CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO FELIPE PRÓSPER*Y CATHERINE M. VERFAILLIE** *Servicio de Hematología y Área de Terapia Celular. Clínica Universitaria. Universidad de Navarra. Pamplona (España). **Professor of Medicine. Director, Stem Cell Institute, University of Minnesota. Minneapolis, MN (EEUU). Introducción Las primeras evidencias científicas de que en el organismo adulto existen células madre proviene de experimentos realizados por Till y McCulloch a finales de los años 50 centrados en las células madre hematopoyéticas. * Felipe Prosper es Profesor Adjunto de la Universidad de Navarra y Director del Área de Terapia Celular de la Clínica Universitaria. Su trabajo está centrado en la utilización de las células madre adultas en el campo de la regeneración cardíaca. Autor de mas de 60 artículos en revistas internacionales, pertenece al consejo editorial de prestigiosas revistas y sociedades científicas. ** Catherine Verfaillie es en la actualidad Profesora de Medicina del Departamento de Hematología, Oncología y Trasplante y la Directora del Stem Cell Institute. En los últimos años sus trabajos se han centrado en el estudio de las células madre adultas. Sus descubrimientos en este campo han permitido establecer la existencia en la médula ósea adulta de células madre pluripotenciales, con la misma capacidad proliferativa y diferenciadora que las células madre embrionarias. Es autora de mas de 150 artículos en revistas internacionales y editora de numerosos libros. Ha merecido el reconocimiento de prestigiosas Sociedades Científicas y forma parte de los consejos editoriales de prestigiosas revistas y de los consejos científicos de organismos de investigación internacionales. Sin embargo, la capacidad de regenerar tejidos en organismos adultos, e incluso de regenerar organismos completos, como en el caso de planarias, se conoce desde mucho antes. Clínicamente, hemos explotado la potencialidad de las células madre adultas, concretamente de las células madre hematopoyéticas, desde hace mas de 50 años, y podemos afirmar que gracias al trasplante de médula ósea (trasplante de células madre hematopoyéticas) miles de pacientes han podido ser curados de enfermedades de otra forma incurables. El interés por la utilización de las células madre, o troncales, sin embargo, ha crecido de forma exponencial en los últimos años a raíz de la identificación, caracterización y aislamiento de las células madre embrionarias humanas 1 y de las expectativas, de alguna forma prematuras, de que las células madre podrían ser capaces de curar innumerables enfermedades (enfermedades neurodegenerativas, cardíacas, endocrinológicas, etc.) gracias a su enorme potencial de dife- 7

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS TRONCALES renciación. Desgraciadamente, el debate científico sobre las aplicaciones terapéuticas de las células madre, adultas o embrionarias, se ha transformado en un debate político y mediático, en detrimento del ambiente necesario que facilite el progreso científico. A lo largo de esta monografía, otros autores abordarán aspectos éticos y legales de las células madre. Nosotros nos vamos a limitar a exponer algunos aspectos sobre las células madre adultas, sus orígenes en el organismo adulto y sus posibles aplicaciones, actuales y futuras. Antes de continuar, sí queremos hacer tres comentarios: por razones obvias, en esta revisión no podemos ser exhaustivos, por lo cual pedimos disculpas al lector y a aquellos autores cuyos trabajos omitimos por limitaciones de espacio; en segundo lugar, debido al enorme impulso que esta área de la biomedicina tiene en la actualidad, con seguridad algunos de los conceptos y afirmaciones que hagamos en estas páginas habrán quedado obsoletos en el momento de su publicación, por lo que nos gustaría que este capítulo sirviera más de guía para aquellas personas interesadas en iniciarse en el campo de las células madre; por último, y quizá sea el mensaje más importante que queremos transmitir, a pesar de las enormes perspectivas que existen en relación con las células madre, es esencial que seamos capaces de transmitir un sentimiento de prudencia y de paciencia a nuestros enfermos y colegas: las células madre pueden llegar a contribuir al tratamiento de distintas enfermedades, pero no se espera que estos avances se consigan a corto plazo. Solamente la investigación seria y continuada podrá contribuir a medio o largo plazo a determinar la utilidad terapéutica real