABILIDAD La viabilidad representa la cantidad de semillas de un lote capaces de germinar y llegar a un estado de reproductivo en condiciones de campo. El porcentaje de viabilidad permite saber la cantidad de semillas que deben ser sembradas para obtener un número específico de plántulas (De los santos-rodríguez, 2015). Las técnicas más usadas para conocer la viabilidad de las semillas son: 1) flotación en agua por 24 horas; 2) corte examen; 3) tinción con Tetrazolio y 4) germinación. Para realizar estas pruebas se toman muestras del lote, con el método de cuarteo. El tamaño de la muestra depende del tamaño del lote. Obtención de muestras por el método de cuarteo: 1. Extender el lote en una mesa y homogeneizarlo 2. Dividirlo en 4 partes 3. Extraer dos partes contrarias y homogeneizarlas 4. Repetir el cuarteo hasta obtener una muestra representativa. 5. El cálculo del número de semillas a tomar para la prueba de viabilidad se realiza con el programa estadístico en línea Raosoft Inc. Disponible en: 6. En caso de no contar con semillas disponibles, las muestras se reducen a 100 unidades realizando una repetición. A) B) C) Figura 1. Obtención de muestras por el método de cuarteo. A) homogenización del lote; B) cuarteo del lote; C) muestra de Oreomunnea mexicana para pruebas de viabilidad.. Pruebas de viabilidad: 1). Flotación Se pone una muestra del total de semillas en un contenedor con agua por 24 horas, transcurrido el tiempo las semillas vanas flotarán y las viables caerán al fondo del contenedor (De los Santos-Rodríguez).

4 Figura 2. Prueba de flotación. Procedimiento: 1. Extraer muestra de 200 semillas con una o tres repeticiones. Si son tres repeticiones se realizan tres veces los pasos siguientes. 2. Agregar 500 ml de agua a un contenedor. 3. Agregar la muestra de semillas al contenedor con agua. 4. Dejar remojar por 24 horas. 5. Contar las semillas que floten y anotarlas en el formato del anexo Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente formula: Para el caso de tres repeticiones se suman los resultados obtenidos y se dividen entre tres. Las semillas viables se utilizan en las siguientes pruebas. 2). Corte examen Se corta la semilla por la mitad o en más partes para observar las condiciones sanitarias de la testa, endospermo y embrión. Se clasifican en semillas sanas, infestadas y vanas (De los Santos-Rodríguez, 2015). Material para realizar la prueba de viabilidad por corte examen. Bisturí Pinzas sencillas Caja Petri Lupa

5 Microscopio estereoscópico trinocular Amscope SM-1TSZ-144-5M Procedimiento: 1. Tomar las semillas de la prueba de flotación y colocarlas en cajas Petri. 2. Sujetar con pinzas de laboratorio y cortar longitudinalmente con bisturí las semillas para que las partes internas de la semilla puedan verse bien. 3. Observar las semillas con un microscopio o lupa para poder clasificarlas. 4. Registrar la clasificación en el formato que se muestra en el anexo Contar semillas sanas 6. Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente: Figura 3. Material listo para realizar la prueba de corte. Figura 4. Corte de semilla para observar el estado fitosanitario del embrión. Embrión Testa s Figura 5. Observación de los cortes de semillas en microscopio. Endospermo Figura 6. Cortes de semilla de Oreomunnea mexicana, la semilla ésta viable. 3). Tinción con Tetrazolio El Cloruro de 2, 3, 5-trifeniltetrazolio es un reactivo químico utilizado para diferenciar tejidos metabólicamente activos de aquellos metabólicamente inactivos de las semillas, mediante la tinción de color rojo en los tejidos vivos de la semilla.

