RIDA GENE Clostridium difficile PG0835
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- Ramona Navarrete Reyes
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1 RIDA GENE Clostridium difficile PG0835 RBiopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, Darmstadt, Alemania Tel.: +49 (0) / Fax: +49 (0)
2 1. Uso previsto Para el diagnóstico in vitro. RIDA GENE Clostridium difficile es una prueba de PCR multiplex en tiempo real para la detección directa y cualitativa de Clostridium difficile (16S ADNr) y de los genes de toxina A (tcda)/b (tcdb) de Clostridium difficile en cultivos y muestras de heces humanos. La prueba de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Clostridium difficile puede usarse como una ayuda para el diagnóstico de la diarrea asociada con Clostridium difficile (DACD). 2. Resumen y descripción del ensayo Clostridium difficile, una bacteria anaerobia grampositiva formadora de esporas, fue descrita por primera vez en 1935 por Hall y O'Toole como un componente de la microflora intestinal de neonatos sanos. 1 Sin embargo, a finales de la década de los 70 se identificó a Clostridium difficile como la causa de la diarrea asociada con el uso de antibióticos y la colitis seudomembranosa. 2 En la actualidad, Clostridium difficile es una de las causas más comunes de diarrea hospitalaria. Clostridium difficile es responsable del 15 % al 25 % de los casos de diarrea asociada con el uso de antibióticos y de casi todos los casos de colitis seudomembranosa. 3 Los factores de riesgo que predisponen a la DACD son, por ejemplo, la exposición a antibióticos, la edad avanzada, la cantidad de hospitalizaciones y su duración. 4 Sin embargo, también se observa infección por Clostridium difficile en un número cada vez mayor de personas no hospitalizadas y no tratadas con antibióticos. Los síntomas van desde diarrea leve hasta infecciones intestinales de diversa gravedad, incluida la colitis seudomembranosa, la forma más grave de enfermedad inflamatoria intestinal inducida por antibióticos. Los casos clínicamente sintomáticos son causados por cepas toxigénicas de Clostridium difficile que producen toxina A y toxina B. En los últimos años, la incidencia y la gravedad de las infecciones por Clostridium difficile han aumentado en todo el mundo. La PCR en tiempo real permite la detección rápida y con alta sensibilidad y especificidad de la infección por Clostridium difficile. Un diagnóstico temprano y confiable de la infección por Clostridium difficile permite administrar un tratamiento específico para los pacientes con DACD y también iniciar medidas de higiene para evitar la transmisión hospitalaria RIDA GENE Clostridium difficile
3 3. Principio del ensayo RIDA GENE Clostridium difficile es una prueba de diagnóstico molecular mediante PCR multiplex en tiempo real para la detección directa y cualitativa de Clostridium difficile (16S ADNr) y de los genes de toxina A (tcda)/b (tcdb) de Clostridium difficile en cultivos y muestras de heces humanos. Después del aislamiento del ADN, se lleva a cabo la amplificación de los fragmentos génicos específicos de Clostridium difficile y de las toxinas A y B de Clostridium difficile (si están presentes). Las dianas amplificadas se detectan mediante sondas de hidrólisis, marcadas en un extremo con un extintor de fluorescencia y en el otro con un colorante fluorescente indicador (fluoróforo). En presencia de una diana, las sondas se hibridan a los amplicones. Durante el paso de extensión, la TaqPolymerase rompe la proximidad del indicadorextintor. El indicador emite una señal fluorescente que se detecta en la unidad óptica de un ciclador de PCR en tiempo real. La señal fluorescente aumenta en función de la cantidad de amplicones formados. El ensayo RIDA GENE Clostridium difficile contiene Internal Control DNA (ICD) como control interno del procedimiento de preparación de las muestras y para determinar la posible inhibición de la PCR. 4. Reactivos suministrados Tabla 1: Reactivos