Dra. Ana Cristina González García

Transcripción

1 Dra. Ana Cristina González García

2 DIAGNÓSTICO DE PATÓGENOS RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS DIAGNÓSTICO DEL TIPO DE CARNE GENES DE INTERÉS ECONÓMICO

3 BACTERIAS E. coli O157:H7 Shigella Salmonella Yersinia Vibrio Listeria Staphylococcus Bacillus Klebsiella Bacterias causantes de mastitis PARÁSITOS Filaria (Dirofilaria) Leishmania Amebas Babesia Theileria Coccidio Crytosporidium Giardia

4 MEDIANTE PCR MEDIANTE CULTIVO EN PLACA Escherichia coli Escherichia coli Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Streptococcus uberus Streptococcus ssp. Streptococcus agalactidae Mycoplasma ssp. Streptococcus dysgalactidae Coliformes Streptococcus bovis Mycobacterium bovis Mycobacterium avium Mycobacterium a. paratuberculosis Mycoplasma agalactidae Mycoplasma capricolum sp. capricolum Mycoplasma mycoides Mycoplasma bovis Pasteurella haemolytica Pasteurella multocida

5 Columna 1-9: muestra leche 3 Columna 1: Staphylococcus aureus negativa Columna 2: coliforme positiva Columna 3: E. coli positiva Columna 4: Streptococcus agalactidae negativa Columna 5: Streptococcus dysagalactidae positiva Columna 6: Streptococcus uberis positiva Columna 7: Streptococcus bovis negativa Columna 8: M. c. caprino positiva Columna 9: M. m. mycoide negativo Columna 10: marcador de peso molecular Columna 1: muestra leche 1 cabra S. aureus negativa Columna 2: muestra leche 1 cabra coliforme positiva Columna 3: muestra leche 1 cabra E. coli0157 negativa Columna 4: muestra leche 1 cabra M. m. mycoide negativo Columna 5: muestra leche 1 cabra M. c. caprino negativo Columna 6: control + positiva Columna 7: control - negativo Columna 8: muestra leche 2 cabra S. aureus positiva Columna 9: marcador de peso molecular Columna 10: muestra leche 2 cabra coliforme positiva Columna 11: muestra leche 2 cabra E. coli0157 positiva Columna 12: muestra leche 2 cabra M. m. mycoide negativo Columna 13: muestra leche 2 cabra M. c. caprino positiva Columna 14: muestra leche cabra tanque S. aureus negativa Columna 15: muestra leche cabra tanque coliforme positiva Columna 16: muestra leche cabra tanque E. coli0157 positiva Columna 17: muestra leche cabra tanque M. m. mycoide negativo Columna 18: muestra leche cabra tanque M. c. caprino negativo

6 BETA-LACTAMICOS Bencipenicilina y Oxaciclina meca: OK 147pb GENTAMICINA aaca-aphd: OK 227pb TOBRAMICINA aacaph: OK 491pb LEVOFLOXACINA Grl: OK 1457pb Gyl: OK 1255pb MACROLIDOS (eritromicina eritromicina/clindamicina clindamicina) ermc: OK 299pb LINEZOID 23sRNA: OK 633pb TIGECICLINA mepr: OK 539pb RIFAMPICINA rpob: OK 460pb TRIMETROPINA/SULFAMETOXAZOL dfrk: OK 229pb dfrg: OK 405pb dfrs: OK 270pb TETRACICLINA tetk: OK 169pb tetl: OK 267pb tetm: OK 406pb teto: OK 515pb

7 M M M Muestra de leche de vaca 1-2: Macrólido(Eritromicina) 3: Macrólido - 4-6: Macrólido(Clindamicina) 7: Macrólido - 8-9: Streptogramina 1-4: Trimetropina/Sulfametoxazol positivo 1: Levofloxacina 5-6: Levofloxacina positivo 2: Linezoid 7: Gentamicina positivo 3: Rifampicina 8-9: Macrólidos negativo M M : Lincosamida 11: control - 12: Tetraciclina 13: β-lactámicos (meca) Muestra de leche de vaca 1-2: Levofloxacina negativo 3-5: Eritromicina positivo 6: mac1 positivo 7: Clindamicina positivo Muestra de leche de vaca 1: Clindamicina negativo 2: mac2 negativo 3: b-lactamicos (meca) positivo 4: Tetraciclina positivo

8 PCR para la detección del gen meca (MRSA+) Caracterización Genotípica del MRSA Análisis del polimorfismo asociado al casete cromosómico estafilocócico que contiene al gen meca (Tipo I, II, III, IVa, IVb, IVc, IVd y V) SAMR-H SAMR-H v/s SAMR-C SAMR-C SCCmec tipo I, II o III SCCmec tipo IV o V Resistencia a múltiples antibióticos Reducida resistencia antibiótica Múltiples cuadros clínicos Afecta piel, pulmón Toxinas ++ Toxinas ++++ PVL ausente generalmente PVL presente generalmente

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10 Evitar el fraude alimenticio Pocillo 1: Cabra Pocillo 2: Gallina Pocillo 3: Vaca Pocillo 4: Cordero Pocillo 5: Cerdo Pocillo 6: Caballo Tenemos los primer para poder identificar carne de perro o/y de gato

