Agrociencia ISSN: 1405-3195 agrocien@colpos.mx Colegio de Postgraduados México

Agrociencia ISSN: 1405-3195 agrocien@colpos.mx Colegio de Postgraduados México Ramírez Molina, Ana J.; Martínez Rojero, Rubén D.; Mejía Villanueva, Octavio; Soto Camargo, Rodolfo Modificación de la técnica de inseminación artificial intrauterina mediante laparoscopía en ovejas pelibuey Agrociencia, vol. 39, núm. 6, noviembre-diciembre, 2005, pp. 589-593 Colegio de Postgraduados Texcoco, México Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=30239601 Cómo citar el artículo Número completo Más información del artículo Página de la revista en redalyc.org Sistema de Información Científica Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

MODIFICACIÓN DE LA TÉCNICA DE INSEMINACIÓN ARTIFICIAL INTRAUTERINA MEDIANTE LAPAROSCOPÍA EN OVEJAS PELIBUEY MODIFICATION OF INTRAUTERINE ARTIFICIAL INSEMINATION TECHNIQUE BY LAPAROSCOPY IN PELIBUEY EWES Ana J. Ramírez-Molina 1, Rubén D. Martínez-Rojero 1, Octavio Mejía-Villanueva 2 y Rodolfo Soto-Camargo 1 1 Coordinación de Zootecnia. Colegio Superior Agropecuario del Estado de Guerrero. Avenida Guerrero Núm. 81. 40000. Centro. Iguala, Guerrero. (csaegro@prodigy.net.mx). 2 Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Ovina-Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. km 53.1. Carretera Federal México-Cuernavaca, Tres Marías, Morelos. RESUMEN ABSTRACT El objetivo de este estudio fue evaluar la tasa de fertilidad de ovejas Pelibuey inseminadas intrauterinamente con laparoscopio utilizando aspic (Grupo IA-aspic) o modificando la técnica utilizando un catéter intravenoso (Grupo IA-catéter). Se utilizaron 21 ovejas Pelibuey adultas ciclando e inseminadas a tiempo fijo con semen descongelado mediante laparoscopio, 48 h después retirar las esponjas. Los estros fueron sincronizados con esponjas intravaginales (40 mg acetato de flurogestona) durante 11 d, más una inyección intramuscular de 200 UI de ecg al remover las esponjas. Se hizo análisis de varianza y la prueba de χ 2 para los datos. El tiempo requerido por oveja inseminada (2.60±0.56 min) fue menor (p 0.001) para el Grupo IA-aspic, comparado con el tiempo de inseminación para el Grupo IA-catéter (6.01±0.48 min por oveja), pero no hubo diferencia (p>0.05) para la tasa de fertilidad entre IA-aspic (40.0%) e IA-catéter (50.0%). Se concluye que la fertilidad fue similar con la técnica del aspic y la del catéter; sin embargo, el tiempo promedio por oveja inseminada fue significativamente menor con la técnica del aspic. The objective of this study was to evaluate the fertility rate of Pelibuey ewes when applying intrauterine insemination with laparoscopy utilizing aspic (AI-aspic Group), or modifying the technique utilizing an intravenous catheter (AI-catheter Group). Timed insemination by laparoscopy with defrosted semen was practiced on 21 cycling adult Pelibuey ewes 48 h after removing the sponges. For estrus synchronization, the females were treated with intra-vaginal sponges (with 40 mg of flurogestone acetate) for 11 days, plus an intramuscular injection of 200 IU of ecg when the sponges. Data were subjected to analysis of variance and χ 2 test. The average time per inseminated ewe (2.60±0.56 min) was less (p 0.001) for the AI-aspic Group than the insemination time for AI- catheter Group (6.01±0.48 min per ewe), but there was no difference (p>0.05) for the fertility rate between AI-aspic (40.0%) and AI-catheter (50.0%). It was concluded that fertility was similar at employing aspic or catheter technique; however, the average time per inseminated ewe was significantly shorter utilizing the aspic technique. Palabras clave: Ovis aries, inseminación laparoscópica. Key words: Ovis aries, laparoscopic insemination. INTRODUCCIÓN El uso de técnicas de inseminación pericervical, intracervical y transcervical en ovejas, utilizando semen congelado, induce bajas tasas de fertilidad (Maxwell y Hewitt, 1986; Buckrell et al., 1994). Esto se atribuye a que la estructura anatómica del canal cervical en la oveja presenta varios anillos que limitan el paso de la pipeta para inseminación artificial (IA) hacia el útero (Maxwell y Butler, 1984), y a que la descongelación del semen del carnero produce capacitación prematura del espermatozoide (Gillan y Maxwell, 1998). Por tanto, el semen conserva una alta capacidad fertilizante sólo cuando Recibido: Agosto, 2004. Aprobado: Agosto, 2005. Publicado como NOTA en Agrociencia 39: 589-593. 