suministrados (los reactivos del kit son suficientes para 100 determinaciones) Código del kit Reactivo Cantidad Color de la tapa 1 Reaction Mix 2x 1050 µl amarilla 2 TaqPolymerase 1x 80 µl roja D Internal Control DNA 2x 1700 µl naranja N No Template Control 1x 450 µl blanca P Positive Control 1x 200 µl azul 5. Instrucciones de almacenamiento Todos los reactivos deben conservarse protegidos de la luz y a una temperatura de 20 C. Todos los reactivos pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad. Después de la fecha de vencimiento, la garantía de calidad ya no es válida. Descongele con cuidado los reactivos antes de usarlos (p. ej., en un refrigerador a 2 8 C). RIDA GENE Clostridium difficile
4 Los reactivos admiten hasta 20 ciclos de congelación/descongelación sin que esto afecte a la eficacia diagnóstica del ensayo (p. ej., tras la primera descongelación, es conveniente separar en alícuotas y congelar de inmediato). Durante la preparación de la PCR, todos los reactivos deben conservarse en frío de manera adecuada (2 8 C). 6. Reactivos adicionales necesarios y equipo necesario El ensayo de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Clostridium difficile es adecuado para usarse con las siguientes plataformas de extracción y equipos de PCR en tiempo real: Tabla 2: Equipamiento necesario Plataformas de extracción RBiopharm Promega biomérieux Equipos de PCR en tiempo real Roche Agilent Technologies RIDA Xtract Maxwell RSC NucliSENS easymag LightCycler 480II Mx3005P Applied Biosystems ABI 7500 BioRad QIAGEN CFX96 RotorGene Q Nota: Utilice únicamente tubos de 0,1 ml en el RotorGene Q (QIAGEN). Si desea utilizar otras plataformas de extracción o equipos de PCR en tiempo real, póngase en contacto con RBiopharm en mdx@rbiopharm.de. RIDA GENE Color Compensation Kit IV (PG0004) para uso con el LightCycler 480II Consumibles para PCR en tiempo real (placas, tubos, papel aluminio) Centrífuga y rotor para los viales de reacción Agitador vórtex Pipetas (0,5 20 µl, µl, µl) Puntas con filtro Guantes desechables sin talco Agua para PCR (Grado BioScience, sin nucleasas, agua tratada con DEPC) RIDA GENE Clostridium difficile
5 7. Precauciones para los usuarios Para el diagnóstico in vitro. Este ensayo solo debe llevarlo a cabo personal de laboratorio capacitado. Respetar las directrices para el trabajo en laboratorios médicos. Seguir las indicaciones del manual de instrucciones para la ejecución de la prueba. No pipetear muestras ni reactivos con la boca. Evitar el contacto con piel herida o mucosas. Durante la manipulación de reactivos o muestras, llevar ropa de seguridad adecuada (guantes apropiados, bata de laboratorio, gafas protectoras) y lavarse las manos al finalizar la ejecución de la prueba. No fumar, comer ni beber en las zonas en las que se estén utilizando las muestras o los reactivos de los ensayos. La extracción, la preparación de la PCR y la PCR propiamente dicha deben llevarse a cabo en diferentes salas para evitar la contaminación cruzada. Las muestras deben tratarse como potencialmente infecciosas, al igual que todos los reactivos y materiales expuestos a las muestras, y deben manipularse según las normativas nacionales de seguridad. No utilizar el kit después de la fecha de caducidad. Todos los reactivos y materiales usados se deben eliminar correctamente después del uso. Consultar las normas nacionales pertinentes para la eliminación. Para obtener más información, consultar la hoja de datos de seguridad (SDS) en 8. Obtención y almacenamiento de muestras 8.1 Preparación de la muestra a partir de muestras de heces Para el aislamiento del ADN a partir de muestras de heces humanas, use un kit de aislamiento de ADN (como RIDA Xtract [RBiopharm]) o un sistema de extracción de ADN (p. ej., Maxwell RSC [Promega]) disponibles en el mercado. Extraiga el ADN siguiendo las instrucciones del fabricante. Recomendamos diluir las muestras de heces 1:3 con agua antes de la extracción. Agite intensamente en un mezclador