6 Material para realizar la prueba de Tetrazolio. Bisturí Pinzas sencillas Vaso de precipitado Cajas Petri Cloruro de Tetrazolio Frasco color ámbar con tapa Microscopio estereoscópico trinocular. Amscope SM-1TSZ-144-5M Papel aluminio Procedimiento: 1. Se prepara el compuesto: Cloruro de Tetrazolio al 0.3, 0.5 o 1 % Pesar 3, 5 o 10 gramo de cloruro de 2, 3, 5 trifenil-tetrazolio en un vaso de precipitado. La cantidad depende de la concentración con que se va a preparar Añadir 1 L de agua destilada y disolver Colocar la solución en frasco ámbar, etiquetarlo, sellarlo, envolver con papel aluminio y volver a etiquetar 1.4. Guardar en refrigeración de 3 a 5 C y evitar contacto con la luz. 2. Tomar una muestra de 30 semillas de la prueba de flotación. 3. Hacer los cortes a modo de que el embrión quede expuesto. 4. Colocar la mitad de cada semilla de la muestra en cajas Petri. 5. Agregar la solución de Cloruro de Tetrazolio a la muestra de semillas con el embrión expuesto 6. Dejar las semillas en la solución por 24 horas a 24 c en un lugar oscuro o envolver la caja Petri con papel aluminio. 7. Transcurrido el tiempo, enjuagarlas con agua y colocarlas en cajas Petri 8. Observar la tinción de cada semilla en microscopio 9. Contabilizar las semillas teñidas y anotarlas en el formato del anexo Calcular el porcentaje de viabilidad aplicando la siguiente formula:

7 Figura 7. Izquierda: 2,3,5 trifenil-tetrazolio; Centro: equipo para preparar la solución; Derecha: frasco con la solución. 4). Germinación Es la manera más confiable de evaluar la viabilidad de las semillas. Consiste en poner a germinar semillas sobre un contenedor con sustrato esterilizado (arena, tierra de monte, papel filtro o agar). Las semillas que germinan se cuentan como viables (De los Santos Rodríguez, 2015). Procedimiento de la prueba de germinación: 1. Esterilizar el contenedor del sustrato (cajas Petri, charola de unicel o plástico). 2. Agregar sustrato (arena, papel filtro, composta o agar) al contenedor. 3. Tomar una muestra de 100 semillas de la prueba de flotación. 4. Sembrar las semillas 5. El rango de temperatura es de 23 a 26 C y de 73 a 76 % de humedad. 6. Monitorear la germinación cada tercer día y anotar las observaciones en el formato del anexo Calcular el porcentaje de Viabilidad con la siguiente formula: Figura 9. Izquierda: semillas hidratadas de Oreomunnea mexicana; Derecha: siembra

8 Figura 10. Izquierda: emergencia de cotiledón; Centro: proceso de germinación; Derecha: plántula de Oreomunnea mexicana. RESULTADOS El porcentaje de viabilidad promedio del lote de Oreomunnea mexicana es de 73.5 % (cuadro 5). Lo que representa una viabilidad baja que debemos tener en cuenta al momento de recolectar semilla de esta especie para garantizar el cumplimiento de nuestra meta de producción o almacenamiento. Resultados de las pruebas de viabilidad PRUEBA Viabilidad (%) Flotación: 90 Corte examen: 80 Tinción de tetrazolio: 54 Germinación: 70 Viabilidad promedio: 73.5 REFERENCIAS De los Santos Rodríguez, Clara I. (2015). Propuesta metodológica para el manejo de germoplasma. Reporte Técnico Interno. Pronatura Veracruz A.C. Galindo Gamundi, Ana C. (2016). Procedimiento de pruebas de viabilidad de semillas en la reserva comunitaria de semillas de biodiversidad del golfo de México. Reporte técnico. Pronatura Veracruz A.C. Chamlaty Fayad, Yusef E. (2016). Propuesta metodológica para el manejo de germoplasma de Oreomunnea mexicana con fines de conservación y restauración ecológica. Reporte Técnico Interno. Pronatura Veracruz A.C.

9 Anexo 1. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de corte examen y flotación Especie: Código: Repetición: N: Fecha: Tiempo: Responsable: Proyecto: Número de semillas flotantes: Número de semillas viables: N Testa sana Endospermo sano Embrión sano Semilla viable Total de semillas viables *la semillas es viable cuando tiene sus tres componentes sanos.

10 Anexo 2. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de Tetrazolio Especie: Código: Repetición: N: Fecha: Temperatura: Responsable: Proyecto: N Patrón de tinción (1, 2 o 3) Semilla viable (si/no) Total de semillas viables: 1= semillas totalmente teñida que son viables. 2= semillas sin tinción que no son viables. 3= semillas parcialmente teñidas que producirán plantas normales o anormales.

11 Anexo 3. Formato para evaluación de viabilidad por germinación. Especie: Código: Repetición: N: Tratamiento pre-germinativo: Sustrato: Fecha : Tiempo: Responsable: Proyecto: N Germinaron Sin germinar sanas infestadas Sanas infestadas Semillas viables Total de semillas viables