2005. INTRODUCTION The use of pericervical, intracervical, and transcervical insemination techniques in ewes utilizing frozen semen causes low fertility rates (Maxwell and Hewitt, 1986; Buckrell et al., 1994). This is because the anatomical structure of the cervical canal in the ewe has several rings limiting the pass of the pipette towards the uterus for artificial insemination (AI) (Maxwell and Butler, 1984); besides, the defrosting of the ram s semen provokes premature capacity of the spermatozoid (Gillan and Maxwell, 1998). Therefore, the semen conserves high fertilizing capacity only when deposited in the uterus next to the oviduct, close to the moment of ovulation. Maxwell and Hewitt (1986) found that intrauterine AI with laparoscopy in ewes, utilizing aspics (Azzarini, 1086), induces higher fertility levels 589

AGROCIENCIA, NOVIEMBRE-DICIEMBRE 2005 se deposita intrauterinamente cerca del oviducto, próximo al momento de la ovulación. Maxwell y Hewitt (1986) encontraron que la IA intrauterina con laparoscopio en ovejas utilizando aspics (Azzarini, 1986), induce niveles de fertilidad más altos que los obtenidos por inseminación vaginal, pericervical y transcervical, independientemente de si se utiliza semen fresco o congelado. Los aspics son importados, su adquisición y comercialización es difícil y su uso incrementa el costo por animal inseminado. Una alternativa para superar lo anterior sería utilizar catéteres endovenosos para la inseminación intrauterina, con exteriorización del cuerno uterino mediante una pinza de Babcock, utilizando el endoscopio. Sin embargo, es necesario evaluar si ésto interfiere con la fertilidad subsecuente cuando se insemina a tiempo fijo. Las IA se hacen sobre estros detectados; sin embargo, uno de los objetivos de la sincronización de celos es realizar inseminaciones a tiempo fijo para reducir el costo de mano de obra, el uso de receladores y de manejo de animales, sobre todo al inseminar rebaños numerosos. Por esta razón debe evaluarse también el tiempo requerido por animal para depositar el semen con catéter o con aspic. El objetivo de este estudio fue evaluar la tasa de fertilidad en ovejas Pelibuey inseminadas intrauterinamente a tiempo fijo con semen congelado mediante laparoscopio y aspic, o modificando la técnica utilizando catéter endovenoso; además de comparar el tiempo requerido por inseminación entre una y otra técnica. MATERIALES Y MÉTODOS El estudio se realizó durante el otoño de 2002 en el Colegio Superior Agropecuario del Estado de Guerrero, ubicado a 18 15 N y 99 38 O. El clima se clasifica como Awo(w)(i )g, trópico seco con lluvias en el verano sin estación invernal definida, temperatura media anual de 23 C y precipitación media anual de 797 mm (García, 1988). Se utilizaron 21 ovejas Pelibuey multíparas ciclando, en una pradera de Estrella Africana (Cynodon plectostachyus) de 07:00 a 13:00 h. El resto del día estaba estabuladas un corral techado donde recibieron agua ad libitum y alimento concentrado (200 g animal 1 d 1 ), conteniendo 14.0% proteína cruda y 3.2 Mcal ED kg 1 MS. Para ser sincronizadas en estro, las ovejas recibieron durante 11 d una esponja intravaginal con 40 mg de acetato de flurogestona (FGA), más una inyección intramuscular de 200 UI de gonadotropina sérica (ecg) al extraer las esponjas. Las hembras fueron inseminadas a tiempo fijo por un mismo técnico 48 h después de retiradas las esponjas, utilizando aspic (Grupo IA-aspic; n=15), o modificando la técnica usando catéter intravenoso (Grupo IA-cateter; n=6). La cantidad de ovejas que integraron ambos grupos se constituyó de acuerdo al número de hembras que pudieron ser inseminadas de manera alterna (la primera con aspic y la segunda con catéter, y así sucesivamente), con cada técnica. than those obtained by vaginal, pericervical, and transcervical insemination, independently, whether fresh or frozen semen is utilized. The aspics are imported goods, their purchase and commercialization are