Verónica Chevasco 1, Daniela Chevasco 1, Alvaro Barragán 1, Pontificia Universidad Católica del Ecuador

Transcripción

1 Los virus entomopatógenos genos,, agentes biológicos promisorios para el control de las polillas de la papa Tecia solanivora y Symmetrischema tangolias Verónica Chevasco 1, Daniela Chevasco 1, Alvaro Barragán 1, Gaëlle Mongredien 2, Giovanni Onore 1, Jean-Louis Zeddam 1,2 1,2. 1 Pontificia Universidad Católica del Ecuador 2 IRD (Institut de Recherche pour le Développement) D REGRESAR

2 Polillas de la papa en la zona andina 1. Tecia solanivora ecuatoriana

3 2. Symmetrischema tangolias Carchi? sept 2004 Tungurahua feb 2000 Loja feb 2000

4 Daños por larvas de polillas

5 Tecia solanivora Symmetrischema tangolias 4 estadios Color: blanco transparente. Dorso: puntos negros y pelos. Cápsula cefálica marrón. Tamaño: mm Duración fase larval: 29 días El ciclo completo: aprox. 71 días. Temp. Prom.: 16ºC y HR: 83% 5 estadios Color: blanco con franjas longitudinales rojas en el dorso Cápsula cefálica marrón obscura Tamaño 12,5 mm Duración fase larval: 38 días El ciclo completo dura aprox. 76 días. Temp. Prom: 16ºC y HR: 83%

6 Control de las polillas T. solanivora (grave problema fitosanitario) Grandes pérdidas p ($6 millones/año o Carchi) Utilización de plaguicidas si no No pertinente- 99 Chimborazo Cañar Tungurahua Carchi Cotopaxi Fuente: PUCE-PROMSA 103

7 Reducción n de los ingresos económicos (compra químicos, pérdida p cosecha, depreciación n del producto) Número de encuestados alta media baja Antes Después Nivel de producción de papa Fuente: PUCE-PROMSA 103

8 Daños a la salud y al medio ambiente Hombres Mujeres Fuente: Mera-Orcés, 2000 Número de hospitalizaciones por intoxicación con plaguicidas (según edad y género) desde 1997 hasta 1999 en el Hospital de San Gabriel (Carchi)

9 Desarrollo de una alternativa de control: Manejo Integrado de Plagas (MIP) Conjunto de prácticas (culturales, uso controlado de químicos, aplicación n de bioplaguicidas ) Aplicación n de bioplaguicida (virus entomopatógenos genos)

10 Materiales y Métodos 1. Muestreo de las poblaciones de la plaga (zonas agroecológicas gicas distintas en diferentes períodos) 2. Multiplicación n de virus (inyección, n, inmersión, n, contaminación n de tubérculos) 3. Purificación n de virus (gradientes sucrosa, precipitación n PEG) 4. Análisis de características físicof sico- químicas y moleculares de estos patógenos

11 a. Tamaño o y estructura (microscop( microscopía óptica y electrónica) b. Composición n proteínas (electroforesis geles poliacrilamida) c. Tipo de material genético (electroforesis geles agarosa) d. Organización n de genomas virales (cortes enzimáticos, clonación, n, secuenciación) n)

12 Resultados

13 1. Granulovirus (GV) * Virus ocluido * CI: 500 nm x 300 nm * Proteína oclusión n ( ( 30 kda) * ADN circular doble cadena ( ( 120 kpb) * PhopGV: Eficaz Phthorimaea operculella Medianamente T. solanivora Ineficiente S. tangolias kda PM Virus 97,4 66,2 42,7 31,0 21,5 Virus granulina (λ DNA EcoRI/Hind III) kpb GV P. operculella 1 µm BamH I

14 * La patogenicidad de las distintas especies virales es diferente. Larva enferma * Dentro de una misma especie viral existen variaciones de virulencia ( LC50 50) Larva sana * Se están n evaluando los aislamientos más m eficaces

15 2. Chiripa * Virus no ocluido * 32 nm de diámetro * Proteínas de cápside principales > 98 kda * ADN circular, simple cadena, tamaño: 3,6 kb Virus PM kda Patículas virales n m 22 16

16 Amplificación n círculo c rodante (ADN polimerasa fago Φ 29) Escalera 1 kpb Hind III Pvu II Sal I

17 3. Shyris * Virus no ocluido * 30 nm de diámetro * Proteínas virales entre 36 y 50 kda * ARN fragmentado, simple cadena Virus PM kda 250 Virus PM kb ,49 7,46 4,40 2,37 1, , n m

18 4. Anchilibí *Virus no ocluido * Proteínas virales entre 98 y 64 kda * 30 nm de diámetro * ARN fragmentado simple cadena kda PM Virus n m 16

19 * Muy virulento (actúa rápidamente) * Amplio rango de hospederos T. solanivora y S. tangolias P. operculella T. solanivora * Afectaría: a: Galleria mellonella Tuta absoluta * Fácil F de multiplicar * Las larvas muertas se colectan fácilmentef * Buen candidato para bioplaguicida Larva sana Larvas muertas Pupa sana Pupa enferma

20 Conclusiones Gran biodiversidad viral (tamaño, virulencia, tipos de organización) n) Nuevos datos patología a viral de insectos Perspectivas para el uso de estos patógenos para el control de las polillas de la papa Fuente potencial de nuevos genes de interés para biotecnología