Prostaglandina E2 estimula la síntesis de renina en línea celular de túbulo colector renal de ratón (M-1) a través del receptor EP1 vía PKC/cAMP/CREB.

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "Prostaglandina E2 estimula la síntesis de renina en línea celular de túbulo colector renal de ratón (M-1) a través del receptor EP1 vía PKC/cAMP/CREB."

1 Prostaglandina E2 estimula la síntesis de renina en línea celular de túbulo colector renal de ratón (M-1) a través del receptor EP1 vía PKC/cAMP/CREB. Alexis A. Gonzalez 1, L. Gabriel Navar 2, Minolfa C. Prieto 2 1 Instituto de Química, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso,Chile. 2 Department of Physiology and Hypertension and Renal Center of Excellence, Tulane University School of Medicine, New Orleans, LA.

2 Prostaglandina E 2 y regulación de renina en la mácula densa Las prostaglandinas poseen importantes funciones a nivel renal. Evidencia acumulada ha demostrado que PGE2 es fundamental en la síntesis de renina en las células juxtaglomerulares (JG) como parte del feedback tubulo-glomerular. La evidencia definitiva provino de ratones mutantes del receptor de prostaglandina EP4 en los cuales la respuesta en la mácula densa se pierde totalmente (Coffman TM, 2011). Na + Furosemida ACE Ang II Ang I EP4 Angiotensinógeno Harris RC 2004 Peti-Peterdi J 2010 Harris RC 2010 Coffman TM 2012 CREB (-) PKC

AQP- 2 (brown chromogen; asteriks) in principal cells of connec?

3 Además de las células JG, renina se expresa en en el túbulo colector renal Renin (red chromogen; arrows) co- localizes with AQP- 2 (brown chromogen; asteriks) in principal cells of connec?ng tubules and collec?ng ducts. Prieto- Carrasquero et al., Hypertension, 2004

4 Renina se expresa en en el túbulo colector renal y es regulada positivamente por Ang II vía PKC M-1 Rohrwasser et al., Hypertension, 1999 Prieto- Carrasquero et al., Pe?- Peterdi et al. Hypertension, 2004 Hypertension, 2008 Gonzalez AA et al. Pﬂuggers Review, 2012 Cultivos primarios de túbulos colectores medulares Gonzalez AA et al. Hypertension 2011

5 Receptores de prostaglandina descritos en el nefrón Breyer MD 2001

6 Vías de señalización descritas para los receptores EP en túbulo colector renal EP1: PKC, Ca +2 EP3: camp EP4: camp PGE 2 EP1 Gq PIP2 IP3 DAG EP4 Gs EP3 Gi Gi PKC AMPc AC Renina???

7 Hipótesis: PGE 2 regula la expresión de renina en línea celular de túbulo colector renal M-1 Objetivos: Determinar si renina es regulada en línea celular de túbulo colector M-1. Determinar el receptor específico involucrado y las vías de señalización que participan en la regulación de renina en células de túbulo colector M-1.

8 Métodos: - La expresión basal de EP1, EP2, EP3 y EP4 se determinó por qrt-pcr e inmunofluorescencia. - Cambios en la expresión de renina se determinaron mediante qrt-pcr (ARNm), Western blot (niveles proteicos) e inmunofluorescencia. - El receptor EP específico involucrado en la regulación de renina fue determinado en respuesta a PGE2 mas incubación con antagonistas específicos de los receptores EP (30 minutos antes de PGE2). - Todos los tratamientos se realizaron en presencia de indometacina (1 µm) para impedir la contribución de la ciclooxigenasa 1 -presente en túbulos colectoresa la síntesis de PGE2.

9 Resultados Células M-1 expresan EP1, EP3 y EP4, pero no expresan EP2 EP1 EP2 EP3 EP4 Verde: inmunofluorescencia usando anticuerpos específicos contra receptores EP Azúl: tinción del núcleo

10 Resultados Células M-1 expresan EP1, EP3 y EP4. EP2 es indetectable. EP1 β actina β actina EP2 β actina EP3 EP4 β actina qrt-pcr usando partidores específicos para los receptores EP de ratón.

10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 Renina/β-actina (veces de aumento) 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.

11 PGE 2 aumenta la expresión de renina en línea celular de túbulo colector de ratón M-1 Renina- Standard β-actina- Renina/β-actina mrna (veces de aumento) Renina/β-actina (veces de aumento) PGE 2 (Mol/L) PGE 2 (Mol/L) n=5, P<0.05 vs. Veh (EtOH)

12 PGE 2 aumenta la expresión de renina en línea celular de túbulo colector de ratón M-1 Veh (EtOH) PGE2 (10-6 M) anti renin/prorenin Santa Cruz, 1:200. B-12

13 PGE 2 aumenta la expresión de renina a través del receptor EP1 EP1: ONO-8711, 100 nm EP3: L , 10µM EP4: AH 23848, 1µM Renina- β-actina- Renina/β-actina mrna (veces de aumento) Renina/β-actina (veces de aumento) PGE 2 + PGE 2 n=5, P<0.05 vs. Veh (EtOH)

14 Vías de señalización receptores EP: EP1 activa PKC EP1: PKC, Ca +2 EP3: camp EP4: camp PGE 2 EP1 Gq PIP2 IP3 DAG EP4 Gs EP3 Gi Gi PKC AMPc AC Renina???

15 PGE 2 aumenta la expresión de renina a través del receptor EP1 vía PKC Claphostin C: inhibidor de la proteína kinasa C (PKC, 100 nm) PKCalphaDN: Células previamente transfectadas con un dominante negativo de la isforma PKC-alfa Renina- β-actina- Renina/β-actina mrna (veces de aumento) 25 + PGE PGE Renina/β-actina (veces de aumento) n=5, P<0.05 vs. Veh (EtOH)

16 PGE 2 aumenta los niveles de AMP cíclico y fosforilación del factor de transcripción CREB (proteína de unión al sitio de respuesta a AMP cíclico) a través del receptor EP1 vía PKC alfa. P-CREB- T-CREB PGE 2 12 AMP cíclico (pg/mg protein) P-CREB / T-CREB n=6, P<0.05 vs. Veh (EtOH)

17 Conclusiones PGE 2 EP1 Gq PIP2 IP3 DAG PKC? EP4R Gs EP3R Gi Gi PDE -? camp AC P CREB PKA CRE RENINA Célula principal del túbulo colector

Documentos relacionados

marcadores profibróticos a través del aumento de ROS mediado por MAPK y la activación de COX-2 en células de

El receptor de (pro)renina aumenta la expresión de marcadores profibróticos a través del aumento de ROS mediado por MAPK y la activación de COX-2 en células de túbulo colector renal de ratón Reyes-Martínez,