difficult, and their use increases the cost per inseminated animal. An alternative to avoid this situation would be to utilize intravenous catheters for intrauterine insemination, with exteriorization of the uterine horn by means of a Babcock clamp, using the endoscope. However, it is necessary to assess if this interferes with subsequent fertility when insemination is timed. AI are made when estrus are detected; however, one of the objectives of estrus synchronization is to carry out timed inseminations in order to reduce the cost of labor, the use of marker rams and animal management, especially when inseminating numerous flocks. Therefore, also the time required per animal to deposit the semen with catheter or with aspic, must be determined. The objective of this study was to evaluate the fertility rate in Pelibuey ewes at applying timed intrauterine insemination with frozen semen by means of laparoscopy and aspic, or modifying the technique utilizing an intravenous catheter; furthermore, to compare the time required per insemination, between one technique and the other. MATERIALS AND METHODS The study was carried out during fall 2002 at the Colegio Superior Agropecuario of the State of Guerrero, located at 18 15 N and 99 38 W. The climate is classified as Awo(w) (i ) g, tropical dry, with rainfalls in the summer, without well-defined winter season, annual mean temperature of 23 C and annual mean precipitation of 797 mm (García, 1988). Twenty-one cycling multiparous Pelibuey ewes were utilized, on African Star (Cynodon plectostachyus) prairie from 7:00 to 13:00 h. The rest of the day, they were stabled in a roofed corral, where they received water ad libitum and concentrate feedstuff (200 g animal 1 d 1 ), containing 14.0% crude protein and 3.2 Mcal DE kg 1 DM. For estrus synchronization, during 11 d the ewes received an intravaginal sponge with 40 mg of flurogestone acetate (FGA) plus an intramuscular injection of 200 UI of serum gonadotropin (ecg) at removing the sponges. The ewes were subjected to timed insemination by the same technician 48 h after withdrawing the sponges, utilizing aspic (AIaspic Group; n=15), or modifying the technique, using an intravenous catheter (AI-catheter Group; n=6). The number of sheep integrating both groups was formed according to the number of ewes being able to be inseminated alternately (the first one with aspic, and the second with catheter, and so on), with each technique. For both techniques, laparoscopy was utilized, for which all the ewes were dieted for 36 h before being subjected to intrauterine insemination with frozen semen (pipettes of 0.25 ml with 90 million spermatozoids). For pre-anesthetic tranquilizing xilacine hydrochloride at 2% (0.1 ml 10 kg 1 live weight) was applied by intramuscular injection. Ketamine (0.2 ml 10 kg 1 live weight) was applied 590 VOLUMEN 39, NÚMERO 6

MODIFICACIÓN DE LA TÉCNICA DE INSEMINACIÓN ARTIFICIAL INTRAUTERINA MEDIANTE LAPAROSCOPIA EN OVEJAS PELIBUEY Para ambas técnicas se utilizó laparoscopio, por lo cual todas las ovejas se dietaron 36 h antes de ser inseminadas intrauterinamente con semen congelado (pajillas de 0.25 ml, con 90 millones de espermatozoides). Para la tranquilización preanestésica se aplicó hidrocloruro de xilacina a 2% (0.1 ml 10 kg 1 peso vivo) vía intramuscular. Como anestésico se aplicó Ketamina (0.2 ml 10 kg 1 peso vivo) vía endovenosa, 10 min después de administrar el clohidrato de xilacina (Mejía, 1997). Una vez anestesiadas, las ovejas fueron colocadas decúbito dorsal (10 min en promedio por animal) en una mesa para cirugía, reclinada a un ángulo de 45 con la cabeza del animal hacia abajo, con el propósito de inducir el desplazamiento de las vísceras hacia el diafragma, para evitar daños al introducir la aguja de Verres y los trocar-cánula en la pared del abdomen y, a la vez, para descubrir al útero del omento mayor (Mejía, 1997). En el área desinfectada del abdomen se hicieron tres incisiones; una pequeña (5 cm) a la izquierda de la ubre, donde se introdujo la aguja de Verres para insuflar aire en la cavidad abdominal, con objeto de distenderla y permitir una buena visibilidad del útero con la lente del endoscopio; después, dos incisiones de mayor tamaño