de las células madre adultas o embrionarias. Características de las células madre Una célula madre o troncal es la que es capaz de dividirse indefinidamente y diferenciarse a distintos tipos de células especializadas, no sólo morfológicamente sino también de forma funcional (fig. 1). Las células madre se pueden clasificar según su potencial de diferenciación: las células madre totipotenciales son capaces de producir tejido embrionario y extraembrionario; las células madre pluripotenciales tienen la capacidad de diferenciarse a tejidos procedentes de cualquiera de las tres capas embrionarias y, por último, las células madre multipotenciales son capaces de diferenciarse a distintos tipos celulares procedentes de la misma capa embrionaria. Tradicionalmente se ha considerado a las células madre embrionarias como células pluripotenciales, a diferencia de las células madre adultas que se han caracterizado sólo como multipotenciales. Sin embargo, trabajos publicados recientemente sugieren que la potencialidad de algunos tipos de células madre adultas podría ser mayor de la esperada, de manera que existen células troncales pluripotenciales en algunos órganos adultos con capacidad de diferenciarse en tejidos derivados de cualquiera de las capas embrionarias 2. Es importante destacar que 8

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO FIGURA 1. Modelo jerárquico de las células madre de acuerdo con su potencial (véase texto). Cigoto Mórula Blastocisto Cuerpos embrioides Masa celular interna Células madre totipotenciales Células madre multipotenciales Células madre pluripotenciales Células madre somáticas Células madre germinales Ectodermo Endodermo Mesodermo Neuroesferas Piel Hígado Gastrointestinal Médula ósea Músculo Neuronas Glía Epidermis Células Dermis ovales Hepatocitos Conductos biliares Conductos pancreáticos Ácinos pancreáticos Criptas celulares Células madre hematopoyéticas Neutrófilos Plaquetas Eritrocitos Células madre mesenquimales Condroblastos osteoblastos Adipocitos Células satélite Mioblastos Miofibras para que una célula madre pueda considerarse pluripotencial tiene que cumplir las siguientes condiciones: en primer lugar, una única célula debe ser capaz de diferenciarse a células especializadas procedentes de cualquier capa embrionaria; en segundo lugar, demostrar la funcionalidad in vitro e in vivo de las células diferenciadas y, finalmente, que se produzca un asentamiento claro y persistente de estas células en el tejido diana, tanto en presencia como en ausencia de daño en los tejidos en los cuales se injerta. En estos momentos no existe ningún estudio que cumpla todos estos criterios de forma estricta por lo que se refiere a las células madre adultas, aunque algunos trabajos indican de manera bastante evidente la posible existencia de células madre adultas pluripotenciales 2. Las células madre presentan una serie de características que permiten identificarlas, como es la expresión de ciertos marcadores en la superficie celular, la expresión de factores transcripcionales, receptores de factores de crecimiento, o la misma producción de ciertas sustancias. Mientras que hay ciertas 9

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS TRONCALES características que son comunes a distintos tipos de células madre, en general, las células madre de distintos tejidos poseen características específicas que permiten distinguirlas. Algunos trabajos recientes han tratado de determinar cuáles son los perfiles de expresión de genes, a nivel molecular, que permiten identificar las células madre, utilizando tecnologías como los «arrays» de expresión, y diferenciar células madre de células progenitoras, con menor potencialidad 3. Aunque no hemos hecho más que empezar a utilizar estas herramientas, sin duda en el futuro nos permitirán determinar qué genes son los responsables de mantener las células madre en su estado de indiferenciación y qué señales son capaces de inducir la proliferación y diferenciación de estas células madre, y de generar así enormes posibilidades terapéuticas. Fuentes de células madre adultas Es cada vez más evidente que el concepto clásico de que sólo existen células madre en algunos tejidos adultos es incorrecta. La existencia de células madre adultas en la mayor parte de los tejidos adultos, incluidos el hematopoyético, neuronal, epidérmico, gastrointestinal, músculo esquelético, músculo cardíaco, hígado, páncreas o pulmón, no admite controversia. A su vez, cada vez es más evidente