Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas. Tabla de Contenidos

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1 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE GERMINACIÓN EN SEMILLAS Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS...7 Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 1 de 7

2 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de germinación en semillas, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de Resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de germinación en semillas, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, ISTA, versión vigente. ISTA Handbook on Seedling Evaluation, versión vigente 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS Germinación ISTA Plántulas Normales Plántulas Anormales Semillas Latentes o Frescas Semillas Duras Como propósito para los análisis, corresponde a la emergencia y desarrollo de la plántula, período en el cual el aspecto y desarrollo de estructuras esenciales, indican si es o no posible que se desarrolle en el futuro en una planta satisfactoria, bajo condiciones favorables en el suelo. Abreviatura de International Seed Testing Association. Son aquellas que al final del período de análisis presentan el potencial para continuar desarrollándose en plantas satisfactorias, cuando crecen en suelos de buena calidad y bajo condiciones favorables de humedad, temperatura y luz. Son aquellas que no muestran potencial de desarrollo como plantas satisfactorias cuando crecen en suelos de buena calidad y bajo condiciones favorables de humedad, temperatura y luz. Semillas que no germinaron durante el análisis, pero que se mantienen firmes y tienen potencial de desarrollarse en plantas normales. Semillas que al final del período del análisis permanecen duras porque no absorbieron agua. Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 2 de 7

3 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas Semillas Muertas Semillas que al final del período de análisis no son ni duras ni frescas y que no han desarrollado ninguna parte de una plántula. 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos. i) Infraestructura: Deben existir áreas separadas para actividades incompatibles y de un tamaño adecuado al personal que trabaja en los análisis y a la carga de trabajo. El Laboratorio debe tener un área limpia y seca, lo suficientemente amplia para la necesidad de los análisis que corresponden; sin exposición a corrientes de aire, con buena iluminación (del orden de 1000 lux), debe poseer mesón de trabajo, con cubierta resistente y fácil de limpiar. Debe haber instalaciones protegidas de condiciones excesivas de temperatura, vapor, vibraciones, interferencias, etc. que puedan afectar adversamente los resultados. Deben tener fuentes de energía necesaria para los análisis. Deben existir instalaciones para almacenar las muestras hasta un año después del análisis y en condiciones de temperatura, humedad y limpieza, que permitan la integridad de las muestras. ii) Equipos: Deben contar con equipamiento, materiales e instrumental acorde al tipo de especies para las cuales se declara competencia, para lo cual considerar los que se indican a continuación (pudiendo agregar o reducir algunos elementos) Balanza de precisión Lámpara lupa Calculadora de sobremesa Cabinas o salas de germinación con temperaturas estables y controladas, que permitan obtener a nivel de substrato temperaturas de 15ºC, 20ºC, 25ºC o alterna de 20-30ºC, según la o las especies que acredite Cámaras o salas de frío Estufa de esterilización o secado Sembrador al vacío Contador de granos Tablas sembradoras iii) Materiales: Pinzas Bisturíes Agujas de disección Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 3 de 7

4 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas Contenedores Vidrios de reloj Bandejas de aluminio Respiradores con filtro y/o mascarillas para polvos tóxicos Guantes de procedimiento Substratos para la siembra: papel filtro liso especial para germinación, papel filtro plisado especial para germinación y arena Tipo de agua para regar el substrato: agua destilada para papel filtro liso y plisado y agua corriente para la arena Reactivos para ruptura de latencia: Nitrato de Potasio y Ácido Giberélico (AG3) Contenedores para sembrar: bandejas de plástico grande con tapa y bandeja de plástico chica con tapa. 4.2 Requisitos de personal i) Según lo dispuesto en el numeral 4.2 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis / ensayo, el Laboratorio debe contar con un responsable técnico, quien será la contraparte del SAG, en temas técnicos asociados a su actividad como laboratorio acreditado. ii) Contar con analistas que deben cumplir el siguiente perfil: Poseer un título técnico relacionado con el área biológica o científica y sus funciones serán realizar los análisis de acuerdo a las reglas de la ISTA y mantener los equipos funcionando bien y calibrados, cuando corresponda. Estar capacitados y entrenados en análisis de germinación de semillas. Tener formación en Fisiología y Morfología de semillas. Tener experiencia demostrable en este análisis de al menos un año. Tener capacitación en sistemas de aseguramiento de calidad. 4.3 Requisitos Específicos. No aplica 4.4 Medios de verificación de requisitos. De acuerdo al punto 6.1 del Reglamento específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, los interesados en acreditarse para este análisis deben presentar junto a su solicitud de acreditación lo siguiente: i) Un dossier con los antecedentes generales del laboratorio que se solicitan en dicho reglamento ii) Un dossier para verificar el cumplimiento de los requisitos establecidos en los puntos 4.1 a 4.3 de este Instructivo técnico, para lo cual debe adjuntar. Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 4 de 7