paralelamente a la línea media del abdomen, a 4 cm de ella y aproximadamente a 8 cm del borde anterior de la ubre. Por la incisión de la derecha se insertó un trocar-cánula, a través del cual se introdujo la lente del endoscopio, mientras que por la incisión del lado izquierdo se incrustó el trocar-cánula por donde se introdujeron los aspic con la pistola de inseminación conteniendo la pajilla de semen descongelado para depositarlo en el cuerno uterino ipsilateral al cuerpo lúteo (IA-aspic); o bien, se introdujo una pinza de toma Babcock para atrapar y extraer el cuerno uterino fuera de la cavidad abdominal y depositar la dosis de semen descongelado dentro de su lumen con el catéter endovenoso 18G 1 (IA-catéter). Cuando se utilizó aspic, el semen fue descongelado retirando las pajillas del nitrógeno líquido en el termo, e introduciéndolas inmediatamente en baño María a 37 C durante 20 s (Valencia, 1997). Una vez descongelada, la pajilla se secó y se cortó por el extremo sellado con alcohol polivinílico, antes de ser colocada dentro del aspic. Para el catéter el semen se extrajo de la pajilla una vez descongelado (37 C por 20 s). Antes de depositar el semen dentro del útero se evaluó la motilidad y viabilidad de los espermatozoides, con una pequeña muestra del semen descongelado sobre un portaobjetos precalentado a 37 C en un microscopio (10X) (Evans y Maxwell, 1990). Luego, el semen fue absorbido con una jeringa para insulina a la que se le insertó el catéter intravenoso, y finalmente se depositó en el lumen del cuerno uterino. Se cuidó que la temperatura del catéter y de la jeringa no bajara de 30 C. El tiempo promedio requerido (en minutos) por oveja inseminada para cada técnica evaluada se registró a partir de que las hembras fueron colocadas sobre la mesa para cirugía; mientras que la tasa de fertilidad (ovejas paridas/ovejas inseminadas) para cada tipo de inseminación se determinó al registrarse la ocurrencia o no del parto. La diferencia en el tiempo promedio por oveja inseminada entre tratamientos se evaluó mediante un análisis de varianza, pero la tasa de fertilidad fue comparada entre técnicas de inseminación evaluadas por una prueba de χ 2 (Steel y Torrie, 1986). intravenously as anesthetic, 10 min after administering xilacine hydrochloride (Mejía, 1997). Once anesthetized, the ewes were placed in dorsal position on a surgery table (10 min on average per animal), leaning back at an angle of 45, the animal s head downwards, with the purpose to cause the viscera to move towards the diaphragm, in order to avoid harm at introducing the Verres needle and the trocarcannula in the wall of the abdomen, and at the same time to uncover the uterus from the major mesentery (Mejía,1997). In the disinfected area of the abdomen three incisions were made, a small one (5 cm) on the left of the udder, where the Verres needle was introduced to insufflate air into the abdominal cavity, with the purpose to distend it and permit good visibility of the uterus through the endoscope lens. Afterwards, two incisions of greater size were made, parallel to the middle line of the abdomen, at 4 cm distance from it and approximately 8 cm from the front edge of the udder. By the incision on the right a trocar-cannula was inserted, through which the endoscope lens was introduced, while by the incision on the left the trocar-cannula got embedded, where the doses of aspic were introduced with the insemination pistol, containing the pipette with defrosted semen to deposit it in the uterine horn, ipsilateral to the corpus luteum (AI-aspic); or using the other method, the Babcock clamp was introduced to get hold of the uterine horn and remove it from the abdominal cavity, to place the dose of defrosted semen on a pre-heated microscope slide (37 C), and to deposit it in the lumen with the 18G 1 intravenous catheter (AI-catheter). When aspic was utilized, the semen was defrosted removing the pipettes from the liquid nitrogen in the thermos and introducing them immediately in a double boiler at 37 C during 20 s (Valencia, 1997). Once defrosted, the pipette was dried and cut at the end sealed with polyvinyl alcohol, before being placed within the aspic. For the catheter, the semen was