BIOLOGÍA MOLECULAR. Laboratorio Análisis Clínicos. Aplicaciones en el. Hospital de Pediatría Dr.Prof.Juan P.Garrahan
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- Lucía Coronel Vidal
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1 BIOLOGÍA MOLECULAR Aplicaciones en el Laboratorio Análisis Clínicos Rita Moreiro Laboratorio HEPATITIS -HIV Hospital de Pediatría Dr.Prof.Juan P.Garrahan
2 Rita Moreiro QUE SON LOS GENES?
3 Rita Moreiro Y UN CROMOSOMA?
4 Rita Moreiro DOGMA CENTRAL BIOLOGÍA ADN ARN PROTEINAS
5 Rita Moreiro GEN - DNA COMPOSICIÓN Grupo fosfato Nucleótido Bases nitrogenadas Desoxi- ribosa citosina Adenina Timina guanina
6 Rita Moreiro GENES - DNA
7 Rita Moreiro GENES - ORACIONES
8 Rita Moreiro
9 Rita Moreiro CLONADO MOLECULAR
10 Rita Moreiro CLONADO MOLECULAR
11 Rita Moreiro P.C.R Fundamento: Modelo natural de replicación del ADN Dividido en Procesos = Ciclos Desnaturalización Apareamiento Extensión Este proceso se lleva a cabo en un TERMOCICLADOR Instrumento que permite automáticamente controlar y alternar las temperaturas en períodos de tiempos programados de manera tal de obtener un número de Ciclos de PCR apropiados
12 DESNATURALIZACIÓN (Roche)
13 APAREAMIENTO (Roche)
14 Extensión (Roche)
15 FINAL DEL PRIMER CICLO (Roche)
16 1 cycle = 2 Amplicon 2 cycle = 4 Amplicon 3 cycle = 8 Amplicon 4 cycle = 16 Amplicon 5 cycle = 32 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon 7 cycle = 128 Amplicon (Roche)
17 Laboratorio de Virología APLICACIONES Rita Moreiro
18 DIAGNÓSTICO de LABORATORIO Laboratorio VIROLÓGICO Laboratorio Hepatitis Virales Laboratorio BIOQUÍMICO Rita Moreiro
19 TESTS DIAGNÓSTICOS BIOLOGIA MOLECULAR INMUNO ENSAYOS Rita Moreiro
20 Rita Moreiro Virus de Hepatitis B Antigeno de superficie HBsAg DNA Polimerasa Nucleocápside HBcAg Nucleoproteina HBeAg
21 Rita Moreiro GENOMA HBV
22 MARCADORES VIRALES Antígenos Anticuerpos HBsAg HBe anti-hbs anti-hbe anti-core HBV -DNA Carga viral(p.c.r cuant.) Rita Moreiro
23 COBAS AMPLICOR MONITOR Rita Moreiro Preparación de la muestra Aislamiento del DNA-HBV de suero ó plasma Amplificación (PCR) Del DNA Objetivo usando Primers complementarios específicos Hibridación De Productos amplificados a sondas oligonucleótidas específicas Detección Colorimétrica de los productos amplificados unidos a la sonda
24 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Precipitación PEG Centrifugación Reactivo de neutralización Buffer de lisis STD CUANT. DNA Rita Moreiro (Roche)
25 AMPLIFICACIÓN -PCR (Roche) Rita Moreiro
26 AMPLIFICACIÓN SELECTIVA Rita Moreiro (Roche)
27 HIBRIDIZACIÓN (Roche) Rita Moreiro
28 DETECCIÓN (Roche) Rita Moreiro
29 Virus de Hepatitis C Cápside (core) E1/E2 RNA Envoltura lipídica Rita Moreiro
30 5 UTR Genoma del virus de Hepatitis C 3 UTR H 2 N Poliproteína Precursora COOH C E1 E2 NS1 NS2 NS3 NS4a NS4b NS5a NS5b NUCLEO ENVOLTURA REGIÓN NO ESTRUCTURAL Rita Moreiro
31 DIAGNÓSTICO LABORATORIO ENSAYOS TAMIZAJE ENSAYOS SUPLEMENTARIOS MÉTODOS MOLECULARES Rita Moreiro
32 ENSAYOS TAMIZAJE 5 UTR 3 UTR CORE NS4 NS3 NS5 Rita Moreiro Enzimoinmunoensayo de 3 generación
33 Rita Moreiro Ensayos suplementarios
34 MÉTODOS MOLECULARES HCV RNA (cualitativo) GENOTIPO HCV Rita Moreiro CARGA VIRAL HCV- RNA (Cuantitativo)
35 COBAS AMPLICOR MONITOR Rita Moreiro Preparación de la muestra Aislamiento del ARN HCV en suero ó plasma Trancripción reversa del ARN Genera DNAc por DNA polimerasa termoestable recomb. Amplificación - PCR Del DNAc objetivo con primers complementarios específicos Hibridización Con sondas oligonucleótidas específicas para los objetivos Detección Detección de los amplicones mediante determinación colorimétrica
36 Rita Moreiro GENOTIPO HCV
37 Rita Moreiro GENOTIPO HCV
38 P.C.R clásica VS Real Time Preparación de la muestra Amplificación P.C.R Hibridación Preparación de la muestra Amplificación Detección Detección Rita Moreiro
39 Rita Moreiro
40 Rita Moreiro
41 Rita Moreiro
42 Rita Moreiro
43 Rita Moreiro DETECCIÓN
44 Rita Moreiro DETECCIÓN
45 EQUIPAMIENTO The COBAS TaqMan 48 Analyzer PCR en tiempo real Rita Moreiro
46 MUCHAS GRACIAS
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