5 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas - Listado de identificación de los analistas, indicando nombre completo, número de cédula de identidad y firma. - Título (copia legalizada) y Currículum vitae de los analistas, indicando la experiencia en el cargo demostrable. - Certificado de capacitación de los analistas en la técnica de germinación de semillas. - Croquis del área destinada a análisis de germinación de semillas, con la ubicación de sus equipos - Lista de equipos e instrumental destinados al análisis de germinación de semillas, incluyendo su plan de mantención y calibración. - Registro de control de las condiciones de temperatura para las cámaras de germinación y de frío. 5 ANÁLISIS/ENSAYO 5.1 Captación y envío de la muestra. La toma de muestra debe ser representativa del lote al que pertenecen, por lo tanto la metodología de muestreo a seguir, está referenciada en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA. En estas mismas reglas está establecido el peso mínimo que debe tener la muestra que se recibe en el Laboratorio según el análisis que se solicita y según la especie que se trate y las condiciones para su envío al Laboratorio. 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La recepción y manipulación de la muestra debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA (versión vigente). Las muestras deben ser recepcionadas en el Laboratorio hasta dentro de las 72 horas desde su toma, antes en lo posible. Las muestras deben recibir antes, durante y después de su análisis un manejo tal que permita mantener su integridad y su identificación. Las muestras deben almacenarse por el período de un año después de su análisis, en condiciones adecuadas para mantenerlas en buenas condiciones. Con el objeto de mantener la confiabilidad y objetividad en los análisis, las muestras deben ser identificadas con un número o código único dado por el Laboratorio al momento de su recepción e ingreso y sólo después ingresar al laboratorio para su análisis correspondiente, sólo manteniendo esta identificación. Las muestras para el análisis de germinación deben obtenerse a partir de la fracción de semilla pura del análisis de Pureza o bien de la separación de semilla pura desde la muestra de envío recibida. 5.3 Metodología. El análisis debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 5 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA (versión vigente) y en el Manual de Evaluación de Plantas de la ISTA (versión vigente). Debe incluir los siguientes procesos: Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 5 de 7

6 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas Obtención de la muestra de trabajo (400 semillas de la fracción de semilla pura). Determinación del método y sustrato a usar, según la especie y de acuerdo a la Tabla 5A de las Reglas Internacionales de Análisis de ISTA. Evaluación de la Germinación según Capítulo 5 de las Reglas Internacionales de Análisis de ISTA y el Manual de Evaluación de Plántulas de ISTA. Anotación de los resultados de las 4 réplicas, considerando las Tablas de Tolerancias respectivas del Capítulo 16 de las Reglas ISTA Cálculo y Expresión de Resultados Debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 5 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA (versión vigente). Procesos a seguir : - Cálculo del porcentaje de : plántulas normales plántulas anormales semillas latentes semillas duras semillas muertas - Redondeo de cifras - Revisión de los resultados frente a las Tablas de Tolerancias respectivas. 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS El Laboratorio deberá establecer un formato de Informe de Resultados que debe ser visado o aprobado por el Servicio de manera previa a su puesta en uso. El formato del Informe de Análisis debe elaborarse de manera tal que incluya todas las observaciones y reglas especificadas para cada análisis en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA y como mínimo debe contener la siguiente información general: - Remitente - Especie y Variedad - Categoría de la muestra - Identificación del Lote - Peso del lote (opcional) - Número de envases (opcional) - Tipo de envase (opcional) - Fecha ingreso de la muestra al Laboratorio - Fecha de término del análisis - Identificación de la muestra otorgado en el Laboratorio al momento de su ingreso Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 6 de 7

7 Instructivo técnico para el análisis de germinación en semillas - Resultado del o de los análisis o % Plántulas Normales o % Plántulas Anormales o % Semillas Latentes o % Semillas Duras o % Semillas Muertas o % Germinación Total o % Mínimo Legal aceptado para la especie en análisis. - Observaciones del análisis, como las condiciones en que se realizó y otras. - Fecha del Informe - Firma del Responsable del Laboratorio. El traspaso de los datos al Certificado o Informe de Análisis correspondiente debe ser supervisado por el Responsable del laboratorio. El Laboratorio deberá cada tres meses enviar un listado de los Informes de Análisis emitidos al Laboratorio Oficial de Análisis de Semillas de Lo Aguirre, indicando el número del certificado emitido, la fecha de emisión, el remitente y la especie. EL Laboratorio debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor 7 ANEXOS No aplica. Código: IT-LAB-13-v01 Pág. 7 de 7