que las células madre adultas derivadas de estos órganos no sólo pueden generar células maduras de dicho tejido, sino también tejidos derivados de otras capas embrionarias, siendo el caso más típico el de las células madre hematopoyéticas, capaces de diferenciarse a hepatocitos 4, músculo cardíaco 5, endotelio o a tejidos derivados de las tres capas embrionarias 6. Células madre de la médula ósea Se han descrito diferentes tipos de células madre en la médula ósea: hematopoyéticas (HSC), mesenquimales (MSC) 7, las llamadas «Side Population Cells» (SP) 8 y recientemente las células progenitoras adultas multipotenciales o MAPC 9. Células madre hematopoyéticas (HSC) Las HSC han sido identificadas tanto in vitro como in vivo por varios laboratorios y se vienen utilizando clínicamente desde hace más de 50 años. El trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos ha demostrado definitivamente que existen células madre multipotenciales hematopoyéticas en la médula ósea y en la sangre periférica. Hay numerosos estudios que han permitido identificar las HSC en modelos murinos, como las células que expresan los marcadores Sca-1, Thy-1, c-kit y no expresan marcadores específicos de linaje (Lin-). Estudios de repoblación han demostrado que estas células contribuyen en un modelo de trasplante a la reconstitución de todas las líneas celulares hematopoyéticas. También se han aislado células madre hematopoyéticas en humanos a partir de médula ósea, cordón umbilical, 10

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO sangre periférica o hígado fetal. En general, la ausencia de expresión de marcadores de línea (Lin-), CD38-, c-kit lo, Thy-1 + y la expresión de CD34 se ha asociado a poblaciones enriquecidas en HSC, aunque no se ha podido identificar los marcadores específicos de la célula madre hematopoyética multipotencial. Independientemente del potencial hematopoyético, trabajos recientes indican que las HSC pueden ser, en determinadas circunstancias, más potentes de lo esperado, es decir, diferenciarse hacia tejidos derivados de distintas capas embrionarias. Las células madre hematopoyéticas de médula ósea y de sangre periférica son capaces de contribuir a la angiogénesis y vasculogénesis in vivo, de tal forma que las células CD34+ no sólo contienen progenitores hematopoyéticos sino también células progenitoras endoteliales. Hoy día hay abundantes pruebas de que existe un progenitor común endotelial y hematopoyético (hemangioblasto). De igual forma que ocurre con las HSC, las células madre endoteliales o angioblastos pueden ser movilizadas a la sangre periférica mediante factores de crecimiento o situaciones de estrés. Se caracterizan por la expresión de marcadores de superficie como AC133 y VEGFR-2, marcadores que también expresan las HSC y que apoyan nuevamente la relación entre ambos tipos de células madre 10. Tanto las HSC como las células madre endoteliales son capaces, en modelos experimentales de isquemia, de contribuir a regenerar las estructuras vasculares dañadas, gracias a su capacidad de diferenciarse a células endoteliales maduras, favoreciendo la angiogénesis y la vasculogénesis. En modelos de isquemia periférica, los progenitores endoteliales son movilizados desde la médula ósea y contribuyen a la neoangiogénesis. Asimismo, en un modelo de isquemia cardíaca en rata, las poblaciones de células CD34 +, CD117 bright, AC133 +, VEGFR2 + contribuyen a reparar el miocardio dañado gracias a su capacidad de mejorar la vasculogénesis 11. Uno de los aspectos más controvertidos en cuanto a la potencialidad de las HSC es su capacidad para diferenciarse a células musculares cardíacas. En un modelo murino de infarto agudo de miocardio, el grupo de Orlic y Anversa demostraron que la inyección de células de médula ósea Lin - y c-kit + (fenotipo de marcadores de superficie típico de HSC) en el corazón dañado daba como resultado la colonización de estas células en más de la mitad del área infartada 5. Estas HSC adquirieron un fenotipo característico de células de miocardio y endoteliales y contribuyeron a la mejoría y supervivencia de los animales. Sin embargo, en estudios posteriores utilizando el mismo modelo, no ha sido posible reproducir estos hallazgos y no se han encontrado pruebas claras de transdiferenciación 12. Como en otras ocasiones, es necesario que se realicen nuevos estudios antes de que efectivamente podamos demostrar la existencia o no de esta capacidad por parte de las HSC de transdiferenciarse a células musculares cardíacas. Otra de las potencialidades atribuidas a las HSC es su capacidad para diferenciarse en hepatocitos. Basándose en que las células ovales (células madre hepáticas) expre- 11