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13 La CALPAÍNA y la CALPASTATINA, actúan de forma coordinada degradando las proteínas de la fibra muscular y disminuyendo el "rigor mortis" que se produce después de la muerte del animal SNP ID Posición del SNP Alelos Alelo favorable Posición UoGCAST1 Intrón 5 G/C C nt 282 secuencia AY Genebank CAPN316 Exón 9 C/G C nt 5709 of accession # AF CAPN4751 Intrón 17 C/T C Nt6545 of accession # AF El análisis de estos SNP como indicadores de ternura en carne de vacuno está validado por el Consorcio de valoración de la carne de vacuno de Estados Unidos (National Beef Cattle Evaluation Consortium)

14 Los genotipos sombreados son infrecuentes Te ernura

15 M CC/CC/GG puntuación de ternura 8 1: Vaca06 CAPN316 2: Vaca06 CAPN316/BgtI CC 3: Vaca06 CAPN4751 4: Vaca06 CAPN4751/DdeI CC 5: Vaca06 UoG-CAST 6: Vaca06 UoG-CAST/RsaI GG CC/TT/CG puntuación de ternura 3 7: Vaca07 CAPN316 8: Vaca07 CAPN316/BgtI CC 9: Vaca07 CAPN : Vaca07 CAPN4751/DdeI TT 11: Vaca07 UoG-CAST1 12: Vaca07 UoG-CAST/RsaI CG CC/CT/CC puntuación de ternura 7 1: Vaca03 CAPN316 2: Vaca03 CAPN316/BtgI CC 3: Vaca03 CAPN4751 4: Vaca03 CAPN4751/DdeI CT 5: Vaca03 UoG-CAST 6: Vaca03 UoG-CAST/RsaI CC

16 En Canarias existe una única raza porcina autóctona, el Cerdo Negro Canario, catalogada por el Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente como Raza de Protección Especial en peligro de extinción (RD 1682/1997). Los avances en genética molecular han permitido la detección de genes con efectos directos sobre caracteres de calidad: El gen receptor de la rianodina (RYR RYR1), gen de Halotano, relacionado con el estrés. El gen Heart Fatty Acid Binding Protein (H-FABP FABP), con efecto sobre el porcentaje de grasa intramuscular. El gen Receptor de la Leptina (LEPR LEPR), asociado también con el contenido de grasa dorsal y conversión alimentaria.

17 Carnes Exudativas (PSE): carnes pálidas, suaves y exudativas están asociadas con la susceptibilidad hereditaria del estrés porcino Polimorfismo del gen RYR1 o del estrés porcino Los cerdos con el genotipo nn, presentan una carne más dura, fibrosa, y elástica y menos fácil de tragar que la de los cerdos NN, mientras los genotipos Nn producen carnes que se asemejan más a las producidas por los animales NN. MARCADOR ENZIMA DE RESTRICCIÓN GENOTIPO RYR1 BsiHKA I NN ( ) Nn ( ) Nn ( ) 524 pb Figura 1: PCR-RFLP del gen RYR1 135 pb (a) pocillo 8, amplicón del gen RYR1 de 659pb sin digerir. (b) pocillos 1-7, fragmentos (524pb y 135pb) obtenidos tras digestión con BsiHKA I. M marcadores de 100pb (Promega). NN Ratifica la importancia de la conservación de la raza Cerdo Negro Canario

18 Contenido de grasa intramuscular (IMF) Espesor de la grasa dorsal (BFT) Peso corporal (BW) Polimorfismo del gen H-FABP (Proteínas de unión a ácidos grasos) Uno de los principales objetivos en la industria productora porcina es la producción de carne de alta calidad. Para lograr esto es necesario la reducción de grasa ya que los consumidores demandan carne magra. El contenido de grasa intramuscular es muy importante para la calidad de carne de cerdo para consumo y es altamente heredable y tiene una correlación positiva con suavidad, jugosidad y sabor. Polimorfismo del gen de la Leptina (LEPR) La Leptina es una proteína que inhibe al mayor neuropéptido hipotalámico (NRY) por lo que inhibe el apetito y genera una señal de saciedad. El gen receptor de la leptina (LEPR) en el cerdo está asociado con el espesor de la grasa dorsal.

19 POLIMORFISMO DEL GEN H-FABP (PROTEÍNAS DE UNIÓN A ÁCIDOS GRASOS) MARCADOR Intron2 ENZIMA DE RESTRICCIÓN Hae Ill DD ( ) GENOTIPO Dd ( ) dd ( ) 5 UTR Hinf l HH ( ) Hh ( ) hh ( ) Los animales con genotipo DD presentan una mayor infiltración de grasa intramuscular que los animales con genotipo Dd o dd. Los animales con genotipo HH presentan un mayor índice de conversión alimentaria y por lo tanto un mayor crecimiento que los de genotipo Hh o hh.

20 POLIMORFISMO DEL GEN DE LA LEPTINA (LEPR) MARCADOR ENZIMA DE RESTRICCIÓN GENOTIPO LEPR Hpa ll AA (2000) AB ( ) BB ( ) Los animales con genotipo AB tienen un mayor espesor de la grasa dorsal que los animales homocigóticos BB pero una menor conversión alimentaria.

21 CONTACTOS Dr. D. Basilio Valladares Hernández Instituto Universitario de Enfermedades Tropicales y Salud Publica de Canarias Teléfono: bvallada@ull.es Dra. Dña. Ana Cristina González García Servicio de Genómica de la ULL. SEGAI Instituto Universitario de Enfermedades Tropicales y Salud Publica de Canarias Teléfono: / ana_gonzalezgarcia@yahoo.es