8 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE DETERMINACIÓN DE OTRAS ESPECIES EN SEMILLAS Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS...7 Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 1 de 7

9 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de determinación de otras especies en semillas, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de determinación de otras especies en semillas, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, ISTA (versión vigente). Manual de Definición de Semilla Pura de ISTA, versión vigente. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ISTA Análisis Completo Análisis Limitado Análisis Reducido Análisis reducidolimitado Otras Semillas Semillas de Malezas Semillas de otras especies cultivadas Abreviatura de International Seed Testing Association. Es aquel en que se analiza toda la muestra de trabajo para determinar si existen semillas de otras especies presentes. Es aquel en el cual la búsqueda de otras especies en la muestra de trabajo completa está restringida a ciertas especies establecidas con anticipación. Es aquel en el cuál sólo se revisa una parte de la muestra de trabajo. Es aquel en el que se revisa una parte de la muestra de trabajo y sólo se buscan ciertas especies establecidas. Corresponde a las semillas de cualquier especie distinta a la semilla pura Cualquier semilla de género o especie que no sea cultivada con fines agrícola y/o forestal, ornamental o medicinal. Cualquier semilla de género o especie, que no corresponda a la semilla pura, ni a semilla de maleza y que es cultivada con fines agrícolas, forestales, ornamentales o medicinales. Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 2 de 7

10 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos. i) Infraestructura: Deben existir áreas separadas para actividades incompatibles y de un tamaño adecuado al personal que trabaja en los análisis y a la carga de trabajo. El Laboratorio debe tener un área limpia y seca, lo suficientemente amplia para la necesidad de los análisis que corresponden; sin exposición a corrientes de aire, con buena iluminación (del orden de 1000 lux), debe poseer mesón de trabajo, con cubierta resistente y fácil de limpiar. Deben haber instalaciones protegidas de condiciones excesivas de temperatura, vapor, vibraciones, interferencias, etc. que puedan afectar adversamente los resultados. Deben tener fuentes de energía necesaria para los análisis. Además, debe poseer mesa de trabajo para análisis de pureza y determinación de otras especies. Deben existir instalaciones para almacenar las muestras hasta un año después del análisis y en condiciones de temperatura, humedad y limpieza, que permitan la integridad de las muestras. ii) Equipos: Deben contar con equipamiento, materiales e instrumentales acorde al tipo de especie para las cuales se declara competencia, para lo cual considerar lo que se indica a continuación (pudiendo agregar o reducir elementos) Balanza de precisión (cuando el número de decimales a considerar en el pesaje de la muestra sea igual o inferior a 2 decimales) Balanza analítica (cuando el número de decimales a considerar en el pesaje de la muestra sea igual o superior a 3 decimales) Lupa estereoscópica de a lo menos 45x Divisor de semillas Lámpara lupa Diafanoscopio Calculadora de sobremesa iii) Materiales: Pinzas Bisturíes Agujas de disección Lupa manual Contenedores Vidrios de reloj Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 3 de 7

11 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas Bandejas de aluminio Respiradores con filtro y/o mascarillas para polvos tóxicos Guantes de procedimiento Pinceles 4.2 Requisitos de personal i) Según lo dispuesto en el numeral 4.2 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis / ensayo, el Laboratorio debe contar con un responsable técnico, quien será la contraparte del SAG, en temas técnicos asociados a su actividad como laboratorio acreditado ii) Contar con analistas que deben cumplir el siguiente perfil: Poseer un título técnico relacionada con el área biológica o científica y sus funciones serán realizar los análisis de acuerdo a las reglas de la ISTA y mantener los equipos funcionando bien y calibrados, cuando corresponda. Estar capacitados y entrenados formalmente en morfología y taxonomía de malezas. Contar con experiencia previa demostrable de al menos un año. Tener capacitación en sistemas de aseguramiento de calidad. 4.3 Requisitos Específicos. Deben contar para esto con material bibliográfico especializado y una colección de semillas de referencia. 4.4 Medios de verificación de requisitos. De acuerdo al punto 6.1 del Reglamento específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, los interesados en acreditarse para este análisis deben presentar junto a su solicitud de acreditación lo siguiente: i) Un dossier con los antecedentes generales del laboratorio que se solicitan en dicho reglamento ii) Un dossier para verificar el cumplimiento de los requisitos establecidos en los puntos 4.1 a 4.3 de este Instructivo técnico, para lo cual debe adjuntar. Listado de identificación de los analistas, indicando nombre completo, número de cédula de identidad y firma. Título (copia legalizada) y Currículum vitae de los analistas, indicando la experiencia en el cargo demostrable. Certificado de capacitación de los analistas de acuerdo al requisito establecido en el capítulo 4.2 de este instructivo. Croquis del laboratorio, identificando área destinada a análisis de pureza, con la ubicación de sus equipos Lista de equipos e instrumental destinados al análisis de vigor en frío para maíz, incluyendo su plan de mantención y calibración. Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 4 de 7