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS TRONCALES san marcadores de superficie tradicionalmente asociados a HSC (c-kit, flt-3, Thy-1 y CD34), se ha sugerido que éstas podrían diferenciarse a células ovales y hepatocitos. El grupo de Lagasse y colaboradores ha demostrado que células madre hematopoyéticas de médula ósea con el fenotipo Lin -, c- kit +, Thy-1, Sca-1 son capaces de regenerar el hígado en un modelo de daño hepático fulminante 4, mientras que utilizando modelos de quimerismo en pacientes sometidos a trasplantes de médula ósea o de hígado y aprovechando la posibilidad de utilizar el cromosoma Y como marcador del origen de la célula, también se ha podido demostrar que un porcentaje de hepatocitos proviene de células madre de origen no hepático 13. Nuevamente, la capacidad transdiferenciadora de las HSC a hepatocitos ha sido cuestionada por estudios recientes. Estudios en un modelo murino de tirosinemia hereditaria sugieren que la capacidad de las HSC de contribuir a la regeneración hepática está justificada principalmente por la existencia de fenómenos de fusión celular entre las HSC y los hepatocitos y no realmente por el hecho de que las HSC sean capaces de diferenciarse a hepatocitos 14. El potencial de las HSC para adquirir características de músculo esquelético, neuronas adultas así como células de la glía, y de contribuir a otros tejidos como el epitelio pulmonar, gastrointestinal, renal o la piel se han descrito recientemente 15. Sin embargo, a pesar de todos estos esfuerzos, ninguno de los estudios publicados hasta el momento demuestra que una única célula madre hematopoyética contribuya de forma robusta y funcional a la regeneración de un tejido distinto del hematopoyético y, por tanto, en sentido estricto no cumple los criterios necesarios para hablar de versatilidad. Cada uno de los trabajos mencionados puede ser criticado en este sentido. Sin embargo, si tomamos los estudios de forma conjunta, sí que aportan pruebas de la existencia de HSC con estas características y potencialidades. Células madre mesenquimales La médula ósea contiene asimismo células madre mesenquimales, también denominadas células madre estromales o MSC. En los últimos años se han descrito distintos marcadores de superficie que han permitido identificar y aislar células MSC, tales como SH2, SH3, CD29, CD44, CD71, CD90 y CD106. Múltiples estudios han demostrado in vitro e in vivo que las MSC son capaces de diferenciarse a tejidos mesodérmicos como osteoblastos, condroblastos, adipocitos y mioblastos esqueléticos 7. Varios grupos afirman haber conseguido diferenciar MSC a células derivadas del neuroectodermo basándose en la adquisición de ciertos marcadores de origen neuronal por parte de dichas células cuando son sometidas a sistemas de cultivo específicos. Sin embargo, no se ha podido demostrar que estas células adquieran características funcionales similares a las de las neuronas o las células de la glía. A pesar de su probada multipotencialidad mesodérmica y de su habilidad para diferenciarse a neuroectodermo, 12

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO las MSC no se diferencian a tejido derivado del endodermo y, por tanto, no se pueden considerar células madre pluripotenciales. Las MSC constituyen un modelo muy útil en aplicaciones clínicas para diferentes enfermedades, tanto en terapia regenerativa como en terapia génica. Células «side population» Las llamadas «side population cells (SP)» han sido aisladas tanto a partir de médula ósea como de músculo utilizando técnicas de citometría de flujo (FACS) basándose en su capacidad para excluir el colorante fluorescente Hoescht 33342. Se sabe que las SP son capaces de diferenciarse a HSC en humanos, roedores y otras especies 8. Además, algunos estudios describen que las SP podrían dar lugar a otros tipos de células especializadas e integrarse en distintos tejidos in vivo. Así, el grupo de Jackson y cols. demostró en 1999 que las SP podían diferenciarse a células con características de músculo cardíaco y endotelio en un modelo murino de infarto de miocardio. Células adultas progenitoras multipotenciales (MAPC) Esta población celular de la médula ósea ha sido descrita recientemente por nuestro grupo 2 como auténticas células pluripotenciales