vórtex la muestra de heces diluida y centrifúguela a 1000 x g durante 30 segundos. Use el volumen adecuado de sobrenadante según las instrucciones del fabricante. El ensayo RIDA GENE Clostridium difficile contiene un Internal Control DNA que detecta la inhibición de la PCR, monitoriza la integridad de los reactivos y confirma que la extracción de ácidos nucleicos haya sido suficiente. El Internal Control DNA puede usarse como control de inhibición de la PCR, o como control de extracción para el procedimiento de preparación de las muestras y control de inhibición de la PCR. Si el Internal Control DNA se usa únicamente como control de inhibición de la PCR, se debe agregar 1 µl del Internal Control DNA a la mezcla maestra (consulte la tabla 4). RIDA GENE Clostridium difficile
6 Si el Internal Control DNA se utiliza como control de extracción del procedimiento de preparación de las muestras y como control de inhibición de la PCR, se debe agregar 20 µl de Internal Control DNA durante el procedimiento de extracción. El Internal Control DNA debe añadirse siempre a la mezcla de búfer de lisado de muestras y no directamente a la muestra. También se recomienda agregar 1 µl de Internal Control DNA a la mezcla para PCR del control negativo y del control positivo. 8.2 Preparación de la muestra a partir de cultivos Para aislar el ADN a partir de un cultivo se recomienda el procedimiento siguiente: Agregue 1 ml de agua para PCR a un tubo de preparación. Coseche las colonias con un asa de inoculación y suspéndalas en el agua para PCR preparada. Corte o rompa el vástago del asa de inoculación. Tape bien el tubo de preparación y agítelo en un mezclador vórtex a alta velocidad durante 60 segundos. Caliente y agite el tubo de preparación a 95 C durante 10 min en un bloque calefactor. Centrifugue durante 1 min a x g y aplique el sobrenadante como muestra. Nota: Si la muestra está muy turbia, repita el paso de centrifugación (si es necesario). El ensayo RIDA GENE Clostridium difficile contiene un Internal Control DNA que detecta la inhibición de la PCR, monitoriza la integridad de los reactivos y confirma que la extracción de ácidos nucleicos haya sido suficiente. El Internal Control DNA puede usarse como control de inhibición de la PCR, o como control de extracción para el procedimiento de preparación de las muestras y control de inhibición de la PCR. Si el Internal Control DNA se usa únicamente como control de inhibición de la PCR, se debe agregar 1 µl del Internal Control DNA a la mezcla maestra (consulte la tabla 4). Si el Internal Control DNA se utiliza como control de extracción del procedimiento de preparación de las muestras y como control de inhibición de la PCR, se debe agregar 20 µl de Internal Control DNA durante el procedimiento de extracción. El Internal Control DNA debe añadirse siempre a la mezcla de muestraagua para PCR y no directamente a la muestra. También se recomienda agregar 1 µl de Internal Control DNA a la mezcla para PCR del control negativo y del control positivo RIDA GENE Clostridium difficile
7 9. Ejecución de la prueba 9.1 Preparación de la mezcla maestra Calcule el número total de reacciones de PCR necesarias (reacciones de muestra y de control). En cada ensayo debe incluirse un control positivo y un control negativo. Se recomienda calcular un 10 % de volumen adicional para compensar las imprecisiones en el pipeteo (consulte las tablas 3 y 4). Descongele, mezcle suavemente y centrifugue brevemente la Reaction Mix, la TaqPolymerase, el Positive Control, el No Template Control y el Internal Control DNA antes de utilizarlos. Conserve los reactivos correctamente en frío (2 8 C) durante el paso de trabajo. Tabla 3: Ejemplo de cálculo y pipeteo para 10 reacciones de la mezcla maestra (ICD como control de extracción y de inhibición de la PCR) Código del kit Componentes de la mezcla maestra Volumen por reacción 10 reacciones (10 % adicional) 1 Reaction Mix 19,3 µl 212,3 µl 2 TaqPolymerase 0,7 µl 7,7 µl Total 20 µl 220 µl Mezcle suavemente los componentes de la mezcla maestra y centrifúguelos brevemente. Tabla 4: Ejemplo de cálculo y pipeteo para 10 reacciones de la mezcla maestra (ICD como control de inhibición de la PCR únicamente) Código del kit Componentes de la mezcla maestra Volumen por reacción 10 reacciones (10 % adicional) 1 Reaction Mix 19,3 µl 212,3 µl 2 TaqPolymerase 0,7 µl 7,7 µl D Internal Control DNA 1,0 µl 11 µl Total 21,0 µl 231,0 µl Mezcle suavemente los componentes de la mezcla maestra y centrifúguelos brevemente. RIDA GENE Clostridium difficile