12 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas 5 ANÁLISIS/ENSAYO 5.1 Captación y envío de la muestra. La muestra, debe ser representativa del lote al que pertenecen, por lo tanto la metodología de muestreo a seguir, está referenciada en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA. En estas mismas reglas está establecido el peso mínimo que debe tener la muestra de envío al Laboratorio, según la especie que se trate y el análisis que se solicita, y las condiciones de envío al Laboratorio. 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La recepción y manipulación de la muestra debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA, (versión vigente). El peso de la muestra debe ser el peso de a lo menos unidades de semillas, o no menos que el peso indicado en la columna 5 de la Tabla 2A de las Reglas de Análisis de la ISTA. Las muestras deben ser recepcionadas en el Laboratorio hasta dentro de las 72 horas desde su toma, antes si es posible. Las muestras deben venir claramente identificadas, señalando a lo menos el nombre del solicitante, la especie y la variedad, y cualquier otra información que sea de utilidad para el cliente. Las muestras para análisis de pureza deben tener un peso mínimo, según la especie que se trate, el cual está indicado en la Tabla 2, columna 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA. Las muestras deben recibir antes, durante y después de su análisis un manejo tal que permita mantener su integridad y su identificación. Las muestras deben almacenarse por el período de un año después de su análisis, en condiciones adecuadas para mantenerlas en buenas condiciones. Con el objeto de mantener la confiabilidad y objetividad en los análisis, las muestras deben ser identificadas con un número o código único dado por el Laboratorio al momento de su recepción e ingreso y sólo después ingresar al laboratorio para su análisis correspondiente. 5.3 Metodología. El análisis debe ser realizado de acuerdo a lo indicado Capítulo 4 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (versión vigente), considerando que en Chile la clasificación de otras semillas incluye: semillas cuarentenarias, semillas de malezas no cuarentenarias reglamentadas, semillas de malezas comunes y semillas de otras especies cultivadas. El análisis comprende: i) Homogenización de la muestra de envío, pasándola tres veces sin dividir a través de un divisor de semillas. ii) División de la muestra hasta obtener el peso indicado para realizar este análisis, según la especie (Tabla 2A de las Reglas de Análisis ISTA ). iii) Pesar la muestra de trabajo y analizarla separando las semillas de todas las otras especies, o ciertas especies solicitadas, desde la semilla pura. Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 5 de 7

13 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas 5.4 Cálculo y Expresión de Resultados Debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 4 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (versión vigente), indicando el resultado como: número de otras semillas encontradas, en forma separada para cada especie determinada, y separándolas en las categorías de semillas de malezas cuarentenarias o no cuarentenarias reglamentadas, semillas de malezas comunes y semillas de otras especies cultivadas. 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS EL Laboratorio debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor. El formato del Informe de Análisis debe elaborarse de manera tal que incluya todas las observaciones y reglas especificadas para cada análisis en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA y como mínimo debe contener la siguiente información general: Remitente Especie y Variedad Categoría de la muestra Identificación del lote Peso del lote (opcional ) Número de envases (opcional) Tipo de envase (opcional) Fecha ingreso de la muestra al Laboratorio Fecha de término del análisis Identificación de la muestra otorgado en el Laboratorio al momento de su ingreso Resultado del o de los análisis Observaciones del análisis, como las condiciones en que se realizó y otras. Fecha del Informe Firma del Responsable del Laboratorio. El traspaso de los datos al Certificado o Informe de Análisis correspondiente debe ser supervisado por el Responsable del laboratorio. El Laboratorio deberá cada tres meses enviar un listado de los Informes de Análisis emitidos al Laboratorio Oficial SAG de Análisis de Semillas de Lo Aguirre, indicando el número del certificado emitido, la fecha de emisión, el remitente y la especie. EL Laboratorio debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 6 de 7

14 Instructivo técnico para el análisis de determinación de otras especies en semillas metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor 7 ANEXOS No aplica. Código: IT-LAB-08-v01 Pág. 7 de 7