extracted from the pipette once defrosted (37 C for 20 s). Before depositing the semen within the uterus, spermatozoa motility and viability was evaluated using a small sample of defrosted semen on a microscope slide, preheated to 37 C, under a microscope (10X) (Evans and Maxwell, 1990). Then the semen was absorbed with an insulin syringe, to which the intravenous catheter was inserted, and finally deposited in the lumen of the uterine horn. Care was taken that the temperature of the catheter and the syringe did not go below 30 C. The average time required (in minutes) per inseminated ewe for each of the techniques evaluated was registered from the moment the females were placed on the surgery table, while the fertility rate (lambing ewes/inseminated ewes) for each type of insemination was determined by the record of occurrence or not of parturition. The difference of average time per inseminated ewe among treatments was evaluated by analysis of variance, but the fertility rate was compared between insemination techniques, evaluated by χ 2 test (Steel and Torrie, 1986). RESULTS AND DISCUSSION The time required per inseminated ewe was 2.60±0.56 min when aspic was utilized (15 sheep in 39 min), which was less (p 0.001) than 6.01±0.48 min per ewe RAMÍREZ-MOLINA et al. 591

AGROCIENCIA, NOVIEMBRE-DICIEMBRE 2005 RESULTADOS Y DISCUSIÓN El tiempo requerido por oveja inseminada fue 2.60±0.56 min cuando se utilizó aspic (15 ovejas en 39 min), que fue menor (p 0.001) que los 6.01±0.48 min por oveja inseminada con catéter intravenoso (6 ovejas por 36.1 min). Esto es importante, ya que la reducción en tiempo representa una ventaja cuando se inseminan ovejas a tiempo fijo. No obstante, el tiempo por oveja inseminada depende también de la habilidad y experiencia del técnico en el uso del endoscopio. Aunque no se encontraron informes relacionados con el tiempo requerido para realizar una IA intrauterina con laparoscopio utilizando aspics en ovejas, Buckrell et al., (1994) mencionaron que el tiempo promedio requerido para manejar e inseminar por vía transcervical una oveja fue 5.8 min. No se encontró diferencia (p>0.05) para la tasa de fertilidad entre los Grupos IA-aspic (40.0%) e IA-catéter (50.0%). Con la primera técnica existe poca manipulación del útero al depositar el semen en este órgano dentro de la cavidad abdominal con el aspic, lo que supondría obtener una mayor tasa de fertilidad. Los resultados sugieren que no ocurrió un efecto adverso sobre la fertilidad, como consecuencia de la manipulación del útero al ser extraído con la pinza de Babcock a través de una cánula de la cavidad abdominal el cuerno ipsilateral al cuerpo lúteo, para realizar la inseminación intrauterina con catéter. Se supondría que esto provocaría que el óvulo quedara fuera de la fimbria del oviducto, perdiéndose así la posibilidad de ser fecundado. Adicionalmente, cuando se utiliza catéter, el mayor número de pasos secuenciales requeridos para descongelar, extraer y colocar el semen de la pajilla sobre un cubreobjetos, succionarlo con el catéter unido a la jeringa y depositarlo en el útero, podría incrementar la mortalidad de los espermatozoides. Sin embargo, las tasas de fertilidad encontradas en este estudio sugieren la posibilidad de elegir cualquiera de ambos dispositivos para inseminación intrauterina, con base en características como facilidad de manejo, costo y disponibilidad en el mercado del material, entre otras. Aunque en la literatura revisada se encontraron pocos estudios sobre IA intrauterina laparoscópica a tiempo fijo en ovejas, las tasas de fertilidad registradas en este trabajo para los dispositivos aspic (40.0%) o catéter intravenoso (50.0%) son ligeramente menores al 59.3% de preñez (de 54% al 80%) registrado por Cruz et al. (2001) en ovejas sincronizadas en estro con esponjas intravaginales de FGA (40 mg), más 200 UI de ecg intramuscular al retirar el progestágeno, e inseminadas intrauterinamente con aspic a tiempo fijo 56 h después de remover las esponjas. Sin embargo, estos autores utilizaron semen refrigerado (50 y 100 millones de inseminated with intravenous catheter (6 ewes per 36.1 min). This is important, since the time reduction is an advantage when the ewes are subjected