8 9.2 Preparación de la mezcla para PCR Pipetee 20 µl de mezcla maestra en cada vial de reacción (tubo o placa). Control negativo: Agregue 5 µl de No Template Control a la mezcla maestra prepipeteada. Nota: Si el Internal Control DNA se utiliza como control de extracción del procedimiento de preparación de las muestras y control de inhibición de la PCR, se recomienda agregar 1 µl de Internal Control DNA a la mezcla para PCR del control negativo. Muestra: Control positivo: Añada 5 µl de extracto de ADN a la mezcla maestra prepipeteada. Añada 5 µl de Positive Control a la mezcla maestra prepipeteada. Nota: Si el Internal Control DNA se utiliza como control de extracción del procedimiento de preparación de las muestras y control de inhibición de la PCR, se recomienda agregar 1 µl de Internal Control DNA a la mezcla para PCR del control positivo. Tape los tubos o la placa. Centrifúguelos y colóquelos en el equipo de PCR en tiempo real. La reacción de PCR debe iniciarse según la configuración del equipo de PCR (consulte las tablas 5, 6, 7 y 8) RIDA GENE Clostridium difficile
9 9.3 Configuración del equipo de PCR Perfil de ADN por PCR en tiempo real Tabla 5: Perfil de ADN por PCR en tiempo real en los equipos serie LightCycler y RotorGene Q Desnaturalización inicial 1 min, 95 C Ciclos PCR Desnaturalización Hibridación/Extensión Velocidad de transición de temperatura / Velocidad de rampa 45 ciclos 10 s, 95 C 15 s, 60 C Máxima Nota: La hibridación y la extensión se llevan a cabo en el mismo paso. Tabla 6: Perfil de ADN por PCR en tiempo real en los equipos Mx3005P, ABI7500 y CFX96 Desnaturalización inicial 1 min, 95 C Ciclos PCR Desnaturalización Hibridación/Extensión Velocidad de transición de temperatura / Velocidad de rampa 45 ciclos 15 s, 95 C 30 s, 60 C Máxima Nota: La hibridación y la extensión se llevan a cabo en el mismo paso. RIDA GENE Clostridium difficile
10 9.3.2 Perfil universal por PCR en tiempo real Nota: El perfil universal por PCR en tiempo real se debe usar en los ensayos de ADN solo cuando se combinan en una corrida los ensayos RIDA GENE de ADN y ARN por PCR en tiempo real. Tabla 7: Perfil universal por PCR en tiempo real en el equipo LightCycler Transcripción inversa 10 min, 58 C Desnaturalización inicial 1 min, 95 C Ciclos PCR Desnaturalización Hibridación/Extensión Velocidad de transición de temperatura / Velocidad de rampa 45 ciclos 10 s, 95 C 15 s, 60 C Máxima Nota: La hibridación y la extensión se llevan a cabo en el mismo paso. Tabla 8: Perfil universal por PCR en tiempo real en el Mx3005P, ABI7500, Rotor Gene Q y CFX96 Transcripción inversa 10 min, 58 C Desnaturalización inicial 1 min, 95 C Ciclos PCR Desnaturalización Hibridación/Extensión Velocidad de transición de temperatura / Velocidad de rampa 45 ciclos 15 s, 95 C 30 s, 60 C Máxima Nota: La hibridación y la extensión se llevan a cabo en el mismo paso RIDA GENE Clostridium difficile
11 9.4 Configuración del canal de detección Tabla 9: Selección de los canales de detección adecuados Equipo de PCR en tiempo real Detección Canal de detección Nota Roche LightCycler 480II ABI 7500 Agilent Techn. Mx3005P Qiagen Rotor Gene Q Clostridium difficile 465/510 Se requiere el ICD 533/580 Gen de toxina A/B de C. difficile Clostridium difficile ICD Gen de toxina A/B de C. difficile Clostridium difficile ICD Gen de toxina A/B de C. difficile Clostridium difficile ICD Gen de toxina A/B de C. difficile Clostridium difficile 618/660 FAM VIC Cy5 FAM HEX Cy5 Verde Amarillo Rojo FAM RIDA GENE Color Compensation Kit IV (PG0004) Compruebe que la opción de referencia pasiva ROX sea «none» (ninguna) Compruebe que el colorante de referencia sea «none» (ninguno) La ganancia debe configurarse en 5, según la configuración predeterminada BioRad CFX96 ICD Gen de toxina A/B de C. difficile VIC Cy5 RIDA GENE Clostridium difficile