15 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE VIABILIDAD DE SEMILLAS CON EL TEST BIOQUÍMICO DEL TETRAZOLIO Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS...7 Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 1 de 7

16 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de Resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, versión vigente ISTA Handbook on Tetrazolium Testing, versión vigente 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ISTA Viabilidad Semilla viable Semilla no viable Abreviatura de International Seed Testing Association. Capacidad inherente de una semilla para germinar y producir una plántula normal. Capacidad potencial de un lote de semillas para germinar Semilla que tiene capacidad de producir una plántula normal Semilla que tiene deficiencias y/o otras alteraciones de tal naturaleza como para impedir su desarrollo en una plántula normal 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos. i) Infraestructura: Deben existir áreas separadas para actividades incompatibles y de un tamaño adecuado al personal que trabaja en los análisis y a la carga de trabajo. El Laboratorio debe tener un área limpia y seca, lo suficientemente amplia para la necesidad de los análisis que corresponden; sin exposición a corrientes de aire, con buena iluminación (del orden de 1000 lux), debe poseer mesón de trabajo, con cubierta resistente y fácil de limpiar. Deben haber instalaciones protegidas de condiciones excesivas de temperatura, vapor, vibraciones, interferencias, etc. que puedan afectar adversamente los resultados. Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 2 de 7

17 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio Deben tener fuentes de energía necesaria para los análisis. Deben existir instalaciones para almacenar las muestras hasta un año después del análisis y en condiciones de temperatura, humedad y limpieza, que permitan la integridad de las muestras. ii) Equipos: Contar con equipamiento, materiales e instrumental acorde al tipo de especies para las cuales se declara competencia, para lo cual considerar lo que se indica a continuación (pudiendo agregar o reducir elementos) Lámpara lupa Calculadora de sobremesa Cámara de frío de hasta 10ºC Estufa de esterilización o secado con regulación de temperatura entre 20-40ºC Lupa estereoscópica de 45 a 60x iii) Materiales: Pinzas Bisturíes Agujas de disección Contenedores Vidrios de reloj Bandejas Respiradores con filtro y/o mascarillas para polvos tóxicos Guantes de procedimiento Substrato papel filtro liso Agua destilada Reactivo: 2,3,5-Trifenil Tetrazolio Cloruro o Bromuro1 4.2 Requisitos de personal i) Según lo dispuesto en el numeral 4.2 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis / ensayo, el Laboratorio debe contar con un responsable técnico, quien será la contraparte del SAG, en temas técnicos asociados a su actividad como laboratorio acreditado. ii) Contar con analistas que deben cumplir el siguiente perfil: Poseer un título técnico relacionado con el área biológica o científica y sus funciones serán realizar los análisis de acuerdo a las reglas de la ISTA y mantener los equipos funcionando bien y calibrados, cuando corresponda. Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 3 de 7

18 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio Estar capacitados y entrenados en el análisis y tener conocimientos de morfología de semillas. Tener capacitación en sistemas de aseguramiento de calidad. 4.3 Requisitos Específicos. No aplica. 4.4 Medios de verificación de requisitos. De acuerdo al punto 6.1 del Reglamento específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, los interesados en acreditarse para este análisis deben presentar junto a su solicitud de acreditación lo siguiente: i) Un dossier con los antecedentes generales del laboratorio que se solicitan en dicho reglamento ii) Un dossier para verificar el cumplimiento de los requisitos establecidos en los puntos 4.1 a 4.3 de este Instructivo técnico, para lo cual debe adjuntar. - Listado de identificación de los analistas, indicando nombre completo, número de cédula de identidad y firma. - Título (copia legalizada) y Currículum vitae de los analistas, indicando la experiencia en el cargo demostrable. - Certificado de capacitación de los analistas en la técnica - Croquis del área destinada a análisis de vigor con la ubicación de sus equipos - Lista de equipos e instrumental destinados al análisis de viabilidad, incluyendo su plan de mantención y calibración. Debido a que la práctica continua de este análisis es muy importante en la obtención de la experiencia y conocimiento, se deberá comprobar este requisito con una evaluación teórica y práctica por especie. 5 ANÁLISIS/ENSAYO 5.1 Captación y envío de la muestra. El muestreo debe ser realizado de acuerdo a lo indicado Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, versión vigente). 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La recepción y manipulación de la muestra debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (versión vigente). Las muestras deben ser recepcionadas en el Laboratorio hasta dentro de las 72 horas desde su toma y antes en lo posible. Las muestras deben recibir antes, durante y después de su análisis un manejo tal que permita mantener su integridad y su identificación. Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 4 de 7