con una capacidad diferenciadora muy similar a la de las células madre embrionarias. Las MAPC han sido aisladas a partir de médula humana y de ratón; son capaces de proliferar in vitro más de 120 divisiones celulares sin un aparente envejecimiento, no expresan CD34, CD44, MHC I, MHC II, CD45 y c-kit; expresan niveles bajos de Flk-1, Sca-1 y Thy-1 y altos de CD13, SSEA-1 (ratón/rata) y SSEA- 4 (humano). Al igual que en las células madre embrionarias, en las MAPC se detecta la activación de los factores de transcripción Oct- 4 y Rex-1, factores que son necesarios para mantener la célula en un estado proliferativo e indiferenciado. In vitro, las MAPC se diferencian a tejidos derivados del mesodermo como hueso, cartílago, adipocitos, músculo esquelético, estroma hematopoyético o endotelio, hepatocitos, neuronas, astrocitos y oligodendrocitos no sólo fenotípicamente sino también funcionalmente. Otras fuentes de células madre adultas Como ya hemos comentado, la existencia de células madre en diferentes tejidos como sistema nervioso central, hígado, corazón, piel, músculo no admite controversia. La visión tradicional de que órganos como el corazón o el sistema nervioso central no son capaces de regenerarse, ya que carecen de células con potencial de proliferar y diferenciarse, ha quedado claramente obsoleta, de tal forma que cada vez más se describen células madre en distintos tejidos con capacidad pluripotencial. Células madre neurales La existencia de células madre neurales en el sistema nervioso central se dedujo a 13

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS TRONCALES partir de los hallazgos de que en algunas regiones del cerebro murino, tales como el hipocampo y el bulbo olfatorio, se producían neuronas maduras a lo largo de la vida de los animales. Sin embargo, no fue hasta los años 90 cuando se pudo demostrar la presencia de células madre neurales multipotenciales en cultivo. Las células madre neurales en cultivo forman estructuras denominadas neuroesferas y representan agregados de células heterogéneas con células capaces de autorrenovarse y de diferenciarse tanto a neuronas maduras, como a astrocitos y glía. Las áreas neurogénicas fundamentales son la zona subventricular (SVZ), el bulbo olfatorio y el hipocampo 16, habiéndose identificado en el cerebro humano las células madre neurales como una subpoblación de astrocitos presentes en la zona subventricular. Los estudios in vivo en modelos experimentales han demostrado que las células madre neurales o neuroesferas, al ser trasplantadas en diferentes regiones del cerebro, son capaces de adoptar las características del nuevo microambiente e integrarse con el resto de células. Aunque no se ha podido demostrar de forma contundente, existen estudios que sugieren que las células madre neurales podrían poseer un potencial mayor del que inicialmente cabía esperar. El grupo de Clarke y cols. publicó recientemente un estudio en el que células madre neurales o neuroesferas procedentes de un ratón transgénico para el gen reportero LacZ fueron trasplantadas a embriones de ratón. Aproximadamente el 25% de los embriones presentaban quimerismo no sólo en el tejido neuronal, sino también en tejidos del mesodermo y del endodermo. Cuando estas mismas neuroesferas fueron inyectadas dentro de un blastocisto de ratón, la contribución se extendió al sistema nervioso central, corazón, hígado, intestino y otros tejidos. Las células madre neurales poseen también la capacidad in vitro de diferenciarse en células endoteliales en ausencia de fusiones celulares y por tanto demostrando un grado de versatilidad importante. Células madre de músculo Las células madre del músculo pueden identificarse de forma prospectiva. Se conocen como células satélite y, aunque normalmente se encuentran en estado quiescente, cuando se produce un daño muscular son capaces de proliferar y diferenciarse con el objetivo de reponer las fibras dañadas 17. Su potencial está limitado a la producción de nuevas fibras musculares, aunque algunos estudios recientes sugieren que en situaciones experimentales concretas este potencial pudiera ser superior, de manera que darían lugar a otros tipos de tejidos, como células hematopoyéticas. Además, es posible identificar en el músculo esquelético otros tipos de células madre basándose en su capacidad de adhesión y proliferación y que se han denominado MDSC (muscle derived stem cells). La potencialidad de estas células es muy superior a la de las clásicas células satélite, ya que pueden mantenerse en cultivo durante más de 60 di- 14