12 10. Control de calidad El software del equipo de PCR en tiempo real utilizado analiza las muestras según las instrucciones del fabricante. Los controles positivo y negativo deben mostrar los resultados correctos (consulte la tabla 10, figuras 1 y 2) para determinar que un ensayo es válido. El Positive Control para Clostridium difficile y los genes de toxina A/B de Clostridium difficile tiene una concentración de 10 3 copias/µl. En cada corrida de PCR se usa una cantidad total de 5 x 10 3 copias, respectivamente. Tabla 10: Para que un ensayo sea válido, deben cumplirse las siguientes condiciones: Muestra Resultado del ensayo Ct del ICD Control positivo Positivo NA * 1 Control negativo Negativo Ct > 20 0 Ct de la diana Consulte el certificado de garantía de calidad * 1 No se requiere un valor de Ct del ICD para determinar que el control positivo es positivo. Si el control positivo no es positivo en el intervalo de Ct especificado, pero el control negativo es válido, prepare de nuevo todas las reacciones, incluidos los controles. Si el control negativo no es negativo pero el control positivo es válido, prepare de nuevo todas las reacciones, incluidos los controles. Si no se cumplen los criterios requeridos, deben comprobarse los siguientes puntos antes de repetir el ensayo: Caducidad de los reactivos utilizados Funcionalidad de los equipos utilizados Ejecución correcta de la prueba RIDA GENE Clostridium difficile
13 Fig. 1: Procesamiento correcto de los controles positivo y negativo (Clostridium difficile) en el LightCycler 480II Fig. 2: Procesamiento correcto de los controles positivo y negativo (genes de toxina A/B de C. difficile) en el LightCycler 480II RIDA GENE Clostridium difficile
14 11. Interpretación de los resultados La interpretación de los resultados se lleva a cabo según la tabla 11. Tabla 11: Interpretación de las muestras C. difficile Genes diana Genes de toxina A/B ICD positivo positivo positivo/negativo positivo negativo positivo/negativo Resultado Cepa toxigénica de C. difficile detectada Cepa no toxigénica de C. difficile detectada negativo positivo positivo/negativo No válido negativo negativo positivo Genes diana no detectados negativo negativo negativo No válido Una cepa toxigénica o no toxigénica de C. difficile se detecta si el ADN de la muestra y el Internal Control DNA muestran una señal de amplificación en el sistema de detección. Una cepa toxigénica o no toxigénica de C. difficile también se detecta si hay señal de amplificación del ADN de la muestra, pero no del Internal Control DNA en el sistema de detección. La detección del control de amplificación interno no es necesaria debido a que las altas concentraciones del amplicón pueden hacer que la señal del Internal Control DNA sea débil o esté ausente. Una cepa toxigénica o no toxigénica de C. difficile no se detecta si no hay señal de amplificación del ADN de la muestra, pero hay señal de amplificación del Internal Control DNA en el sistema de detección. La inhibición de la reacción de PCR se puede excluir por la detección del ADN del Internal Control DNA. La muestra no es válida si no hay señal de amplificación del ADN de la muestra y del Internal Control DNA en el sistema de detección. La muestra contiene un inhibidor de la PCR o se produjo un fallo en el procedimiento de extracción. Es necesario diluir aún más la muestra extraída con agua para PCR (1:10) y amplificarla de nuevo, o bien, mejorar el aislamiento y la purificación de la muestra RIDA GENE Clostridium difficile