19 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio Las muestras deben almacenarse por el período de un año después de su análisis, en condiciones adecuadas para mantenerlas en buenas condiciones. Con el objeto de mantener la confiabilidad y objetividad en los análisis, las muestras deben ser identificadas con un número o código único dado por el Laboratorio al momento de su recepción e ingreso y sólo después ingresar al laboratorio para su análisis correspondiente con esa identificación. 5.3 Metodología. El análisis debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 6 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente) y el Manual de Ensayos al Tetrazolio(ISTA Handbook on Tetrazolium Testing) y debe considerar los siguientes aspectos: Preparación de la muestra de trabajo a partir de la fracción de la semilla pura, tomando al azar 4 réplicas de 100 semillas. Preparación de la muestra de semillas antes de la tinción, dándoles distintas condiciones según la especie, de acuerdo con la Tabla 6A de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de ISTA. Exposición de los tejidos antes de la tinción, según Tabla 6A de las Reglas ISTA. Tinción por períodos de tiempo diferente según la especie e indicados en la Tabla 6A de las Reglas ISTA. Evaluación de las semillas como viables o no viables. 5.4 Cálculo y Expresión de Resultados Debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 6 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente). Se expresa como porcentaje promedio de las 4 réplicas y aproximado al número entero más cercano. En la ficha de análisis respectiva de cada muestra se debe anotar la siguiente información: Tipo de pretratamiento usado Fecha y hora de inicio y término del pretratamiento Fecha y hora de inicio y término de tinción Número de semillas analizadas Temperaturas utilizadas Fecha de evaluación Iniciales de la analista Cálculo de promedio y tolerancia Concentración de la solución de tetrazolio usada Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 5 de 7

20 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS El Laboratorio deberá establecer un formato de Informe de Resultados que debe ser visado o aprobado por el Servicio de manera previa a su puesta en uso. El formato del Informe de Análisis debe elaborarse de manera tal que incluya todas las observaciones y reglas especificadas para cada análisis en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA y como mínimo debe contener la siguiente información general: - Remitente - Especie y Variedad - Categoría de la muestra - Identificación del lote - Peso del lote (opcional) - Número de envases (opcional) - Tipo de envase (opcional) - Fecha ingreso de la muestra al Laboratorio - Fecha de término del análisis - Identificación de la muestra otorgado en el Laboratorio al momento de su ingreso - Resultado del o de los análisis o % de semillas fueron viables. o En el caso de las Leguminosas se debe agregar % de semillas duras encontradas en el análisis, o, % de semillas duras incluidas en el % reportado de semillas viables - Observaciones del análisis, como las condiciones en que se realizó y otras. - Fecha del Informe - Firma del Responsable del Laboratorio. El traspaso de los datos al Certificado o Informe de Análisis correspondiente debe ser supervisado por el Responsable del laboratorio. El Laboratorio deberá cada tres meses enviar un listado de los Informes de Análisis emitidos al Laboratorio Oficial de Análisis de Semillas de Lo Aguirre, indicando el número del certificado emitido, la fecha de emisión, el remitente y la especie. EL Laboratorio debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 6 de 7

21 Instructivo técnico para el análisis de viabilidad de semillas con el test bioquímico del tetrazolio 7 ANEXOS No aplica. Código: IT-LAB-10-v01 Pág. 7 de 7

22 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE HUMEDAD EN SEMILLAS Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS...6 Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 1 de 6

23 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de humedad, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices de semillas para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de Resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de humedad, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, versión vigente. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ISTA Humedad Abreviatura de International Seed Testing Association. Es el contenido de agua de una muestra, que se traduce en pérdida de peso al desecarla según las instrucciones dadas en las Reglas Internacionales de Análisis de ISTA. Se expresa como porcentaje del peso de la muestra inicial. 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos. i) Infraestructura: Deben existir áreas separadas para actividades incompatibles y de un tamaño adecuado al personal que trabaja en los análisis y a la carga de trabajo. El Laboratorio debe tener un área limpia y seca, lo suficientemente amplia para la necesidad de los análisis que corresponden; sin exposición a corrientes de aire, con buena iluminación (del orden de 1000 lux), debe poseer mesón de trabajo, con cubierta resistente y fácil de limpiar. Deben haber instalaciones protegidas de condiciones excesivas de temperatura, vapor, vibraciones, interferencias, etc. que puedan afectar adversamente los resultados. Deben tener fuentes de energía necesaria para los análisis. Deben existir instalaciones para almacenar las muestras hasta un año después del análisis y en condiciones de temperatura, humedad y limpieza, que permitan la integridad de las muestras. Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 2 de 6