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO visiones celulares sin anormalidades cromosómicas, y son capaces de diferenciarse in vitro e in vivo a endotelio, músculo y células del linaje neuronal 18. Células madre epidérmicas La epidermis humana está constituida por múltiples capas de queratinocitos. En su capa basal se localizan dos tipos de queratinocitos con capacidad proliferativa: células madre epidérmicas con una capacidad proliferativa ilimitada y células amplificadoras transitorias o TAC, con una capacidad proliferativa más limitada. Es posible identificar las células madre epidérmicas, y se conocen con bastante precisión los mecanismos que regulan la proliferación y diferenciación de las células madre de la epidermis. El potencial está, sin embargo, bastante restringido a producir células epidérmicas (queratinocitos y melanocitos) 19. De la epidermis humana y murina se han aislado células madre con capacidad de diferenciarse a células especializadas procedentes de dos capas embrionarias distintas. Estas células pueden mantenerse en cultivo durante más de 12 meses sin diferenciarse, y puede inducirse diferenciación in vitro a neuroectodermo (neuronas y células de la glía) o a linajes mesodérmicos (adipocitos y músculo liso). Su potencial de diferenciación a tejidos derivados del ectodermo y mesodermo ha sido demostrado a nivel clonal, pero no existen pruebas de una multipotencialidad in vivo y tampoco que los tejidos diferenciados sean funcionales. Además, el porcentaje de las células con características morfológicas neuronales o mesodérmicas es inferior al 10%. Células madre cardíacas Trabajos recientes sugieren que es posible aislar en el músculo cardíaco células madre multipotenciales capaces de diferenciarse in vitro e in vivo a cualquiera de los tejidos necesarios para reconstituir un corazón dañado, esto es, endotelio, músculo liso y músculo cardíaco 20. Incluso más sorprendente es el hecho de que dichas células son fácilmente identificables en el corazón gracias a la expresión de c-kit junto con la ausencia de expresión de marcadores específicos de línea (c-kit+ Lin-). Si estos resultados llegan a ser reproducidos por otros grupos tanto en animales como en humanos, las perspectivas terapéuticas serán extraordinarias. Células madre corneales Las células madre corneales se encuentran en la región del limbo corneal. Estas células, que se encuentran en la zona de transición entre la córnea y la esclerótica, tienen todas las características de las células madre, ya que poseen una gran capacidad de renovación, que se mantiene a lo largo de la vida, y son capaces de originar células hijas que pueden sufrir un proceso de diferenciación terminal a células especializadas. Sin embargo, no se ha podido demostrar que estas células sean pluripotentes y parece que sólo dan lugar a células del epitelio corneal y con- 15

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS TRONCALES juntival. Actualmente no existe un marcador biológico definitivo de las células madre del limbo corneal, aunque se han propuesto varios, como la alfa-enolasa y, más recientemente, el factor de transcripción p63, aunque ciertamente estos antígenos pueden aparecer en otras células. Aplicaciones clínicas de terapia celular con células madre adultas Aunque los avances en el campo de las células madre en los últimos años han sido enormes, las aplicaciones clínicas de la terapia celular con células madre son en la actualidad bastante escasas y, en cualquier caso, limitadas a la realización de ensayos clínicos y estudios de investigación. El hecho de que las células madre embrionarias produzcan tumores, junto con el hecho de que están limitadas por problemas de rechazo, ha hecho que hasta el momento únicamente se hayan iniciado estudios clínicos con células madre adultas. Las aplicaciones de las células madre las podemos dividir en dos grupos principales: en primer lugar, su potencial de diferenciación permitiría utilizarlas para regenerar tejidos destruidos o dañados, como ocurre en el caso de las enfermedades neurodegenerativas, la diabetes o la patología cardíaca; en segundo lugar, las células madre podrían ser empleadas como vehículo terapéutico de genes, por ejemplo en el caso de enfermedades monogénicas como la hemofilia o incluso como vehículo de terapias antitumorales o antiangiogénicas. En sentido amplio se ha utilizado la terapia celular en el