15 12. Limitaciones del método 1. El resultado del análisis molecular no debe dar lugar a un diagnóstico, sino considerarse siempre en el contexto del historial médico y los síntomas del paciente. 2. Este ensayo solo es adecuado para muestras de heces y cultivos. 3. La recogida, transporte, almacenamiento y procesamiento incorrectos de la muestra, o una carga de patógenos en la muestra inferior a la sensibilidad analítica pueden dar lugar a resultados negativos falsos. 4. La presencia de inhibidores de la PCR puede ocasionar resultados no válidos. 5. Las mutaciones o polimorfismo en las regiones de unión del cebador o la sonda pueden afectar a la detección de nuevas variantes, y producir un resultado negativo falso con el ensayo RIDA GENE Clostridium difficile. 6. Como ocurre con todas las pruebas diagnósticas de PCR in vitro, podría detectarse un nivel sumamente bajo de la diana, por debajo del límite de detección (LoD), pero los resultados podrían no ser reproducibles. 7. Un resultado positivo de la prueba no indica necesariamente la presencia de microorganismos viables. No obstante, un resultado positivo indica la presencia de los genes diana (16S ADNr, tcda/tcdb). RIDA GENE Clostridium difficile
16 13. Características de rendimiento 13.1 Sensibilidad analítica El ensayo de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Clostridium difficile tiene un límite de detección de 10 copias de ADN por reacción para Clostridium difficile y los genes de toxinas de C. difficile (consulte las figuras 3 y 4). Las siguientes figuras 3 y 4 muestran una dilución seriada de Clostridium difficile y de los genes de toxinas de C. difficile ( copias de ADN por µl en cada caso) en el LightCycler 480II. Fig. 3: Dilución seriada de Clostridium difficile ( copias de ADN por µl) en el LightCycler 480II RIDA GENE Clostridium difficile
17 Fig. 4: Dilución seriada de genes de toxina A/B de C. difficile ( copias de ADN por µl) en el LightCycler 480II El límite de detección de todo el procedimiento depende de la matriz de la muestra, la extracción del ADN y la concentración del ADN. RIDA GENE Clostridium difficile
18 13.2 Especificidad analítica El ensayo de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Clostridium difficile es específico para Clostridium difficile (16S ADNr) y los genes de toxina A/B de C. difficile. No se detectaron reacciones cruzadas con las siguientes especies (consulte la tabla 12): Tabla 12: Pruebas de reactividad cruzada Adenovirus 1, humano, cepa Adenoid 71 Adenovirus 7, humano, cepa Gomen Adenovirus 40, humano, cepa Dugan Adenovirus 41, humano, cepa Tak Campylobacter lari subsp. lari Campylobacter upsaliensis Entamoeba histolytica E. coli (O6) Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Candida albicans E. coli (O26:H) Rotavirus Citrobacter freundii E. coli (O157:H7) Salmonella enteritidis Aeromonas hydrophila Clostridium bifermentans Enterobacter cloacae Salmonella typhimurium Arcobacter butzleri Clostridium novyi Astrovirus Bacillus cereus Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp. fetus Campylobacter jejuni Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Cryptosporidium muris Cryptosporidium parvum Enterococcus faecalis Giardia intestinalis Portland 1 Giardia intestinalis WB clon C6 Giardia lamblia Klebsiella oxytoca Norovirus GG I Norovirus GG II Serratia liquefaciens Shigella flexneri Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica
19 13.3 Sensibilidad analítica La reactividad del ensayo de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Parasitic Stool Panel II se evaluó con Clostridium difficile (consulte la tabla 13). Todas las cepas de Clostridium difficile evaluadas se detectaron con el ensayo de PCR multiplex en tiempo real RIDA GENE Parasitic Stool Panel II o por alineación de secuencias. Tabla 13: Pruebas de reactividad analítica Clostridium difficile C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp C. difficile Ribotyp FK012 + C. difficile Ribotyp C. difficile toxinotipo 0 + C. difficile toxinotipo X + C. difficile toxinotipo XXI + C. difficile