24 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas ii) Equipos: Deben contar con el equipamiento, materiales e instrumental acorde al tipo de especies para los cuales se declara competencia, para lo cual considerar lo que se indica a continuación (pudiendo agregar o reducir algunos elementos) - Balanza analítica, con una precisión de 0.001g. - Calculadora de sobremesa - Estufa de esterilización o secado, con temperatura regulable hasta 150ºC - Molinillo regulable, de bajo nivel de pérdida de humedad - Desecador - Harneros o cribas metálicas con luz de malla de 0.50mm., 1.00mm., y 4.00mm. iii) Materiales: - Contenedores de muestra - Bandejas - Cajas térmicas - Pinzas para manipular placas calientes - Guantes resistentes a temperaturas altas 4.2 Requisitos de personal i) Según lo dispuesto en el numeral 4.2 del Reglamento Específico para la acreditación de laboratorios de análisis / ensayo, el Laboratorio debe contar con un responsable técnico, quien será la contraparte del SAG, en temas técnicos asociados a su actividad como laboratorio acreditado ii) Contar con analistas que deben cumplir el siguiente perfil: Poseer un título técnico relacionado con el área biológica o científica y sus funciones serán realizar los análisis de acuerdo a las reglas de la ISTA y mantener los equipos funcionando bien y calibrados, cuando corresponda. Estar capacitados y entrenados en análisis de determinación de humedad. Tener experiencia demostrable en este análisis de por lo menos 6 meses. Tener capacitación en sistemas de aseguramiento de calidad. 4.3 Requisitos Específicos. No aplica 4.4 Medios de verificación de requisitos. De acuerdo al punto 6.1 del Reglamento específico para la acreditación de laboratorios de análisis/ensayos, los interesados en acreditarse para este análisis deben presentar junto a su solicitud de acreditación lo siguiente: Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 3 de 6

25 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas i) Un dossier con los antecedentes generales del laboratorio que se solicitan en dicho reglamento ii) Un dossier para verificar el cumplimiento de los requisitos establecidos en los puntos 4.1 a 4.3 de este Instructivo técnico, para lo cual debe adjuntar. - Listado de identificación de los analistas, indicando nombre completo, número de cédula de identidad y firma. - Título (copia legalizada) y Currículum vitae de los analistas, indicando la experiencia en el cargo demostrable. - Certificado de capacitación de los analistas en la análisis de determinación de humedad - Croquis del área destinada a análisis de determinación de humedad, con la ubicación de sus equipos - Lista de equipos e instrumental destinados al análisis de determinación de humedad. - Registro de control de equipos que lo requiere. 5 ANÁLISIS/ENSAYO 5.1 Captación y envío de la muestra. El muestreo debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente). Las muestras deben ser enviadas en forma rápida al laboratorio, a más tardar dentro de las primeras 24 hrs., y ser aceptadas sólo si vienen en un envase a prueba de humedad, intacto, del cual debe eliminarse el máximo de aire posible. Deben transportarse en caja con aislación térmica. 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La recepción y manipulación de la muestra debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 2 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (versión vigente). Las muestras deben recibir antes, durante y después de su análisis un manejo tal que permita mantener su integridad y su identificación. Las muestras deben almacenarse por el período de un año después de su análisis, en condiciones adecuadas para mantenerlas en buenas condiciones. Con el objeto de mantener la confiabilidad y objetividad en los análisis, las muestras deben ser identificadas con un número o código único dado por el Laboratorio al momento de su recepción e ingreso y sólo después ingresar al laboratorio para su análisis correspondiente, sólo con esta identificación. 5.3 Metodología. Las muestras para análisis de humedad deben analizarse inmediatamente después de recibidas o guardarlas como máximo por no mas de dos horas en un contenedor a prueba de humedad. Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 4 de 6