to timed insemination. However, time per inseminated ewe also depends on the technician s ability and experience in the use of the endoscope. Though information related to the time required for an intrauterine AI with laparoscope in ewes, utilizing aspic, was not found, Buckrell et al. (1994) indicated that the average time required to practice transcervical insemination on one ewe was 5.8 min. There was no difference (p>0.05) for fertility rate between AI-aspic (40.0%) and AI-catheter Groups (50.0%). With the first technique, there is little manipulation of the uterus at depositing the semen inside the abdominal cavity with aspic, which permits to assume that a higher fertility rate may be obtained. The results suggest that there was no adverse effect on fertility as a consequence of uterus manipulation, when the horn ipsilateral to the corpus luteum was extracted from the abdominal cavity with a Babcock clamp through a cannula, in order to practice intrauterine insemination with catheter. It could be assumed that this might provoke the ovule to stay outside the fimbria of the oviduct, thus losing the possibility of being fertilized. Additionally, at using the catheter, the larger number of sequential steps required for defrosting, extracting, and depositing the semen of the pipette on a microscope slide, sucking it up with the catheter attached to a syringe, and placing it in the uterus, might increase the mortality of the spermatozoids. However, the fertility rates found in this study suggest the possibility of choosing any of both devices for intrauterine insemination, based on characteristics such as facility of management, cost of the material, and its availability on the market, among others. Though in the reviewed literature few studies were found about timed laparoscopic intrauterine AI in ewes, the fertility rates registered in this work for aspic (40.0%) or intravenous catheter (50.0%) devices, are slightly lower than the 59.3% of pregnancy (from 54% to 80%) recorded by Cruz et al. (2001) for estrus synchronized ewes with intravaginal sponges of FGA (40 mg), plus 200 UI of intramuscular ecg at removing progestagens and with timed intrauterine insemination with aspic, 56 h after removing the sponges. Nevertheless, these authors utilized refrigerated semen (50 and 100 million spermatozoids per dose), situation which normally leads to better pregnancy rates than at using defrosted semen. Pregnancy and fertility rates higher than those observed in this study, have been found in ewes with intrauterine insemination by endoscope with detected estrus. Rangel et al. (2000a) obtained moderate fertility rates (pellets=62.5% vs. pipettes=68.7%) when 592 VOLUMEN 39, NÚMERO 6

MODIFICACIÓN DE LA TÉCNICA DE INSEMINACIÓN ARTIFICIAL INTRAUTERINA MEDIANTE LAPAROSCOPIA EN OVEJAS PELIBUEY espermatozoides por dosis), situación que normalmente conduce a mejores tasas de preñez que cuando se utiliza semen descongelado. Tasas de preñez y de fertilidad mayores a las observadas en este estudio se han encontrado en ovejas inseminadas intrauterinamente mediante endoscopio con estro detectado. Rangel et al. (2000a) obtuvieron tasas de fertilidad moderadas (pellets=62.5% vs pajillas=68.7%) al inseminar ovejas con semen congelado (150 millones de espermatozoides por dosis) 12 h después de haber sido detectadas en estro. Rangel et al. (2000b) también encontraron índices de preñez de 63.3 y 82.8% en ovejas inseminadas con semen congelado (100 millones de espermatozoides por dosis) a 12 h de detectado el estro, utilizando aspic o aguja de acero, respectivamente. Además, en ovejas inseminadas por vía intrauterina, 24 h después de ser detectadas en estro, la tasa de preñez fue 63.26%, que es mayor al índice de fertilidad registrado en este estudio (Aguilera et al., 2001). CONCLUSIONES No hubo diferencias en la tasa de fertilidad observada en ovejas Pelibuey multíparas cuando se inseminaron intrauterinamente a tiempo fijo con semen descongelado mediante laparoscopio y aspic, o bien, utilizando el catéter. El tiempo promedio por oveja inseminada fue significativamente menor cuando se utilizó aspic. LITERATURA CITADA Aguilera M., J. Jorge, T. Echegaray, L. José, D. Olivera D., y G. Terán G. 2001. Inseminación artificial con semen refrigerado en ovejas. In: Memorias del II Congreso Latinoamericano de Especialistas en Pequeños Rumiantes y Camélidos Sudamericanos y XI Congreso Nacional de Producción Ovina. Mérida, Yucatán, México. Azzarini, M. 1986. Laparoscopia en ovejas, descripción de la técnica y sus principales usos. Secretariado Uruguayo de la Lana. Boletín Técnico 14: 13-16. Buckrell, B. C., C. Buschbeck, C. Garley, T. Kroetsch, W. McCutcheon, J. Martín, W. Penner, and J. Walton. 