toxinotipo I + C. difficile toxinotipo XIa + C. difficile toxinotipo XXII + C. difficile toxinotipo II + C. difficile toxinotipo XIb + C. difficile toxinotipo XXIV + C. difficile toxinotipo IIIa + C. difficile toxinotipo XIc + C. difficile toxinotipo XXV + C. difficile toxinotipo IIIb + C. difficile toxinotipo XId + C. difficile toxinotipo XXVI + C. difficile toxinotipo IIIc + C. difficile toxinotipo XII + C. difficile toxinotipo XXVII + C. difficile toxinotipo IV + C. difficile toxinotipo XIII + C. difficile toxinotipo XXVIII + C. difficile toxinotipo V + C. difficile toxinotipo XIVa + C. difficile toxinotipo XXIX + C. difficile toxinotipo VI + C. difficile toxinotipo XIVb + C. difficile toxinotipo XXX + C. difficile toxinotipo VII + C. difficile toxinotipo XVI + C. difficile toxinotipo XXXI + C. difficile toxinotipo VIII + C. difficile toxinotipo XVII + C. difficile toxinotipo XXXII + C. difficile toxinotipo IXa + C. difficile toxinotipo XVIII + C. difficile toxinotipo XXXIII + C. difficile toxinotipo IXb + C. difficile toxinotipo XIX + C. difficile toxinotipo XXXIV + C. difficile toxinotipo IXc + C. difficile toxinotipo XX + RIDA GENE Clostridium difficile
20 14. Historial de versiones Número de versión Capítulo y designación 17/04/2013 Versión de lanzamiento 11/05/2018 Revisión general 11/05/ Reactivos suministrados 6. Reactivos adicionales necesarios y equipo necesario 9. Ejecución de la prueba 10. Control de calidad 13. Características de rendimiento 14. Historial de versiones 15. Explicación de los símbolos 15. Explicación de los símbolos Símbolos generales Para el diagnóstico in vitro. Obsérvese las instrucciones de uso Número de lote Utilizable hasta Temperatura de almacenamiento Número de artículo Número de pruebas Fecha de fabricación Fabricante Símbolos específicos del ensayo No aplicable
21 16. Referencias bibliográficas 1. Hall IC and O'Toole E. Intestinal flora in newborn infants: with a description of a new pathogenic anaerobe, Bacillus difficilis. Am J Dis Child 1935, 49: Bartlett JG, et al. Antibioticaassociated pseudomembranous colitis due to a toxinproducing clostridia. N Engl J Med, 1978; 298: Bartlett JG and Gerding DN. Clinical Recognition and Diagnosis of Clostridium difficile Infection. CID 2008, 46: S Bartlett JG. Narrative Review: The new Epidemic of Clostridium difficile Associated Enteric Disease. Ann Intern Med 2006; 145: RIDA GENE Clostridium difficile
RIDA GENE CD Toxin A/B PG0825
RIDA GENE CD Toxin A/B PG0825 RBiopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, 64297 Darmstadt, Alemania Tel.: +49 (0) 61 51 81 020 / Fax: +49 (0) 61 51 81 0220 1. Uso previsto Para el diagnóstico in vitro. RIDA
RIDA GENE Dientamoeba fragilis PG1745
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RIDA GENE Helicobacter pylori Ref. PG2305
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RIDA GENE ETEC/EIEC PG2225
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RIDA GENE Parasitic Stool Panel II PG1725
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RIDA GENE Bordetella PG2505
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RIDA GENE Norovirus I & II PG1415 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, 64297 Darmstadt, Alemania Tel.: 49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: 49 (0) 61 51 81 02-20 1. Uso previsto Para el diagnóstico in vitro.
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RIDA GENE Bacterial Stool Panel I PG2415
RIDA GENE Bacterial Stool Panel I PG2415 RBiopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, 64297 Darmstadt, Alemania Tel.: +49 (0) 61 51 81 020 / Fax: +49 (0) 61 51 81 0220 1. Uso previsto Para el diagnóstico
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RIDA QUICK Norovirus N de art.: N1402 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, 64297 Darmstadt, Alemania Tel.: +49 61 51 81 02-0 / Telefax: +49 61 51 81 02-20 C 1. Área de aplicación Para el diagnóstico
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