Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio. Tabla de Contenidos

Transcripción

1 INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE VIABILIDAD DE SEMILLAS CON EL TEST BIOQUÍMICO DEL TETRAZOLIO Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS Listado de identificación de analistas vinculados al análisis...7 Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 1 de 7

2 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de Resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, versión vigente ISTA Handbook on Tetrazolium Testing, versión vigente 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ISTA Viabilidad Semilla viable Semilla no viable Abreviatura de International Seed Testing Association. Capacidad inherente de una semilla para germinar y producir una plántula normal. Capacidad potencial de un lote de semillas para germinar. Semilla que tiene capacidad de producir una plántula normal. Semilla que tiene deficiencias y/o otras alteraciones de tal naturaleza como para impedir su desarrollo en una plántula normal. 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos. i) Infraestructura: Deben existir áreas separadas para actividades incompatibles y de un tamaño adecuado al personal que trabaja en los análisis y a la carga de trabajo. El Laboratorio debe tener un área limpia y seca, lo suficientemente amplia para la necesidad de los análisis que corresponden; sin exposición a corrientes de aire, con buena iluminación (del orden de 1000 lux), debe poseer mesón de trabajo, con cubierta resistente y fácil de limpiar. Deben haber instalaciones protegidas de condiciones excesivas de temperatura, vapor, vibraciones, interferencias, etc. que puedan afectar adversamente los resultados. Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 2 de 7

3 Deben tener fuentes de energía necesaria para los análisis. Deben existir instalaciones para almacenar las muestras hasta un año después del análisis y en condiciones de temperatura, humedad y limpieza, que permitan la integridad de las muestras. ii) Equipos, materiales y reactivos: El Laboratorio debe contar con equipamiento, materiales y reactivos acorde al tipo de especie para la(s) cual(es) se declara competencia; para ello debe considerar lo que se indica a continuación (pudiendo agregar o reducir elementos): Equipos Lámpara lupa Calculadora de sobremesa Cámara de frío de hasta 10ºC Estufa de esterilización o secado con regulación de temperatura entre 20-40ºC Lupa estereoscópica de 45 a 60x Materiales y reactivos Pinzas Bisturíes Agujas de disección Contenedores Vidrios de reloj Bandejas Respiradores con filtro y/o mascarillas para polvos tóxicos Guantes de procedimiento Substrato papel filtro liso Agua destilada Reactivo: 2,3,5-Trifenil Tetrazolio Cloruro o Bromuro1 4.2 Requisitos de personal i) Según lo dispuesto en el numeral 4.2 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, el Laboratorio debe contar con un responsable técnico, quien será la contraparte del SAG, en temas técnicos asociados a su actividad como laboratorio acreditado, y deberá cumplir con el perfil establecido en dicho Reglamento. ii) Contar con analistas que deben cumplir el siguiente perfil: Poseer título técnico de una carrera relacionada con el área biológica o científica, o en su defecto, contar con experiencia demostrable en el análisis al cual el Laboratorio postula la acreditación, de al menos dos (2) años. Sus funciones serán realizar los Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 3 de 7

4 análisis de acuerdo a las reglas de la ISTA y mantener los equipos funcionando bien y calibrados, cuando corresponda. Estar capacitados y entrenados en el análisis. Tener conocimientos de morfología de semillas. 4.3 Requisitos Específicos. No aplica. 4.4 Medios de verificación de requisitos. De acuerdo a lo dispuesto en el Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, los interesados en acreditarse deben presentar junto a su solicitud de acreditación, lo siguiente: i) El formulario anexo para análisis en semillas corrientes, debidamente llenado y firmado por el postulante o su representante legal si se trata de personas jurídicas, el cual se encuentra disponible en el sitio Web del SAG, ii) Los antecedentes generales del laboratorio que se establecen en el numeral 6.1 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos. iii) Listado de identificación de los analistas, indicando nombre completo, número de cédula de identidad y firma, según formato establecido en el numeral 7.1 de este Instructivo. iv) Certificado de título (en original o fotocopia legalizada), o en su defecto, documento(s) que demuestre(n) la experiencia de los analistas en el análisis al cual el Laboratorio postula la acreditación. v) Documentos que demuestren la capacitación de los analistas. vi) Croquis del área destinada a análisis de vigor con la ubicación de sus equipos. vii) Lista de equipos destinados al análisis de viabilidad, incluyendo su plan de mantención y calibración. Sin perjuicio de lo anterior, el cumplimiento de los requisitos descritos tanto en el Reglamento Específico de Acreditación como en este Instructivo, serán confirmados por el Servicio en la visita de verificación o por los medios que considere idóneos para tal efecto. En este contexto, y dado que la práctica continua de este análisis es muy importante en la obtención de la experiencia y conocimiento, el SAG podrá comprobar que los requisitos de los analistas se cumplan a través de una evaluación teórica y/o práctica por especie. Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 4 de 7