1994. Further development of a transcervical technique for artificial insemination in sheep using previously frozen semen. Theriogenology 42: 601-611. Cruz, T. A., L. Navarrete L., J. Ortiz O., J. Ramón U., A. Aguiar L., S. Erosa D., y A. Aguayo A. 2001. Inseminación cervical e intrauterina en ovejas de pelo. Memorias del II Congreso Latinoamericano de Especialistas en Pequeños Rumiantes y Camélidos Sudamericanos y XI Congreso Nacional de Producción Ovina. Mérida, Yucatán, México. Evans, G., y C. Maxwell W. 1990. Conservación de semen congelado. In: Inseminación Artificial en Ovejas y Cabras. Evnas, G. y C. Maxwell W. (eds). Edit. Acribia, Zaragoza, España. pp: 123-142. García, E. 1988. Modificaciones al Sistema de Clasificación Climática de Köppen, para Adaptarlo a las Condiciones de la República inseminating ewes with frozen semen (150 million spermatozoids per dose) 12 h after estrus being detected. Rangel et al. (2000b) also found pregnancy indices of 63.3 and 82.8% in ewes inseminated with frozen semen (100 million spermatozoids per dose) at 12 h after estrus being detected, utilizing aspic or steel needle, respectively. Besides, in ewes treated with intrauterine insemination 24 h after estrus detection, the pregnancy rate was 63.26%, fertility index higher than the one registered in this study (Aguilera et al., 2001). CONCLUSIONS There were no differences in fertility rates observed in multiparous Pelibuey ewes, when timed intrauterine insemination with defrosted semen was applied by means of laparoscopy and aspic, or utilizing the catheter. The average time per inseminated ewe was significantly shorter when aspic was utilized. End of the English version Mexicana. Instituto de Geografía. Universidad Nacional Autónoma de México. México, D. F. 246 p. Gillan I., and M. C. Maxwell W.1998. The functional integrity and fate of cryopreserved ram spermatozoa in the female tract. V International Symposium on Reproduction in Domestic Ruminants. J. Reprod. Fertil. Suppl. 54: 271-283. Maxwell, W. M. C., and L. Butler. 1984. Intrauterine insemination of ewes with frozen semen. J. Agric. Sci. 102: 233-235. Maxwell, M. C., and J. Hewitt L. 1986. A comparison of vaginal, cervical and intrauterine insemination of sheep. J. Agric. Sci. 106: 191-193. Mejía, V. O. 1997. Transferencia de embriones en pequeños rumiantes. In: Memorias del Curso de Manejo Reproductivo e Inseminación Artificial en Pequeños Rumiantes. Amaya, M. A. A., P. R. Díaz G., M. Figueroa G., G. Hernández O., y P. Raña G. (eds). Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM. México, D.F., México. pp: 79-85. Rangel, S. R., C. A. Apodaca S., R. Rodríguez de L., J. G. García M., J. G. Ávila O., J. Ayala O., y J. Armendáriz M. 2000a. Fertilidad de ovejas inseminadas con semen congelado. In: Memorias de la XXVIII Reunión Anual de la Asociación Mexicana de Producción Animal. Tapachula, Chiapas, México. pp: 115-118. Rangel, S. R., R. Rodríguez de L., C. Apodaca S., J. G. García M., J. Ayala O., y J. Armendáriz M. 2000b. Fertilidad de ovejas inseminadas con dos dispositivos de inseminación. In: Memorias de la XXVIII Reunión Anual de la Asociación Mexicana de Producción Animal. Tapachula, Chiapas, México. pp: 119-121. Steel, R. G. D., y J. Torrie J.1986. Bioestadística, Principios y Procedimientos. 2 a ed. Interamericana McGraw-Hill. México. 633 p. Valencia, M. J. 1997. Dilución y congelación de semen caprino. In: Memorias del Curso de Manejo Reproductivo e Inseminación Artificial en Pequeños Rumiantes. Amaya, M. A. A., P. R. Díaz G., M. Figueroa G., G. Hernández O., y P. Raña G. (eds). Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM. México, D. F., México. pp: 60-66. RAMÍREZ-MOLINA et al. 593