26 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas El análisis debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 9 de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente). El proceso debe incluir: Pesado de la muestra de trabajo. Molido para aquellas especies indicadas en la Tabla9A de las Reglas Internacionales de Análisis de ISTA, antes de sacar la muestra de trabajo. Presecado, para aquellas especies para las cuales el molido es necesario y que su contenido de humedad es mas de 17%. Secado con el método de la estufa a baja temperatura constante para aquellas especies listadas en la Tabla 9B de las Reglas Internacionales de Análisis de ISTA. Secado con el método de la estufa a alta temperatura constante para las especies listadas en la Tabla 9C de las Reglas Internacionales de Análisis de Semillas de ISTA. 5.4 Cálculo y Expresión de Resultados Debe ser realizado de acuerdo a lo indicado en el Capítulo 9 de las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA (International Rules for Seed Testing, ISTA versión vigente).una vez obtenido el resultado con un decimal, se deben promediar las réplicas y llevar este promedio a las Tablas de Tolerancia (Capítulo 16), si la diferencia entre ambas réplicas no excede el 0,2%. Si es mayor, se debe repetir el análisis. 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS El Laboratorio deberá establecer un formato de Informe de Resultados que debe ser visado o aprobado por el Servicio de manera previa a puesta en uso. En el formato del Informe de Resultados debe considerarse un área para expresar el resultado de la humedad de la muestra de semillas, el cual debe expresarse hasta con un decimal El formato del Informe de Análisis debe elaborarse de manera tal que incluya todas las observaciones y reglas especificadas para cada análisis en las Reglas Internacionales de Análisis de la ISTA y como mínimo debe contener la siguiente información general: - Remitente - Especie y Variedad - Categoría de la muestra - Identificación del Lote - Peso del lote (opcional) - Número de envases (opcional) - Tipo de envase (opcional) - Fecha ingreso de la muestra al Laboratorio - Fecha de término del análisis Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 5 de 6

27 Instructivo técnico para el análisis de Humedad en Semillas - Identificación de la muestra otorgado en el Laboratorio al momento de su ingreso - Resultado del o de los análisis - Observaciones del análisis, como las condiciones en que se realizó y otras. - Fecha del Informe - Firma del Responsable del Laboratorio. El traspaso de los datos al Certificado o Informe de Análisis correspondiente debe ser supervisado por el Responsable del laboratorio. El Laboratorio deberá cada tres meses enviar un listado de los Informes de Análisis emitidos al Laboratorio Oficial de Análisis de Semillas de Lo Aguirre, indicando el número del certificado emitido, la fecha de emisión, el remitente y la especie. EL Laboratorio debe tener registros o fichas de resultados para cada análisis que realice, en el que identifique el tipo de muestra y la especie que se trata, los resultados obtenidos, la metodología y condiciones de análisis usada, fecha del análisis y firma del analista que realizó el análisis y de su supervisor. 7 ANEXOS No aplica. Código: IT-LAB-12-v01 Pág. 6 de 6

28 Instructivo técnico para el análisis de pureza física de semillas. INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL ANÁLISIS DE PUREZA FÍSICA DE SEMILLAS Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos Específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y Expresión de Resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS...7 Código: IT-LAB-11-v01 Pág. 1 de 7

29 Instructivo técnico para el análisis de pureza física de semillas. 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar los requisitos específicos para la acreditación de laboratorios por parte del SAG para la realización del análisis de pureza física de semillas, acreditación que se entrega además por especie. Del mismo modo, en este documento se entregan las directrices para la realización del análisis mencionado y para la emisión del Informe de Resultados por parte de laboratorios acreditados. Esta acreditación faculta al laboratorio acreditado a realizar el análisis de pureza física de semillas, a semillas corrientes destinadas al comercio interno. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS D.L. N 1764 de 1977, que Fija normas para la investigación y comercio de semillas. D.S. N 188 de 1978, que Aprueba Reglamento General del Decreto Ley N 1764 de 1977, para las semillas de cultivo. International Rules for Seed Testing, ISTA, versión vigente Manual de Definición de Semilla Pura de ISTA, versión vigente. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ISTA Semilla pura Otras semillas Materia Inerte Semillas de Malezas Semillas de otras especies cultivadas Abreviatura de International Seed Testing Association. Corresponde a la especie indicada por el interesado, o aquellas que se encuentren como predominante en el análisis, incluyendo todas las variedades botánicas y cultivares de dicha especie. También son semilla pura las semillas inmaduras, las de tamaño inferior al normal, arrugadas, enfermas o germinadas, siempre que puedan ser identificadas como perteneciente a dicha especie. Para cada especie, están definidas las semillas puras en las Reglas de Análisis de la ISTA. Semillas de cualquier otra especie distinta a la de la semilla pura, siempre que se pueda identificar como semilla verdadera. Fragmentos de semillas y otras estructuras y materias no definidas como semilla pura en las Reglas de Análisis de ISTA. Cualquier semilla de género o especie que no sea cultivada con fines agrícolas y/o forestal, ornamental o medicinal Cualquier semilla de género o especie, que no corresponda a la semilla pura, ni a semilla de maleza y que es cultivada con fines agrícolas, forestales, ornamentales o medicinales Código: IT-LAB-11-v01 Pág. 2 de 7