tratamiento de la diabetes (trasplante de islotes pancreáticos), en traumatología (lesiones óseas y articulares), en enfermedades neurológicas (trasplante de neuronas dopaminérgicas fetales en la enfermedad de Parkinson), en lesiones corneales (trasplante de limbo), en enfermedades hepáticas (trasplante de hepatocitos) o en enfermedades dermatológicas (trasplante de melanocitos en el vitíligo). Terapia celular en endocrinología Recientemente, los resultados positivos obtenidos mediante el trasplante de islotes pancreáticos en pacientes diabéticos ha incrementado el interés por utilizar células capaces de producir insulina. Mientras que el escaso número de islotes y la imposibilidad de expandir dichas células in vitro impide que el trasplante de islotes de cadáver sea utilizable en un número importante de pacientes, la posibilidad de utilizar células madre con capacidad de diferenciarse en células productoras de insulina se plantearía como una estrategia mucho más atractiva 21. Aunque hasta el momento no ha sido posible caracterizar la célula madre pancreática, distintos estudios sugieren el potencial de células obtenidas a partir de hígado, conductos pancreáticos o islotes pancreáticos, o incluso células de médula ósea para producir células secretoras de insulina 22. En cualquier caso, una de las principales limitaciones con cualquiera de los tipos celulares descritos es 16

CÉLULAS MADRE ADULTAS: FUENTES, CARACTERÍSTICAS Y PERSPECTIVAS SOBRE SU USO TERAPÉUTICO que el porcentaje de células secretoras de insulina que se pueden obtener es muy pequeño, lo cual limita su aplicación terapéutica. A pesar del enorme interés en esta área de investigación, no existe ningún estudio clínico publicado utilizando células madre en pacientes con diabetes tipo I, aunque las expectativas sean enormes. Terapia celular en enfermedades neurológicas Las células madre tienen un enorme potencial como células capaces de reconstruir las neuronas y estructuras dañadas en enfermedades como el Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica, la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis en placas, los infartos cerebrales o las lesiones medulares, por mencionar algunas. En la enfermedad de Parkinson se han utilizado células de origen fetal en ensayos clínicos en humanos con resultados cuanto menos controvertidos 23. Estudios in vitro e in vivo han demostrado que tanto las células madre embrionarias como las adultas (células madre de médula ósea, células madre neurales) son capaces de diferenciarse a neuronas dopaminérgicas. Sin embargo, no está claro hasta qué punto dichas células son capaces de restablecer los circuitos neuronales destruidos en la EP y por tanto eliminar los síntomas de la enfermedad. Las lesiones medulares, principalmente secundarias a traumatismos, son una de las causas más frecuentes de patología neurológica en edades jóvenes. No existe un tratamiento curativo para esta enfermedad incapacitante, por lo que la posibilidad de utilizar células madre para restablecer las conexiones axonales aparece como una estrategia especialmente atractiva. Estudios recientes sugieren que las células madre embrionarias poseen la capacidad de diferenciarse a neuronas motoras y facilitar la recuperación motora en animales con lesiones espinales 24. Sin embargo, parece que el mecanismo por el que dichas células contribuyen a restablecer las neuronas motoras estaría relacionado con la liberación de factores de crecimiento que contribuirían al recrecimiento de los axones destruidos. Otros tipos celulares, como las células de la glía envolvente o las células mesenquimales (o estromales) de la médula ósea, también han demostrado su capacidad para favorecer el recrecimiento de los axones, tal como se ha demostrado en modelos animales 25. La esclerosis múltiple es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la degeneración de las células productoras de mielina (oligodendrocitos) y que se manifiesta por una afectación tanto motora como sensitiva como consecuencia de la desmielinización de los axones. Se ha explorado en modelos animales la posibilidad de favorecer la formación de mielina mediante la utilización de células madre capaces de diferenciarse a oligodendrocitos. Un estudio reciente ha podido demostrar en un modelo de esclerosis múltiple en ratón (encefalitis autoinmune experimental) que la inyección de neuroesferas (células madre neurales), tanto por vía intravenosa como intratecal, promueve la remielinización 17