5 5 ANÁLISIS/ENSAYO 5.1 Captación y envío de la muestra. El muestreo debe ser realizado de acuerdo a lo indicado Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, versión vigente). 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La recepción y manipulación de la muestra debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (versión vigente). Es recomendable que las muestras sean recepcionadas en el laboratorio acreditado dentro de las 72 horas desde su toma. Las muestras deben recibir antes, durante y después de su análisis un manejo tal que permita mantener su integridad y su identificación. Las muestras deben almacenarse por el período de un año después de su análisis, en condiciones adecuadas para mantenerlas en buenas condiciones. Con el objeto de mantener la confiabilidad y objetividad en los análisis, las muestras deben ser identificadas con un número o código único dado por el Laboratorio al momento de su recepción e ingreso y sólo después ingresar al laboratorio para su análisis correspondiente con esa identificación. 5.3 Metodología. El análisis debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 6 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente) y el Manual de Ensayos al Tetrazolio(ISTA Handbook on Tetrazolium Testing) y debe considerar los siguientes aspectos: Preparación de la muestra de trabajo a partir de la fracción de la semilla pura, tomando al azar 4 réplicas de 100 semillas. Preparación de la muestra de semillas antes de la tinción, dándoles distintas condiciones según la especie, de acuerdo con la Tabla 6A de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de ISTA. Exposición de los tejidos antes de la tinción, según Tabla 6A de las Reglas ISTA. Tinción por períodos de tiempo diferente según la especie e indicados en la Tabla 6A de las Reglas ISTA. Evaluación de las semillas como viables o no viables. 5.4 Cálculo y Expresión de Resultados Debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 6 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente). Se expresa como porcentaje promedio de las 4 réplicas y aproximado al número entero más cercano. Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 5 de 7

6 En la ficha de análisis respectiva de cada muestra se debe anotar la siguiente información: Tipo de pretratamiento usado Fecha y hora de inicio y término del pretratamiento Fecha y hora de inicio y término de tinción Número de semillas analizadas Temperaturas utilizadas Fecha de evaluación Iniciales de la analista Cálculo de promedio y tolerancia Concentración de la solución de tetrazolio usada 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS El Laboratorio deberá establecer un formato de Informe de Resultados que debe ser visado o aprobado por el Servicio de manera previa a su puesta en uso. El formato del Informe de Análisis debe elaborarse de manera tal que incluya todas las observaciones y reglas especificadas para cada análisis en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA y debe contener la siguiente información general: - Remitente - Especie y Variedad - Categoría de la muestra - Identificación del lote - Peso del lote (opcional) - Número de envases (opcional) - Tipo de envase (opcional) - Fecha ingreso de la muestra al Laboratorio - Fecha de término del análisis - Identificación de la muestra otorgado en el Laboratorio al momento de su ingreso - Resultado del o de los análisis o % de semillas fueron viables. o En el caso de las Leguminosas se debe agregar % de semillas duras encontradas en el análisis, o, % de semillas duras incluidas en el % reportado de semillas viables - Observaciones del análisis, como las condiciones en que se realizó y otras. Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 6 de 7

7 - Fecha del Informe - Firma del Responsable Técnico del Laboratorio. El traspaso de los datos al Certificado o Informe de Análisis correspondiente debe ser supervisado por el Responsable Técnico del Laboratorio. El Laboratorio Acreditado deberá cada tres meses enviar un listado de los Informes de Análisis emitidos al Laboratorio Oficial de Análisis de Semillas de Lo Aguirre, indicando el número del certificado emitido, la fecha de emisión, el remitente y la especie. EL Laboratorio Acreditado debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor. 7 ANEXOS 7.1 Listado de identificación de analistas vinculados al análisis Nombre Completo Nº Cédula de Identidad Firma Firma del Postulante o su Representante Legal Código: IT-LAB-10-v03 Pág. 7 de 7